膀胱癌患者肿瘤组织Ki-67、CK7的表达及其临床意义

罗松涛 王应洪 李绪鲲 柯井卫 唐义权

膀胱癌患者肿瘤组织Ki-67、CK7的表达及其临床意义

罗松涛 王应洪 李绪鲲 柯井卫 唐义权

目的 探讨膀胱癌组织中Ki-67与CK7的表达及其临床意义。方法 采用免疫组化SP法对88例膀胱移行细胞癌组织中的Ki-67、CK7的表达水平进行检测，并将其与患者的临床特征及预后进行比较。结果 本组88例膀胱癌患者中，Ki-67与CK7的阳性表达率分别为43.2%（38/88）与54.5%（48/88）；浅表型膀胱癌组织中Ki-67阳性率显著低于浸润型（P＜0.05），CK7阳性率显著高于浸润型（P＜0.05）。Ki-67在肿瘤组织中的表达随分级的增高而增加，CK7表达随分级的增加而降低。浅表性膀胱癌2年内复发患者中Ki-67阳性率为73.3%，非复发组为54.0%，复发组显著高于非复发组患者（P＜0.05）。结论 Ki-67与CK7表达与膀胱癌的临床及病理分级存在一定的相关性，Ki-67表达阳性可能是术后复发的危险因素。

膀胱癌;Ki-67;CK7;免疫组织化学

膀胱癌是临床上较为常见的泌尿系统恶性肿瘤，其发病确切原因仍不明确，可能与遗传易感性、化学原料接触等有关[1]。膀胱癌治疗主要以手术为主，但患者的预后存在较大差异。有文献报道，膀胱癌患者肿瘤组织中Ki-67和CK7的表达水平与膀胱癌的临床特征及预后存在一定的关系，因此本研究采用免疫组化法SP法对88例膀胱癌组织中的Ki-67、CK7的表达进行检测、评估其表达与患者临床特征及预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2008年1月-2012年1月本科收治的88例膀胱癌患者的临床资料，其中男54例，女34例；年龄41～82岁，平均（60.3±9.2）岁；浅表性肿瘤65例（其中Ta44例，T121例），浸润型肿瘤 23例（其中T28例，T39例，T46例）；病理分级：G121例，G236例，G331例。

1.2 免疫组织化学检测肿瘤标本 术后膀胱肿瘤标本采用免疫组化SP法检测其Ki-67和CK7的表达水平。一抗分别为鼠抗Ki-67单抗与鼠抗人CK7单抗（产自Maxim公司）。组织切片脱蜡且水化之后，浓度为3%的双氧水处理10～15min，过氧化酶阻断溶液以及25℃条件下孵育10～15min。浓度为10%的山羊血清及室温孵育5min。加入一抗，于4℃温度条件下保存24h。生物素标记的二抗及SP复合物各为10min。DAB显色，苏木素复染，于透明条件下进行封片。以PBS替代一抗作阴性对照组，人乳腺癌组织作为阳性对照[2]。

1.3 判断标准 每张切片随机地对4个视野进行计数，共计数400个细胞，计算阳性细胞的构成比。判断标准：阳性细胞≤10%为(-)；10～30%为（+），大于 30%为（++）[3]。

1.4 统计学方法 采用STATA13.0软件完成，计量数据采t检验，计数资料采用用χ2检验，以P＜0.05为差异存在统计学意义。

2 结果

2.1 Ki-67与CK7在癌组织中的表达 在膀胱癌组织标本之中，Ki-67的阳性表达例数为38例，阳性表达率为43.2%，CK7阳性表达例数为48例，阳性表达率为54.5%。

2.2 Ki-67与CK7与肿瘤分期分级 浅表型膀胱癌组织中Ki-67阳性率显著低于浸润型（P＜0.05），CK7阳性率显著高于浸润型（P＜0.05）。Ki-67在肿瘤组织中的表达随病理分级的增高而增加，CK7表达随分级的增加而降低。见表1。

表1 Ki-67与CK7与肿瘤分期分级[n(%)]

2.3 Ki-67、CK7表达与肿瘤复发 65例浅表性膀胱癌经尿道膀胱肿瘤电切术后（TURBT）随访2年内无复发者为50例，复发者15例，复发率为23.1%。复发组Ki-67表达显著高于未复发组（P＜0.05）；复发组与未复发组患者CK7表达阳性率无明显差别（P＞0.05）。见表 2。

表2 Ki-67、CK7表达与肿瘤复发[n(%)]

3 讨论

膀胱癌为泌尿系统常见肿瘤，且术后容易复发。因此探寻膀胱癌预后相关因素及复发指标成为研究热点。Ki-67是目前较为肯定的核增殖标志基因。Ki-67在除G0期以外的细胞周期各时相均有表达，M期达最大表达峰[4]。另研究表明，CK7基因与细胞增殖有关，在调控上皮分化和成熟中具有重要作用[5]。CK7基因的缺失可导致表皮、乳腺、泪腺和前列腺发育障碍。免疫组化法检测CK7的表达，发现CK7在正常上皮组织基底细胞及上皮来源肿瘤细胞中均有不同程度的表达[6]。

因此本研究采用免疫组化法SP膀胱癌中Ki-67、CK7的表达进行检测、评价其表达水平与患者临床特征及预后的关系。结果显示：临床分期以及病理分级之间，Ki-67与CK7的阳性表达率的差异有统计学意义；Ki-67在浸润型膀胱癌组织与G3级癌组织中的阳性表达率较在其他组织中的阳性表达率要高。本组88例膀胱癌患者中，Ki-67与CK7的阳性表达率分别为43.2%（38/88）与54.5%（48/88）；浅表型膀胱癌组织中Ki-67阳性率显著低于浸润型，CK7阳性率显著高于浸润型。Ki-67在肿瘤组织中的表达随分级的增高而增加，CK7表达随分级的增加而降低。浅表性膀胱癌2年内复发患者中Ki-67阳性率显著高于非复发组患者。Ki-67与CK7表达与膀胱癌的临床及病理分期存在一定的相关性，Ki-67表达阳性可能是复发的术后复发的危险因素。因此，对于Ki-67表达阳性可能是术膀胱癌复发的重要指标，此类患者术后应加强随访观察，强化术后膀胱灌注化疗，降低术后肿瘤复发风险。

[1] Acikalin D,Oner U,Can C,et al.Predictive value of maspin and Ki-67 expression in transurethral resectionspecimens in patients with T1 bladder cancer[J].Tumori,2012,98(3):344-50.

[2] Bertz S,Otto W,Denzinger S,et al.Combination of CK20 and Ki-67 Immunostaining Analysis Predicts Recurrence,Progression,and Cancer-Specific Survival in pT1 Urothelial Bladder Cancer[J].Eur Urol,2012,6(8):466-472.

[3] Roninson IB.Tumor senescence as a determinant of drug response in vivo [J].Drug Resist Updat,2002,5(5):204-208.

[4] Michaelis M,Kleinschmidt MC,Barth S,et al.Anticancerefects of artesun ate in a panel of chemoresisrant neuroblastoma cell lines[J].Biochem Pharmacol,2010,79(2):130-136.

[5] Pichu S,Krishnamoorthy S,Shishkov A,et al.Knockdown of Ki-67 by dicer-substrate small interfering RNA sensitizes bladdercancer cells to curcumin-induced tumor inhibition[J].PLOS ONE,2012,7(11):e48567.

[6] 林芳,钱之玉,丁健,等.二轻青蒿素对乳腺癌MCF-7细胞的体外抑制作用[J].中国新药杂志,2002,11(12):934-936.

10.3969/j.issn.1009-4393.2013.36.014

四川 646000 泸州医学院附属中医医院 （罗松涛 王应洪李绪鲲 柯井卫 唐义权）

罗松涛 E-mail:songtaoluo0066@126.com