CD90和VEGF在肝细胞癌组织中的表达

于 乐，丁雪贞，孙雅静，高 原，魏 丹，万学东

（河南科技大学医学院，河南洛阳471003）

CD90和VEGF在肝细胞癌组织中的表达

于 乐，丁雪贞，孙雅静，高 原，魏 丹，万学东

（河南科技大学医学院，河南洛阳471003）

目的研究CD90和血管内皮生长因子（VEGF）在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法利用免疫组化法检测33例肝细胞癌手术切除标本、25例癌旁组织标本和20例正常肝脏组织标本中CD90和VEGF的表达情况。结果肝细胞癌组织中CD90、VEGF的阳性表达率分别为72.73%和81.82%，高于癌旁组织（48.00%和52.00%）和正常肝脏组织（0.00%和45.00%）（P＜0.05）。结论CD90和VEGF表达与肝细胞癌的发生、发展关系密切。

肝细胞癌；CD90；血管内皮生长因子

肿瘤干细胞对肿瘤的发生、发展、侵袭、转移及耐药起了决定作用［1］。有研究［2］提出CD90是肝细胞癌干细胞的标志物，在肝细胞癌的发生和转移中有重要意义。血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是目前所知的作用最强的一种促血管生长因子，在诱导肿瘤血管生成中起着重要作用［3］。作者应用免疫组化法检测CD90、VEGF在肝细胞癌组织中的表达，探讨两者与肝细胞癌的发生以及浸润转移的关系。

1 材料与方法

1.1 标本来源收集解放军第150医院2006年6月至2011年8月接受手术治疗肝细胞癌患者术后存档的石蜡标本33例、癌旁组织标本25例、正常肝脏存档石蜡标本20例，所有病例均有完整临床资料。

1.2 试剂兔抗人CD90和兔抗人VEGF单克隆抗体（美国Bioss公司产品）、二步法免疫组化试剂盒（SP-0023）（美国Zymed公司产品均购自北京博奥森生物技术有限公司。DAB显色试剂盒（AR-0612）购自北京鼎国昌盛生物技术有限公司。其他试剂均为分析纯。

1.3 CD90和VEGF检测方法采用免疫组化法检测不同肝脏组织标本中CD90和VEGF的表达：石蜡切片常规脱蜡、水化，水浴法抗原修复，试剂盒A液封闭，一抗二抗结合，DAB显色显微镜下观察，自来水终止，苏木素复染2 min，盐酸乙醇分化10 s，自来水冲洗，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。显微镜下观察结果。

1.4 结果判断用试剂盒中的阳性片作为阳性对照，PBS取代一抗作为阴性对照。细胞质染色呈棕黄色视为阳性，染色强度：无染色为0分；浅黄色为1分；黄色为2分；棕黄或棕褐色为3分。阳性细胞百分率：无阳性细胞为0分；阳性细胞数＜25%为1分；阳性细胞数25%～＜50%为2分；50%～＜75%为3分；阳性细胞数≥75%为4分。2项之和：0分为（-）；1～2分为（+），3～4分为（++），5～7分为（+++），均为阳性。

1.5 统计学处理应用SPSS 17.0进行统计学分析，率的比较采用χ2检验，检验水准α=0.05。

2 结果

CD90阳性着色主要分布于细胞质中，呈棕黄色颗粒（图1），肝细胞癌组织中CD90的阳性表达率为72.73%，高于癌旁组织（48.00%）和正常肝脏组织（0.00%）（P＜0.05）（表1）。VEGF蛋白阳性着色主要分布于细胞浆，呈棕黄色或棕褐色颗粒（图2），肝细胞癌组织中VEGF的阳性表达率为81.82%，高于癌旁组织（52.00%）和正常肝脏组织（45.00%）（P＜0.05）（表2）。

图1 CD90在正常肝脏组织（A）、癌旁组织（B）及肝细胞癌组织（C）中的表达（×200）

图2 VEGF在正常肝脏组织（A）、癌旁组织（B）及肝细胞癌组织（C）中的表达（×200）

表1 CD90在不同肝脏组织中的表达

表2 VEGF在不同肝脏组织中的表达

3 讨论

肿瘤侵袭和转移的一个重要先决条件是黏附分子介导的细胞黏附。CD90是一种细胞黏附分子免疫球蛋白，主要参与细胞之间以及细胞与基质之间的相互作用。在肝脏的形成过程之中，CD90表达于肝脏干细胞或祖细胞表面，而在成人的肝脏中表达却十分稀少［4］。目前，CD90已经被认为是肝细胞癌干细胞的表面标志物。肝细胞癌干细胞标志物大部分来源于肝细胞癌细胞系，而CD90在人肝细胞癌组织及肝细胞癌细胞系中的存在均已得到证实。本研究结果显示，CD90在肝细胞癌组织中的阳性率为72.73%，在癌旁组织中的阳性率为48.00%，在正常肝组织中的阳性率为0.00%，其在肝细胞癌组织中的表达高于癌旁组织及正常肝脏组织，表明CD90可能与肝细胞癌的生长、侵袭和转移存在密切关系，促进了肝细胞癌的发生、发展。

VEGF是肿瘤血管生成过程中最重要的促血管生成因子，在诱导肿瘤血管生成、促进肿瘤生长、侵袭以及转移中起着重要作用［5］。研究［6-8］表明，VEGF在肝细胞癌组织中表达明显增强。本研究结果显示，VEGF在肝细胞癌组织中的阳性率为81.82%，在癌旁组织中的阳性率为52.00%，在正常肝组织中的阳性率为45.00%，其在肝细胞癌组织中的表达明显高于癌旁组织及正常肝脏组织，提示VEGF表达增高在肝细胞癌的生长过程中起重要作用，并且与肿瘤转移有关。

综上所述，CD90及VEGF的异常表达可能与肝细胞癌组织的过快生长、对周围组织的侵袭破坏能力强、淋巴管或血行转移早等存在密切关系。

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［3］ 王洪海，任宁，张辉，等.联合检测VEGF、PD-ECGF和PCNA表达预测肝细胞癌术后复发及预后［J］.中国临床医学，2005，12（3）：448-451.

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［8］ 温韬，钱海利，谢立，等.肝癌患者血管内皮生长因子、内皮素和一氧化氮的水平变化及其意义［J］.中华肝脏病杂志，2004，12（7）：441.

Expressions of CD90 and VEGF in the Hepatocellular Carcinoma

Yu Le，Ding Xuezhen，Sun Yajing，Gao Yuan，Wei Dan，Wan Xuedong
（Medical College，Henan University of Science and Technology，Luoyang 471003，China）

ObjectiveTo investigate the expressions and clinical significance of CD90 and vascular endothelial growth factor（VEGF）in the hepatocellular carcinoma.MethodsImmunohistochemistry was used to detect the expressions of CD90 and VEGF in the 33 cases of hepatocellular carcinoma tissues，the 25 cases of paraneoplastic tissues and 20 cases of normal liver tissues.ResultsThe positive expression rate of CD90 and VEGF in the hepatocellular carcinoma tissues（72.73%and 81.82%）were higher than those in the paraneoplastic tissues（48.00% and 52.00%）and the normal liver tissues（0.00%and 45.00%）（P＜0.05）.ConclusionThe expressions of CD90 and VEGF are closely related to the canceration and development of hepatocellular carcinoma.

hepatocellular carcinoma；CD90；vascular endothelial growth factor

10.3969/j.issn.1673-5412.2014.02.003

R735.7；R730.23

A

1673-5412（2014）02-0102-03

2014-01-26）

河南科技大学大学生研究训练计划项目（编号：2012194）；国家级大学生创新创业训练计划项目（编号：201210464020）

于乐（1991-），女，学士在读，参与了肝细胞癌的发生发展机制探讨工作。E-mail：fishle2012@163.com

万学东（1966-），男，博士，副教授，主要从事生物化学与分子生物学教学与研究。E-mail：lywxd97@163.com