DHA藻油与阿尔茨海默病相关性研究

李 迅，陈 涛

(1.华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院 检验科，武汉430014； 2.中国科学院 武汉病毒研究所，武汉 430071)

我国拥有丰富的油料资源，利用特种油料生产的功能性食用油含有丰富的不饱和脂肪酸和多种生理活性物质，具有很高的营养价值。依靠特种油料开发的食用油品种繁多，但对于某些特定的营养成分，尤其是ω-3系的二十二碳六烯酸(DHA)多不饱和脂肪酸，含量很少[1]。DHA是大脑皮层的主要脂肪酸，占人体大脑皮层的20%，是大脑皮层中不可缺少的基本组成物质。DHA对人体健康有着特殊的功能，被誉为“脑黄金”。一般鱼油中DHA的含量很少，而深海鱼油中所含的DHA是鱼长期食用含有DHA的藻类在脂肪中积累的[2]。应用生物工程技术可以通过海洋微藻合成DHA，现已从培养的微藻中生产出DHA藻油[3]。

阿尔茨海默病是一种渐进性神经退化失调症，阿尔茨海默病患者的病理改变为神经元缺失、神经纤维缠结(NFTs)和老年斑(SP)的出现。阿尔茨海默病的发病机制复杂，目前较能被接受的病理为胆碱能缺失学说，该学说认为阿尔茨海默病患者大脑内的神经递质——乙酰胆碱(ACh)的缺失是致病的关键原因[4]。乙酰胆碱是一种神经递质，能特异性作用于各类胆碱受体。乙酰胆碱对记忆力十分重要，如果大脑缺乏这种物质，大脑就无法储存新信息(记忆)，无法正常运转。研究表明，乙酰胆碱在大脑皮层内含量增加与阿尔茨海默病症状改善明显相关[5]。

DHA藻油对阿尔茨海默病有较好的预防作用[6]。DHA藻油不仅为人体提供营养元素，还可延缓阿尔茨海默病和防治心脑血管疾病[7]。本文以花生营养调和油、DHA藻油及微生物ARA油调配，饲喂SD大鼠，检测其脑组织的乙酰胆碱水平，研究DHA藻油对SD大鼠大脑皮层的影响，以期为DHA藻油的开发利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

SD大鼠，来源于湖北省实验动物研究中心，采用18个月中老年SD大鼠(相当于人类年龄60岁左右)。

花生营养调和油来源于油谷生物科技(南京)有限公司，由花生油、核桃油、亚麻籽油、橄榄油等植物油组成。花生营养调和油脂肪酸组成为棕榈酸10.5%、硬脂酸3.30%、油酸40.9%、亚油酸29.9%、α-亚麻酸6.52%、ARA 0.89%、DHA 1.07%，其ω6/ω3约为4∶1，符合《中国居民膳食营养素参考摄入值》中建议的推荐值。

DHA藻油(DHA含量40%)、微生物ARA油(ARA含量40%)，由嘉必优生物技术(武汉)股份有限公司提供。

科研用大鼠乙酰胆碱检测试剂盒(南京金益柏)，UV-2550 型分光光度计(日本岛津)，MK3酶标仪(Thermo)，MK2洗板机(Thermo)，BY-LR320型低速离心机(白洋)，旋涡VORTEX 2混匀器(IKA)，移液器(Thermo)，37℃恒温水浴箱等。

1.2 试验方法

1.2.1 动物试验

将SD大鼠在室内分笼饲养，观察其正常，进行试验。将SD大鼠分为5组，每组7只，将花生营养调和油、DHA藻油、微生物ARA油按表1调配，灌胃大鼠，每只灌胃剂量3 mL/d，连续8周，每周5 d(周六、周日除外)，每天按养鼠标准提供普通饲料。

表1 SD大鼠的分组

1.2.2 乙酰胆碱水平的测定

采用水合氯醛对大鼠实施麻醉后处死断头，迅速开颅取出脑组织并称重，在冰浴条件下用匀浆器匀浆，用0.9%生理盐水稀释配成10%的匀液，放入离心机于3 500 r/min离心10 min，取上清液，4℃冰箱保存备用。

根据酶联免疫吸附法(ELISA)原理按照乙酰胆碱检测试剂盒测定乙酰胆碱水平。以乙酰胆碱标准品550 nm处的OD值(x)为横坐标，乙酰胆碱标准品的质量浓度(y)为纵坐标，绘制标准曲线，并得到回归方程为y=1 158.9x-122.53(R2=0.997 6)。

乙酰胆碱水平=乙酰胆碱的质量浓度/蛋白定量

1.2.3 数据统计

2 结果与讨论

2.1 SD大鼠脑组织乙酰胆碱水平的比较(见表2)

从表2可以看出，阴性对照组与治疗低、中、高剂量组和阳性对照组的乙酰胆碱水平有极显著差异，而阳性对照组与治疗低、中、高剂量组之间也存在极显著差异。阴性对照组乙酰胆碱水平最低，为29.47 μg/mg，阳性对照组最高，为159.05 μg/mg，治疗组乙酰胆碱水平从低到高依次为治疗低剂量组、治疗中剂量组、治疗高剂量组，与DHA藻油添加量呈正相关。

表2 SD大鼠脑组织乙酰胆碱水平的比较 μg/mg

2.2 讨论

阿尔茨海默病诱发病因多样,已形成胆碱能假说[8]、淀粉样蛋白假说[9]等多类学说。阿尔茨海默病患者中枢神经系统胆碱神经功能明显下降，并且其临床症状的严重程度和胆碱能系统的活性密切相关,这是胆碱能假说的核心[10]。乙酰胆碱是人类记忆的痕迹，胆碱能系统受损，则全面影响人类的学习和记忆等功能[11]。而阿尔茨海默病患者胆碱能缺陷，胆碱能神经元丢失，胆碱能相关合成酶活性降低，乙酰胆碱的合成、存储以及释放减少，且乙酰胆碱受体数目减少，这些都使其产生学习、记忆、认知方面的多种障碍[12-14]。

本文通过以上试验结果可以得出，添加DHA藻油的花生营养油调和可以提高中老年SD大鼠脑组织中的乙酰胆碱水平，而且随着DHA藻油的添加量增加，乙酰胆碱水平升高，这在一定程度上能够提高中老年SD大鼠的记忆能力，延缓智力下降，说明DHA可以延缓大脑细胞的凋亡，对预防阿尔茨海默病有着重要的作用。

3 结 论

通过检测SD大鼠脑组织乙酰胆碱水平，研究DHA藻油与阿尔茨海默病的相关性。结果表明，灌胃含有DHA藻油的花生营养调和油可使中老年SD大鼠脑组织中乙酰胆碱水平上升，且DHA藻油添加量与乙酰胆碱水平呈正相关，各治疗组与阴、阳性对照组比较差异极显著(P<0.01),从而推测DHA藻油对阿尔茨海默病患者的症状有一定改善作用。