贯叶连翘提取物对小鼠抗应激反应及运动力竭小鼠抗氧化活性的影响*

叶婷婷，李 乐，廖莹莹，颜继忠，童胜强

（1.浙江工业大学药学院05药剂，2.浙江工业大学药学院，杭州310014）

贯叶连翘（hypericum perforatum L.），又名圣约翰草（St.John’swort），在欧洲长期被作为治疗皮肤表面创伤和抗抑郁药物，是近年来欧美最畅销的植物药之一，已被德、美等国收录于药典［1］。中国传统用于镇静、抗炎、伤口愈合等，贯叶连翘提取物（Hypericum perforatum L.extract，HPLE）成分主要包括：苯并二蒽酮类化合物，贯叶金丝桃素类化合物，（类）黄酮类化合物等［2］。本实验通过急性应激反应和运动力竭小鼠抗氧化实验，旨在探讨HPLE对小鼠急性应激反应及抗氧化活性的影响。

1 材料与方法

1.1 实验材料及仪器

清洁级 ICR小鼠160只，雌雄各半，体重（18～22）g，由浙江省实验动物中心提供，许可证号：SCXK（浙）2008-0033，自由饮水，进食。药物：HPLE，由浙江工业大学化学制药实验室提供，为棕黑色粉末，蒸馏水配制成3%浓度混悬液，40℃冰箱储存备用。722分光光度计（上海分析仪器厂），超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒、丙二醛（MDA）试剂盒（南京建成生物工程研究所），其余试剂均为国产分析纯。

1.2 方法

1.2.1 抗疲劳实验 取40只ICR小鼠，雌雄各半，随机均分为生理盐水（NS）对照组及高、中、低剂量 HPLE组（n＝10）。HPLE组分别按1.5 g／kg、0.75 g／kg和 0.38 g／kg，ig，Bid，连续给药7 d；NS组等体积生理盐水ig。末次给药2 h后，每只小鼠尾部加负荷物2 g，置于游泳槽内（水温22℃±1℃，深度30 cm），观察各组小鼠游泳时间的变化，以小鼠力竭沉到水底10 s内不再浮出水面为止。

1.2.2 常压耐缺氧实验 ICR 40只小鼠，雌雄各半，随机均分为NS对照组及HPLE高、中、低剂量组（n＝10）。分别按ig HPLE 1.5 g／kg、0.75 g／kg和 0.38 g／kg，Bid，连续用药 7 d；NS组ig等体积生理盐水。末次给药2 h后，在盛有15 g钠石灰的250ml容积的广口瓶中（每瓶放入1只小鼠），用凡士林密封瓶口，记录各组小鼠存活时间，进行分析比较。

1.2.3 常压耐低温实验 ICR 40只小白鼠，雌雄各半，随机均分为NS对照组及HPLE高、中、低剂量组（n＝10）。分别按ig HPLE 1.5 g／kg、0.75 g／kg和 0.38 g／kg，Bid，连续给药 7 d；NS组ig等体积生理盐水。末次给药2 h后，将各分组笼小数，放入-18℃冰箱1.5 h后，每隔0.5 h观察1次，以 NS组小鼠死亡1／2为界，记录各组小鼠死亡数。

1.2.4 运动力竭小鼠实验及血样采集 另取ICR小鼠40只，雌雄各半。随机均分为NS对照组及HPLE高、中、低剂量组（n＝10）。分别按 ig HPLE 1.5 g／kg、0.75 g／kg和 0.38 g／kg，qd；对照组：ig等量 NS，qd；隔日称体质量，观察小鼠生长情况。连续用药2周后，开始每天进行游泳训练0.5 h，第21天给药0.5 h后，各组小鼠于尾部负荷2 g，放入水深30 cm、水温（25.0±0.5）℃的水中游泳至力竭（小鼠沉入水中 3 s，可上浮没有淹死），迅速取出休息20min后，剪头取血于玻璃试管，血液凝固后，3 000 r／min离心 10 min；取上清液于 EP管中，-20℃冰箱贮藏备用。

1.2.5 血清 SOD、GSH-Px、MDA活性测定 分别按 SOD、GSH-Px、MDA试剂盒说明书操作，722分光光度计检测光密度值，结果按相关公式计算。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 抗疲劳（负重游泳）实验

与NS组比较，HPLE高、中、低剂量组可明显延长小鼠负重游泳持续时间，显示剂量依赖性（P＜0.05，P＜0.01，表1）。

Tab.1 Effectofhypericum perforatum L.extract（HPLE）on antifatigue ability ofmice（¯x±s，n＝10）

2.2 常压耐缺氧实验

与NS比较，HPLE可明显延长小鼠常压缺氧状态下的存活时间，显示剂量依赖性（P＜0.05，P＜0.01，表2）。

Tab.2 Effect of hypericum perforatum L.extract（HPLE）on the hypoxia tolerance ofmice（¯x±s，n＝10）

2.3 常压耐低温实验

与NS比较，HPLE可明显延长小鼠常压耐低温状态下的存活时间，显示剂量依赖性。（P＜0.05，P＜0.01，表 3）。

Tab.3 Effect of hypericum perforatum L.extract（HPLE）on the tolerance ability to low temperature inmice（n＝10）

2.4 HPLE对运动力竭小鼠血清中SOD、GSH2Px活性及MDA的影响

同NS组比较，HPLE低、中、高3个剂量组均能显著升高血清中SOD及GSH-Px活性，降低MDA水平，显示剂量依赖性（P＜0.05，P＜0.01，表 4）。

3 讨论

抗应激能力是机体对不利环境适应能力的体现。本实验采用小鼠负重游泳法，使小鼠全身剧烈运动消耗大量的能量和氧气，同时产生大量的乳酸。结果表明，HPLE可延长负重小鼠的游泳时间，提示其具有一定的强壮和抗疲劳作用，机制可能是使机体更节省地利用糖原和三磷酸腺苷为肌肉活动提供更充分的能量。

缺氧及低温刺激均可使机体产生一系列保护性应激反应，此时肾上腺皮质激素分泌增加，而当肾上腺皮质激素的储备已经耗竭，机体抗应激能力则大为下降［3］。HPLE能增强缺氧及低温状态下的存活时间，提示HPLE能使动物降低耗氧量和增强抗低温能力，推测机制可能与加速衰竭的肾上腺皮质功能恢复有关。

Tab.4 Effect of hypericum perforatum L.extract（HPLE）on activitiesof SOD and GSH-Px，and level ofMDA in serum of exhaustive exercisemice（¯x±s，n＝10）

电离辐射、体内酶促或非酶促反应可促使机体产生自由基，作用于细胞膜中的类脂质，导致细胞膜破坏，诱导细胞死亡［4］。同时脂质过氧化的代谢终产物MDA促使膜蛋白、酶发生交联作用，加重细胞损害；正常情况下，自由基会被体内酶系统如 SOD、CAT、GSH-Px迅速清除［5］。本研究结果表明，HPLE可有效提高运动力竭小鼠体内的SOD和GSH-Px活性，降低血清中脂质过氧化终产物MDA的量，减轻活性氧自由基对机体的攻击。

综上所述，HPLE具有抗应激反应的作用，并具有一定的抗氧化作用。鉴于其无明显毒性，临床用于提高耐力、抗疲劳、抗氧化，具有良好应用前景。

［1］ 欧阳辉，谢丽艳，黄小方，等.贯叶连翘的化学成分与药理研究进展及前景展望［J］.江西中医药，2010，41（7）：78-80.

［2］ 尚 好，钱雅珍，陶厚权，等.贯叶连翘提取物对扩张型心肌病大鼠缝隙连接蛋白Cx43的影响［J］.中国应用生理学杂志，2013，29（4）：330-332.

［3］ 张海英，薛 洁，史玉柱，等.人参对脾虚及正常小鼠抗应激能力的影响［J］.中国现代药物应用，2009，（11）：42-43.

［4］ 黎明华，汤长发，欧阳江琼.红景天苷对运动后自由基和能量代谢改变的影响［J］.中国应用生理学杂志，2012，28（1）：53-56.

［5］ 龙碧波.绞股蓝提取物对小鼠运动能力的影响［J］.中国应用生理学杂志，2010，26（3）：339-340.