免疫荧光染色在侵袭性肺曲霉病(IPA)诊断中的价值研究*

王腾勇（新余市人民医院检验科，江西 新余338000）

侵袭性肺曲霉病(IPA)是一种肺侵袭性真菌感染，发病率及病死率均居高不下且呈逐年增长的趋势，早期诊断和有效的抗真菌治疗对降低与IPA相关的病死率至关重要［1，2］。现有检查曲霉菌的方法有直接涂片镜检法、革兰染色涂片镜检法、培养法、特异性标志物检查等，以上检测方法存在阳性率低、检测周期长、特异性低等缺点［3］。而免疫荧光染色技术及10%氢氧化钾（KOH）湿片法是当前真菌检查中较为高效的诊断技术，均越来越广泛用于IPA患者痰或肺泡灌洗液中的曲霉菌的临床诊断中，但针对二者诊断价值的比较尚无明确定论。本研究对免疫荧光染色及10%KOH湿片法在IPA中的诊断价值进行探讨。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择我院2018年1月～2019年10月临床诊断疑似为IPA患者60例，按随机数字表法分为A、B组各30例。A组中男15例，女15例；年龄30～78(69.71±2.12）岁；体质量65～80（75.00±1.50）kg。B组中男14例，女16例；年龄31～79(70.16±2.19)岁；体质量66～82（76.00±1.55）kg。两组一般资料相比，无显著差异(P＞0.05)，具有可比性。本研究均经过医院医学伦理委员会审核批准。

1.2 纳入与排除标准纳入标准：临床出现咳嗽、胸痛、呼吸困难等症状，可闻及胸膜摩擦音，肺部出现其他原因不能解释的浸润；有糖皮质激素使用史；患者及家属均知情同意。排除标准：精神疾病及意识障碍无法配合研究者；严重传染性疾病者；肝、肾、脑等器官严重病变者。

1.3 方法所有患者均按要求采集痰液作为标本。A组采用免疫荧光染色诊断，在标本上滴加荧光染色液，然后加盖盖玻片，然后使用荧光显微镜或显微成像系统（CCD）进行观察，根据看到荧光标记的真菌菌丝或孢子结构得出结果。B组采用10%KOH湿片法诊断，取样，然后滴加KOH溶液，经酒精灯加热溶解，使用光学显微镜观察，找到真菌菌丝或孢子结构得出结果。

1.4 临床观察指标统计采取免疫荧光染色技术诊断及常规10%KOH湿片法诊断结果，以组织病理和真菌培养结果为“金标准”，分析两种诊断方法在IPA中的诊断价值。以a表示阳性，以d表示阴性，以c表示假阳性，以b表示假阴性。准确性=（a+d）/（a+b+c+d）×100%；敏感性=a/（a+c）×100%；特异性=d/（b+d）×100%；阳性预测值=a/（a+b）×100%；阴性预测值=d/（c+d）×100%。

1.5 统计学处理数据采用SPSS 20.0统计学软件分析，计数资料以例（百分率）表示，行χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 组织病理和真菌培养结果分析经组织病理和真菌培养明确A组30例疑似患者中IPA10例，B组30例疑似患者中IPA9例。

2.2 免疫荧光染色诊断与10%KOH湿片法诊断结果比较免疫荧光染色诊断IPA的准确性为96.67%(29/30)、灵敏度为90.00%(9/10)、特异度为100.00%(20/20)、阳性预测值为100.00%(9/9)、均较10%KOH湿片法[66.67%(20/30)、44.44%(4/9)、76.19%(16/21)、44.44%(4/9)]高，差异有统计学意义（P＜0.05）；免疫荧光染色检测的阴性预测值(95.24%，20/21)较10%KOH湿片法(76.19%，16/21)]高，但差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1～3。

表1 免疫荧光染色诊断结果与组织病理和真菌培养结果比较（n）

表2 10%KOH湿片法诊断结果与组织病理和真菌培养结果比较（n）

表3 免疫荧光染色诊断与10%KOH湿片法诊断结果比较[n（%）]

3 讨论

IPA表现为低氧血症等一系列呼吸功能障碍和晕轮征即磨玻璃样影环绕病灶周围等影像学浸润，病情凶险。因此，采取针对性抗真菌治疗对改善患者预后有十分重要的作用。本研究结果显示，免疫荧光染色诊断IPA的准确性、灵敏度、特异度、阳性预测值均较10%KOH湿片法诊断结果高，而阴性预测值比较未见明显差异，表明免疫荧光染色用于IPA诊断中能获取较高的诊断准确性、灵敏度、特异度、阳性预测值，诊断价值较高。常规10%KOH湿片法进行诊断在取样、滴加10%KOH溶液后需要经酒精灯加热溶解，然后才能使用光学显微镜进行观察。而免疫荧光染色在取样、滴加荧光染色液后直接加盖盖玻片进行荧光显微镜观察，操作步骤更为简便，操作用时短，适用于临床大样本的快速检测［4，5］。另外，免疫荧光染色的荧光染料的主要成分是荧光增白剂（CFW），能与真菌细胞壁上的几丁质和纤维素亲和，在350～400nm波长下发出亮蓝色荧光，在荧光显微镜视野中能清晰观察曲霉菌形态［6］。并利用染色液与真菌细胞壁中几丁质等多糖成分反应的检测原理，可排除检测中其他因素的干扰，减少假阴性的发生，继而降低漏诊及误诊率，提升诊断的准确性［7，8］。但需要注意的是，免疫荧光染色法的阳性结果可确定或提示真菌感染，但阴性结果也不能排除诊断，要在无菌体液的直接镜检中发现真菌成分可明确诊断，或有菌部位发现真菌菌丝，并结合临床特点方可做出诊断。在使用免疫荧光染色诊断明确患者为IPA后，患者可以得到及时诊断，实施精准有效的治疗，大大提升治疗效果，改善患者预后，能很大程度地降低家庭经济负担。而免疫荧光染色技术的实用性强，具有良好的社会效益和经济效益，值得临床推广应用。

综上所述，免疫荧光染色诊断IPA具有检测周期短、结果直观的优势，且能获得较高的准确性、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值，对IPA的诊断起到很好的辅助作用。