胸腺法新对不同型别COVID-19患者外周血T淋巴细胞亚群的影响

邢燕，魏徵霄，王冬梅，李青峰，周觅，尚鹏程

（四川省成都市公共卫生临床医疗中心检验科，四川 成都 610066）

新型冠状病毒肺炎（corona virus disease 2019，COVID-19）是由新型冠状病毒（SARS-CoV-2）导致的一系列呼吸系统疾病的总称。《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）》[1]指出，通过流行病学史、临床表现、病原学检测、血清检测等方法能确诊COVID-19患者，其临床分型有轻型、普通型、重型和危重型4个型别，且不同类型的治疗方案和预后均有较大差异。

据现有资料[2]报道，COVID-19主要损伤人呼吸系统，多数患者还会出现心血管、脾脏等器官的病理改变，在血液系统表现为淋巴细胞的进行性减低。也有报道指出[3]，部分COVID-19患者出现CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞亚群的明显下降，提示机体的免疫功能有一定程度的受损，因此，免疫调节药物逐渐引起大家的关注，但目前尚无明确的证据表明此类药物对COVID-19有预防和治疗作用。本研究选取成都市公共卫生临床医疗中心2020年1—3月采用胸腺法新辅助治疗的COVID-19患者作为研究对象，探讨胸腺法新对COVID-19患者机体细胞免疫功能的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2020年1—3月成都市公共卫生临床医疗中心收治的65例COVID-19确诊病例（观察组）。观察组男41例，年龄3个月～87岁，中位年龄48（34，65）岁；女24例，年龄19～84岁，中位年龄61（41，67）岁。观察组中采用抗病毒药物联合胸腺法新治疗患者31例作为胸腺法新组（轻型3例，普通型11例，重型7例，危重型10例）；采用常规抗病毒治疗34例作为非胸腺法新组（轻型7例，普通型19例，重型4例。危重型4例）。另选取30名本院职工体检者作为对照组，其中男13例，女17例；年龄22～54岁，中位年龄33（26，45）岁。本研究经本院医学伦理委员会审核批准。所有研究对象均知情同意并签署知情同意书。纳入标准：所有患者均符合《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）》诊断标准；均有武汉旅居和/或新型冠状病毒确诊患者接触史；RT-PCR核酸检查呈阳性结果。排除标准：普通感冒者；肝、肾功能异常者；合并有其他重大疾病者；合并有肿瘤者；妊娠期或哺乳期女性；依从性差者；临床资料不完整者。

1.2 方法 收集观察者和对照组入院当天血常规（全自动血细胞分析仪BC-6900，迈瑞，中国）、T淋巴细胞亚群（流式细胞仪Dxflex，贝克曼，美国）结果，其中31例患者因淋巴细胞计数显著下降，于确诊后在抗病毒治疗的基础上联合使用胸腺法新，所有入组患者在抗病毒或抗病毒联合胸腺法新治疗1周后复查T淋巴细胞亚群绝对计数。其中T淋巴细胞亚群正常值范围：CD3+T淋巴细胞770～2 041 cells/μl、CD3+CD4+T淋巴细胞414～1 123 cells/μl、CD3+CD8+T淋巴细胞238～874 cells/μl。血常规参考范围：WBC计数（3.50～9.50）×109个/L、NEU计数（2.00～7.00）×109个/L、LYM计数（0.80～4.0）×109个/L。

1.3 观察指标 比较不同类型COVID-19患者与对照组白细胞计数及分类，不同类型COVID-19患者与对照组的基线T淋巴细胞亚群绝对计数，不同类型COVID-19患者在治疗前后T淋巴细胞亚群绝对计数，胸腺法新治疗后COVID-19患者T淋巴细胞亚群绝对计数。

1.4 统计学方法 采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，符合正态分布的数据采用“”进行统计描述，不符合正态分布的数据用“M（P25，P75）”描述；符合正态分布的多组间比较采用单因素方差分析，不符合正态分布的多组间比较采用Z检验，两组间比较采用独立样本t检验及非参数检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同类型COVID-19患者与对照组白细胞计数及分类比较 观察组白细胞计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、中性粒细胞率、淋巴细胞率及NLR与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 不同型别COVID-19患者与对照组白细胞计数及分类比较Table 1 Comparison of white blood cell count and classification between patients with different types of COVID-19 and the control group

2.2 不同类型COVID-19患者与对照组的基线T淋巴细胞亚群绝对计数比较 与对照组比较，观察组基线T淋巴细胞亚群绝对计数水平均有所下降，即CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞和淋巴细胞的绝对计数在轻型、普通型、重型、危重型均显著下降，与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05），且危重型CD3+、CD3+CD4+T淋巴细胞和淋巴细胞绝对计数与轻型、普通型比较差异有统计学意义（P＜0.05）；CD4/CD8比值在轻型、普通型、重型、危重型中比较差异无统计学意义，见表2。

表2 不同型别COVID-19患者与对照组基线T淋巴细胞亚群绝对计数比较Table 2 Comparison of absolute counts of baseline T lymphocyte subsets between patients with different types of COVID-19 and the control group

2.3 不同类型COVID-19患者在治疗前后T淋巴细胞亚群绝对计数比较 与非胸腺法新组比较，不同类型COVID-19患者在治疗前，使用胸腺法新组CD3+、CD3+CD4+T淋巴细胞和淋巴细胞的绝对计数在普通型、重型和危重型患者中比较差异具有统计学意义（P＜0.05），在轻型中无统计学意义；治疗后，与非胸腺法新使用组比较，联合胸腺法新治疗组CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞和淋巴细胞的绝对计数在轻型、普通型、重型和危重型中比较差异无统计学意义，见图1。

图1 不同型别的COVID-19患者在治疗前后T淋巴细胞亚群绝对计数的比较Figure 1 Comparison of absolute counts of T lymphocyte subsets in patients with different types of COVID-19 before and after treatment

2.4 胸腺法新治疗后COVID-19患者T淋巴细胞亚群绝对计数变化 与非胸腺法新组比较，胸腺法新组CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞和淋巴细胞的绝对计数明显上升，与基线的CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞和淋巴细胞的绝对计数之间的差值在普通型、重型、危重型比较差异有统计学意义（P＜0.05）；其差值在轻型比较差异无统计学意义，见表3。

表3 胸腺法新治疗对COVID-19患者T淋巴细胞亚群绝对计数的影响Table 3 The effects of thymalfasin on the absolute counts of T lymphocyte subsets in patients with COVID-19

3 讨论

COVID-19是机体感染严重急性呼吸系统综合征冠状病毒[4]引起的急性呼吸系统疾病，现已将该病纳入《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病，并采取甲类传染病管理[5]。COVID-19传染性强，研究分析其实验室检查数据与临床治疗方案的相关性，对疾病的诊疗预后有重要的作用。

3.1 COVID-19患者免疫功能的变化COVID-19患者总体淋巴细胞数量下降与病情的严重程度相关，且与重症及死亡患者的病程特征密切相关[6]。研究[7]表明，SARS-CoV-2可能通过识别和结合ACE2蛋白感染人体细胞，攻击免疫系统，导致淋巴细胞下降，与多数病毒致病机制一样引起机体继发性免疫缺陷[8]。本研究结果表明，COVID-19患者疾病的严重程度与T淋巴细胞亚群计数呈反比，尤其重型、危重型患者最显著，与侯可可等[9-10]的研究结果一致。关于COVID-19重型与危重型患者的T淋巴细胞绝对计数明显降低的机制，目前有两种推论：①是COVID-19病毒直接侵袭和破坏T淋巴细胞的胞质，导致T淋巴细胞坏死[11]；②是COVID-19病毒感染激活机体免疫细胞，导致T淋巴细胞凋亡增加[12]，具体的机制亟需大量的数据研究验证。

3.2 胸腺法新对COVID-19患者淋巴细胞亚群的影响T细胞分化、发育和成熟的主要场所是胸腺，且此过程需胸腺肽参与，而胸腺法新作为常用的胸腺肽类药物之一，是一种具有一定空间构象的免疫增强剂，能通过对T淋巴细胞的非特异性刺激，促进T细胞增殖、分化、发育成熟，并调节T淋巴细胞亚群，以增强机体免疫力[13]。有研究[14]表明，在社区获得性重症肺炎老年患者治疗中，在基础治疗上加用胸腺法新治疗1周后，患者T淋巴细胞亚群比例升高，可有效提高免疫力。虽然目前尚无证据表明胸腺肽类药对COVID-19有预防和治疗作用，但从细胞免疫和个体非特异性抗病毒能力的角度考虑，通过胸腺肽类药物对机体的被动免疫，对于免疫功能低下及有相关适应证的人群，可能有助于提高机体细胞免疫，进而抵抗病毒感染[15]。

本研究结果表明，与非胸腺法新组比较，使用胸腺法新组在治疗前，均具有较低的T淋巴细胞亚群计数，且这种组内差异通过治疗后消失了，推测可能是胸腺法新起到了一定的免疫促进作用。进一步分析两种不同处理的患者淋巴细胞亚群的差值发现，与未使用胸腺法新组比较，COVID-19的普通型、重型、危重型患者在联合胸腺法新治疗后，其外周血T淋巴细胞亚群计数明显升高，COVID-19轻型患者在联合胸腺法新治疗后，T淋巴细亚群变化差异无统计学意义，这可能与轻型患者自身机体免疫功能轻度受损，T淋巴细胞在体内能够发挥一定的免疫功能，机体内免疫水平处于动态平衡相关，此时胸腺法新的治疗意义可能不大。早期也有研究提出胸腺肽类药物对免疫力正常的人群T细胞计数的影响不明显[16-17]。同时，本研究发现，COVID-19普通型、重型、危重型患者在联合胸腺法新治疗后，其外周血T淋巴细胞亚群计数明显升高，尤其在普通型、重型升高最显著，这可能与胸腺法新能促进干细胞转化或刺激T淋巴细胞产生相关。而危重型患者，由于机体免疫功能严重受损，使用胸腺法新后治疗后机体不能迅速进行免疫重建，因此，T淋巴细胞计数有一定程度升高，但没有普通型和重型患者升高显著，其具体机制尚待进一步研究。本研究的局限性在于样本量较小，观察时间短，未来将对此部分患者进行持续的随访，丰富和完善相关数据。

综上所述，胸腺法新在辅助治疗COVID-19普通型、重型和危重型患者有一定效果，能在一定程度上提高患者T淋巴细胞亚群水平，且普通型和重型对胸腺法新的治疗反应最理想，但具体的作用机制和临床疗效尚需要多中心、更大规模样本和持续的回访来进一步研究。