蒙药协日嘎洗剂抑菌实验研究

都日娜，乌日娜

协日嘎洗剂的原处方来源于《中华人民共和国卫生部药品标准蒙药分册》[1]，其处方由姜黄、黄柏、栀子、蒺藜四味药材组成，具有利尿、泻湿热的作用。蒙医临床应用协日嘎四味汤散治疗小便闭止、尿频、尿急。据文献报道协日嘎四味汤散中4种药材的有效成分具有良好的抗菌、抗炎和修复创伤的功效[2,3]，因此我们将其改制成外用洗剂，对临床常见真菌、细菌进行抑菌试验，观察其抑菌作用，筛选出最佳的抑菌浓度，为临床治疗感染性皮肤病提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 菌种 ①实验用医学真菌：白念珠菌（编号ATCC11006）、红色毛癣菌、石膏样小孢子菌、羊毛样小孢子菌、犬小孢子菌、马拉色菌属（编号CMCC(F)1/17a），其中白念珠菌为内蒙古医学院微生物实验室提供的标准菌株；红色毛癣菌、石膏样小孢子菌、羊毛样小孢子菌及犬小孢子菌为内蒙古医学院第一附属医院皮肤科提供的临床菌株；马拉色菌属为中国医学科学院皮肤病研究所提供的标准菌株。②实验用医学细菌：金黄色葡萄球菌(编号26003)、炭疽杆菌（编号63601）、白色葡萄球菌（编号26101）、变形杆菌（编号49001）、绿脓杆菌（编号为10102）、耐药大肠杆菌，其中耐药大肠杆菌由内蒙古医学院第一附属医院检验科提供；金黄色葡萄球菌、炭疽杆菌、白色葡萄球菌、变形杆菌、绿脓杆菌为内蒙古医学院微生物实验室提供的标准菌株。

1.1.2 培养基 浅部真菌及白念珠菌选用沙氏麦芽糖蛋白胨琼脂基（沙堡弱培养基），马拉色菌属采用LNA培养基，细菌采用营养琼脂培养基。

1.1.3 药物 实验用蒙药协日嘎洗剂（内蒙古医学院药学院药剂实验室制备），对照液采乐洗剂（西安杨森制药有限公司），无水乙醇（天津化学试剂厂分析醇），青霉素G阳标（杭州天和微生物试剂有限公司）和庆大霉素GM阳标（北京天坛药物生物技术开发公司）均为标准药敏纸片，单位均为10 μg。

1.2 实验方法

1.2.1 抑制真菌实验 ①药物稀释法（试管法）[4]：制备含协日嘎洗剂30%、20%、10%、5%的培养基，每组30例；pH值为5，试管分装高压灭菌，凝成斜面，备用。②分别设置空白对照组（未加药）、采乐洗剂对照组（30%）和20%乙醇对照组，每组30例。③进行随机抽样[5]后，接种菌株。④抑制真菌实验结果：白念珠菌培养48 h后观察，马拉色菌属培养72 h后观察，其他菌培养14 d后观察。

1.2.2 抑制细菌实验 ① 菌种接种[6]：接种环将新鲜细菌各取米粒大小分别划线接种于含营养琼脂培养基的平皿内，每组细菌培养30例。② 管碟法[6]：每个平皿分别放置青霉素G（10 μg）标准药敏纸片、庆大霉素GM（10 μg）标准药敏纸片及两个直径为5 mm的灭菌不锈钢小管，管内分别加入200 μl的原药液和20%乙醇对照液，置于37 ℃恒温培养箱中。③ 抑制细菌实验结果：24 h后观察结果，用游标卡尺测量抑菌环直径并记录。

1.3 统计学方法

数据采用PEMS 3.1软件包进行统计分析，计数资料两个率之间的比较用χ²检验。数据描述采用±s，计量资料多个样本均数比较用方差分析，t检验。

2 结果

2.1 抑制真菌实验结果

协日嘎洗剂不同浓度组与空白对照组、20%乙醇对照组相比较，对羊毛样小孢子菌、石膏样小孢子菌、犬小孢子菌、红色毛癣菌、白念珠菌、马拉色菌属的抑制作用明显，差异有统计学意义（P＜0.05）；协日嘎洗剂组与采乐洗剂组相比较，对上述4种真菌抑制作用差异无统计学意义（P＞0.05）；5%、10%、20%、30%协日嘎洗剂组间对上述真菌抑制作用比较差异无统计学意义（P＞0.05），说明不同浓度的协日嘎洗剂抑菌作用无差异（表1）。

2.2 抑制细菌实验结果

抑制革兰阴性杆菌实验结果显示：协日嘎洗剂对绿脓杆菌有抑制作用，但抑制作用较庆大霉素弱，差异有统计学意义（P＜0.05）；协日嘎洗剂组对变形杆菌、耐药大肠杆菌无效；20%乙醇对照组对实验菌株均无效（表2）。

抑制革兰阳性菌实验结果显示：协日嘎洗剂组对金黄色葡萄球菌、炭疽杆菌、白色葡萄球菌有抑制作用，但抑制作用较青霉素弱，差异有统计学意义（P＜0.05）；20%乙醇对照组对实验菌株均无效（表3）。

表2 协日嘎洗剂与庆大霉素抑菌环直径比较 （±s，mm）

表2 协日嘎洗剂与庆大霉素抑菌环直径比较 （±s，mm）

革兰 阴性杆菌耐药大肠杆菌 绿脓杆菌 变形杆菌200 μl协日嘎洗剂 0 13.17±0.65 0庆大霉素 0 23.53±0.83 15.28±1.48 20%乙醇对照 0 0 0组 别

表3 协日嘎洗剂与青霉素抑菌环直径比较 （±s，mm）

表3 协日嘎洗剂与青霉素抑菌环直径比较 （±s，mm）

组 别葡萄球菌炭疽杆菌白色葡萄球菌革 兰 阳 性 菌金黄色200 μl协日嘎洗剂 12.27±0.51 12.98±0.61 12.91±0.44青霉素 34.12±0.73 26.77±0.75 30.62±1.05 20%乙醇对照 0 0 0

3 讨论

协日嘎四味汤散是蒙药经典药方，《中国药典》、《蒙医百科全书》、《蒙医方剂学》均有记载，该药的传统剂型为汤散剂。蒙药汤散具有制法简便、疗效明显、费用低廉等特点，但服用量大，且口感差，服用困难，难以适应患者要求，尚有许多值得改进和提高之处。本实验在蒙医药理论指导下，应用现代科学方法和先进的制剂技术进行化学成分的分析，并研究开发新的蒙药剂型，将汤散改为洗剂。改变后协日嘎洗剂不但用药方法简便，而且局部用药不经肝、肾代谢，毒性及不良反应小，患者易接受，临床易推广，使传统蒙药扬长避短，这样既保留了传统方剂的功能，又扩展了原传统蒙药的治疗范围，并且适应时代的要求，使之更好地发挥蒙医药的作用，取得明显的社会效益和经济效益。

表1 不同浓度协日嘎洗剂和采乐洗剂对6种真菌的抑菌作用

感染性皮肤病是皮肤科临床常见的疾病，其发病率高、传染性强、易复发等特点日益受到临床医生的重视。因此，我们所选的实验用真菌菌种为临床常见致病菌，采用药物倍比稀释法，选取30%、20%、10%、5%协日嘎洗剂实验组和30%采乐洗剂对照组、20%乙醇对照组、空白对照组进行对比实验。结果表明不同浓度的协日嘎洗剂均有抑菌作用，与采乐洗剂相比，抑制本实验选定的6种真菌作用相当，因此我们将本实验协日嘎洗剂的最佳抑菌浓度定为5%（0.023 5 g/ml），与高浓度协日嘎洗剂组相比，不仅生药量少，且药效相同。

抑制细菌实验选用管碟法[6,7]，其具有载药量大、浓度高、药物不易被破坏等优点。选定的实验用菌种为引起细菌性皮肤病的临床常见致病菌，结果显示协日嘎洗剂对绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、炭疽杆菌、白色葡萄球菌的抑制作用较弱。

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会. 中华人民共和国卫生部药品标准:蒙药分册 [M]. 赤峰: 内蒙古科学技术出版社, 1998:87.

[2]布日额. 蒙药材姜黄本草考证 [J]. 中药材, 2007, 2(2):239-240.

[3]布日额. 蒙药材黄柏的本草考证 [J]. 中药材, 2007, 30(8): 1037-1038.

[4]占萍, 刘维达. 抗真菌药物敏感性试验方法的新进展 [J]. 中国真菌学杂志, 2007, 2(1):45-48.

[5]马斌荣. 医学统计学:随机数字表[M]. 4版. 北京:人民卫生出版社, 2006:263.

[6]林雪玲. 黄连解毒散超细微粉药代动力学研究与体外抑菌试验 [J]. 福建农林大学学报, 2006, 10(3):35-36.

[7]李志伟. 蒙药开发现状 [J]. 时珍国医国药, 2004, 15(2):128-129.