液基薄层细胞学检查联合人乳头状瘤病毒基因分型检测在宫颈病变筛查中的应用

王琳 屠蕊沁

(复旦大学附属中山医院妇产科，上海 200032)

世界上每年有500 000女性罹患宫颈癌，其病死率位居女性恶性肿瘤死因第二位。研究[1]表明，持续的人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染是宫颈癌的重要病因，有99%的宫颈癌患者曾感染HPV。目前已经发现的HPV亚型多达100多种，其中40种可感染女性生殖道；不同HPV亚型的致病性不同，其中高危型HPV持续感染可致宫颈癌[2]。HPV早期筛查对宫颈癌的早期发现、早期干预以及患者的康复有重要意义[3]。目前，临床上普遍采用液基薄层细胞学检查(ThinPrep cytologic test，TCT)筛查宫颈癌以及癌前病变，该方法具有较高的特异度和敏感度，但需要病理医师操作，且结果易受主观因素的影响，同时宫颈低度病变的检出率较低[4-6]。本研究分析了TCT联合HPV基因分型检测在宫颈病变筛查中的应用价值，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年1月—2012年6月在本院妇科行TCT和(或)HPV 检查的415例患者，年龄26～81岁。所有患者均有性生活史，取材前3 d均无阴道冲洗及用药史。

1.2 TCT检查 应用全自动制片机处理宫颈组织，分离宫颈表面黏液、血液和炎性反应细胞，将炎性反应细胞标本制成直径13 mm的单层细胞涂片，采用巴氏染色法进行染色。用2001年国际癌症协会(National Cancer Institute，NCI)推荐的Bethesda分级系统(TBS)进行细胞学诊断。其中非典型鳞状细胞(ASC-US)及其以上病变为细胞学阳性诊断结果。低度鳞状上皮内病变(LSIL)包括HPV感染的细胞变化和CIN 1级病变，高度鳞状上皮内瘤变(HSIL)包括CIN 2级病变、CIN 3级病变和原位癌。

1.3 HPV基因分型检测 按照HPV基因分型检测试剂盒(深圳亚能生物技术有限公司生产)说明书对宫颈组织标本进行HPV检测及基因分型。取1 mL宫颈细胞液离心，弃上清，加入50 μL裂解液悬浮细胞沉淀；置入沸水中10 min，离心，取上清液，提取DNA并扩增。PCR反应条件：50℃ 15 min，95℃ 10 min，42℃ 90 s，72℃ 30 s，40个循环，72℃ 5 min。取15 mL塑料离心管，放入标有样本编号的膜条，加入A液及PCR产物，沸水浴10 min，放入51℃杂交箱，1.5 h后取出膜条，放入装有50 ml B液的离心管中，51℃轻摇洗涤10 min，孵育30 min后再用A液、C液室温洗涤，最后将膜条浸泡于显色液中避光显色20 min，观察结果。根据膜条上蓝色斑点显现位置读取基因型，若只有PC位点(显色质控点)显色而其他位点均不显色，则提示未感染HPV。

1.4 组织病理学检查 CIN1～3级病变按TBS标准分为轻、中、重度宫颈鳞状上皮非典型增生。由病理医师行盲法阅片，所有异常切片均由另外两位病理医师按Richart标准复核。

1.5 统计学处理 采用SPSS 13.0软件进行分析，计数资料以率的形式表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 HPV基因分型检测结果 415例疑似宫颈病变中，HPV检测出阳性者140例，阳性率为33.73%，其中高危型感染(包括单一高危型感染和混合高危型感染)106例，占75.71%；低危型感染(包括单一低危型感染以及混合低危型感染)13例，占9.86%；低危型与高危型混合感染21例，占15.0%。在检出的140例HPV阳性病例中，出现频率最高的为HPV 16型和52型(分别占27.3%和21.5%)，其次为58型和18型(分别占18.4%和16.8%)。

2.2 TCT检查结果 415例标本中，TCT检查结果异常者63例(15.18%)，包括ASC-US 28例(6.74%)，LSIL 11例(2.65%)，HSIL 12例(2.89%)，SCC 11例(2.65%)，AGC 1例(0.24%)。

2.3 HPV基因分型、TCT与病理组织学检测结果比较 病理诊断以CIN 1级及以上病变为阳性结果，415例标本中，病理学检测阳性者48例(11.57%)，其中，TCT联合HPV基因分型检测阳性率为89.86%(43/48)，并且随着宫颈病变程度的加深，TCT联合HPV基因分型检测的阳性率也呈逐渐上升趋势。415例标本中，HPV基因分型及TCT检查均为阳性者81例(19.42%)。在HPV检测及TCT检查均为阳性的81例标本中，CIN检出38例(46.9%)；在HPV阳性而TCT阴性的65例标本中，CIN检出19例(15.4%)，两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。HPV及TCT检查均为阳性的81例标本中，宫颈癌检出5例(6.2%)，HPV阳性而TCT阴性的标本中，宫颈癌检出率为0，两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨 论

HPV的检测对于宫颈癌前筛查、治疗后随访、疫苗的应用以及流行病学调查均有重要意义[7]。本研究的415例疑似宫颈病变标本中，HPV阳性率为33.73%，其中106例(75.71%)为高危型感染，以HPV16型和52型(分别占27.3%和21.5%)出现频率最高；HPV基因分型检测联合 TCT检查(阳性率19.42%)诊断宫颈癌病变较病理学诊断(阳性率11.57%)敏感。但因某些患者为一过性HPV感染，不引起宫颈细胞形态学改变，发展为宫颈癌及CIN的概率较低，因此，HPV基因分型不能作为诊断宫颈病变的黄金标准，宫颈癌前病变以及宫颈癌仍需通过病理学检查确诊。此外，从HPV感染到宫颈癌前病变需5～20年，在此过程中，HPV感染者应定期随访，并结合TCT检查，以尽早发现宫颈病变。本研究中，在病理学检查的阳性病例中，TCT及HPV基因分型检测阳性率为89.86%，并且随着宫颈病变程度的加深，TCT和HPV基因分型检测的阳性率也呈上升趋势。同时，在HPV检测及TCT检查均为阳性的标本中，CIN检出率为46.9%，HPV阳性而TCT阴性标本中CIN检出率为15.4%，两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。HPV及TCT检查均为阳性的标本中宫颈癌检出率为6.2%，HPV阳性而TCT阴性的标本中宫颈癌检出率为0，两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。上述结果均表明，TCT联合HPV基因分型检测能够明显提高CIN及宫颈癌的检出率。

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