核桃油对大鼠青光眼模型视神经节细胞的保护作用

谢林英，谢静，张海清

（赣南医学院第一附属医院眼科，江西 赣州 341000）

核桃油对大鼠青光眼模型视神经节细胞的保护作用

谢林英，谢静，张海清

（赣南医学院第一附属医院眼科，江西 赣州 341000）

目的 观察核桃油对大鼠青光眼视网膜神经节细胞的保护作用。方法 采用前房灌注生理盐水法形成150 cmH2O（14.63 kPa）高眼压，诱导大鼠视网膜缺血60min，建立急性青光眼模型。正常对照组、青光眼模型对照组、模型加药组。均取左眼对照。分别在3 d、5 d、7 d观察视网膜节细胞数及视网膜各层厚度。结果 模型对照组3 d、5 d、7 d的视网膜节细胞数目均较正常对照组发生明显降低（P＜0.05）；模型加药组3 d、5 d、7 d的视网膜节细胞数目均较模型对照组发生显著升高（P＜0.05）；模型加药组与正常对照组比较，3 d、5 d、7 d的视网膜节细胞数目比较差异无统计学意义。模型加药组3 d、5 d、7 d时视网膜内丛状层、内核层厚度与模型对照组比较，均发生显著增多或增厚，差异存在统计学意义（P＜0.05）。模型加药组与正常对照组比较，3 d、5 d、7 d时视网膜内丛状层、内核层、外核层厚度比较差异无统计学意义。结论核桃油对实验性青光眼视网膜神经节细胞具有保护作用，在今后的临床研究与实践中，应对其给予足够的重视。

核桃油；青光眼；大鼠模型；视网膜神经节细胞；保护作用

核桃，又名胡核，核桃仁含油量高达65%～70%，其中不饱和脂肪酸含量高达80%以上。核桃油具有很高的营养价值，自古以来作为营养食品，尤其是其中富含亚油酸、亚麻酸及多种微量元素是神经组织中细胞脂肪成分的良好来源[1]。目前对核桃油的研究主要集中在油的提取方法、成分分析及分离方面，而对其视网膜神经节细胞的保护研究却鲜有文献报道[2]。本课题探讨核桃油对青光眼视网膜神经节细胞影响以及作用机制，证明核桃是具有中国特色和开发价值的中医药品及食品。研究中，建立了急性青光眼大鼠模型，并展开了分组实验，结果汇报如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料 实验所需试剂包括：浓度为4%的中型甲醛，浓度为4%的水合氯醛，浓度为1%的利多卡因，浓度为1%的氯霉素眼药水，核桃油。实验所需仪器包括：尼康公司的光学显微镜，石蜡切片机（购自德国Nussloch）。实验动物：90只健康、成年雄性SD大鼠。

1.2 方法

1.2.1 研究方法 取Sprague Dawley成年大鼠，清洁级，雄性，体质量250～300 g。成年SD大鼠90只。随机分为3组：正常对照组（对照组），青光眼损伤对照组（损伤组），青光眼损伤后核桃油喂养组[喂养动物喂养时间为30 d。核桃油的剂量为1 000mg/（kg·d）]。均取左眼对照。而后取3组大鼠视网膜病理切片及铺片，显微镜观察视网膜神经节细胞数及IPL、INL厚度。

1.2.2 造模方法 采用前房灌注生理盐水法形成150 cm H2O（14.63 kPa）高眼压，诱导大鼠视网膜缺血60min，建立急性青光眼模型。

1.2.3 标本采集 按照预先分组，在第3、5、7天进行断头处死大鼠，迅速将眼球摘除，经亚甲蓝对角膜上极、视神经短端进行标记，角膜上扎一个小孔，浸润在4%中型甲醛中，进行固定，持续24 h，而后将固定好眼球经角膜上极、视神经断端对称将眼球剖开，梯度酒精脱水，而后浸蜡。常规石蜡包埋后，连续4μm切片，进行常规苏木精-伊红染色。

1.2.4 显微镜观察 经摄像显微镜对标本进行观察，同时照相，对高倍视野内视网膜节细胞数目进行统计，同时对视乳头周围1mm处视网膜各层厚度进行测量。

1.3 观察指标 对比分析各组实验动物视网膜节细胞数、内丛状层以及内核层、外核层厚度。

1.4 统计学方法 采取SPSS18.0统计学软件进行处理，计量资料采用“x±s”表示,组间比较采用t检验,计数资料以率（%）表示,采用χ2检验；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组视网膜节细胞数目对比 经统计发现，模型对照组3 d、5 d、7 d的视网膜节细胞数目均较正常对照组发生明显降低（P＜0.05）；模型加药组3 d、5 d、7 d的视网膜节细胞数目均较模型对照组发生显著升高（P＜0.05）；模型加药组与正常对照组比较，3 d、5 d、7 d的视网膜节细胞数目比较差异无统计学意义，见表1。

表1 3组视网膜节细胞数目对比

表1 3组视网膜节细胞数目对比

注：与正常对照组比较，a P＜0.05，与模型对照组比较，b P＜0.05

7 d 17.0±1.6 9.0±2.7a 17.0±2.1b组别正常对照组模型对照组模型加药组3 d 21.0±3.2 10.0±1.3a 19.0±3.5b 5 d 18.0±2.4 9.0±3.1a 17.0±3.4b

2.2 视网膜 经统计发现，模型加药组3 d、5 d、7 d时视网膜内丛状层、内核层厚度与模型对照组比较，均发生显著增多或增厚，差异存在统计学意义（P＜0.05）。模型加药组与正常对照组比较，3 d、5 d、7 d时视网膜内丛状层、内核层、外核层厚度比较差异无统计学意义，见表2、3、4。

表2 3组视网膜内丛状层厚度比较

表2 3组视网膜内丛状层厚度比较

注：与正常对照组比较，a P＜0.05，与模型对照组比较，b P＜0.05

组别正常对照组模型对照组模型加药组7 d 57.1±4.5 26.5±2.1a 43.6±3.1b 3 d 58.4±4.3 28.9±1.6a 49.8±4.3b 5 d 56.9±3.7 28.1±2.3a 46.7±2.5b

表3 3组视网膜内核层厚度比较

表3 3组视网膜内核层厚度比较

注：与正常对照组比较，a P＜0.05，与模型对照组比较，b P＜0.05

组别正常对照组模型对照组模型加药组7 d 31.2±3.2 16.6±2.1a 21.5±3.2b 3 d 30.2±3.1 19.9±2.3a 24.1±2.5b 5 d 29.9±2.7 17.3±1.4a 22.3±1.5b

表4 3组视网膜外核层厚度比较（

表4 3组视网膜外核层厚度比较（

7 d 41.1±1.7 39.2±1.4 39.2±2.3组别正常对照组模型对照组模型加药组3 d 40.5±2.1 38.8±1.6 40.8±1.8 5 d 41.3±1.8 37.2±1.9 39.9±1.6

3 讨论

青光眼是最常见的眼科疾病之一，可发于各年龄段，是危害人群致盲的首要原因。青光眼严重影响了人群的生活及工作。青光眼最早期症状往往表现为视力的明显下降，出现视网膜神经节细胞的凋亡。有研究证实，青光眼患者中，存在诸多致病因素，会造成患者视神经细胞凋亡[3]。开发一种安全、经济、有效的对青光眼视网膜神经节保护作用的药物具有重要的临床意义[4]。近几年，随着医学技术水平的不断提高，基因工程、细胞因子学、中西医保护视网膜神经细胞凋亡的研究越来越多[5]。核桃自古以来作为营养食品，它富含的亚油酸、亚麻酸及多种微量元素对神经细胞具有很好的修复作用[6]。目前对核桃油的研究主要集中在油的提取方法、成分分析及分离方面，而对其神经营养保护功能及机制研究鲜有文献报道[7]。本次研究中，出于对核桃油对大鼠青光眼模型视神经节细胞的保护作用进行研究分析的目的，建立了急性青光眼大鼠模型，并展开了分组实验，结果发现，模型对照组3 d、5 d、7 d的视网膜节细胞数目均较正常对照组发生明显降低；模型加药组3 d、5 d、7 d的视网膜节细胞数目均较模型对照组发生显著升高；模型加药组与正常对照组比较，3 d、5 d、7 d的视网膜节细胞数目无明显差异。模型加药组3 d、5 d、7 d时视网膜内丛状层、内核层厚度与模型对照组比较，均发生显著增多或增厚，差异有统计学意义（P＜0.05）。模型加药组与正常对照组比较，3 d、5 d、7 d时视网膜内丛状层、内核层、外核层厚度无明显差异。这一结果与相关文献[8]报道结果相似，充分证实核桃油对实验性青光眼视网膜神经节细胞具有保护作用，在今后的临床研究与实践中，应对其给予足够的重视。

[1] 袁援生.青光眼流行病学研究进展[J].昆明医学院学报,2010,31(9):1-3.

[2] 楼航芳,葛钢锋.中西医联合用药对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞bcl-2和bax基因表达的影响[J].浙江中医药大学学报,2010,34(2):146-145.

[3] 游玉霞,李玉洁,张海娟,等.杞贞胶囊对视网膜神经节细胞保护作用及其作用机制的实验研究[J].眼科,2014,23(6):402-405.

[4] 张芳玲,邵蔚.银杏叶提取物注射液对NMDA诱导的视网膜神经节细胞损伤的保护作用[J].南京中医药大学学报.2014,30(3):283-286.

[5] 杜然然,毕宏生,郭俊国,等.枸杞多糖对体外培养视网膜神经节细胞的保护作用[J].眼科新进展,2014,34(2):119-122.

[6] 李诺,黄丽娜,曾平.白蒺藜皂苷对慢性高眼压兔视网膜SOD活性和MDA含量的影响[J].国际眼科杂志,2013,13(5):854-856.

[7] 沈惠芳,谢欣,杨文忠,等.注射用鼠神经生长因子多药联合治疗对缺血性视神经病变的作用[J].中国医院药学杂志,2015,35(15):1412-1414.

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10.3969/j.issn.1009-4393.2017.32.069

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