浆膜腔积液采集后质量控制在细胞学检查中的必要性

宋锁柱

（盘锦市传染病医院检验科，辽宁 盘锦 124000）

浆膜腔积液采集后质量控制在细胞学检查中的必要性

宋锁柱

（盘锦市传染病医院检验科，辽宁 盘锦 124000）

目的 本文旨在分析充池后静置时间、混匀程度、样本采集后放置时间对浆膜腔积液细胞学检测结果的影响。方法 随机抽取本院在2016年8月采集的32例浆膜腔积液作为研究对象分别进行①、②、③实验：①混匀样本充池放置0～1min、1～2min、2～3min、3～4min后进行细胞计数。②分析混合不均匀样本，分析混合均匀样本；③样本被放置1 h、3 h、5 h、10 h后进行细胞计数。结果 ①充池后，随静置时间推移，白细胞（WBC）、红细胞（RBC）数均逐渐增加，0～1min同1～2min比较、2～3min同3～4min比较，白细胞数、红细胞数差异无统计学意义；0～1min同2～3min、3～4min相比较差异有统计学意义（P＜0.05）；1～2min同2～3min、3～4min分别比较差异有统计学意义（P＜0.05）。②不同混匀程度组间的白细胞、红细胞计数差异均有统计学意义（P＜0.05）。③白细胞数、红细胞数随积液放置时间推移均有所减少。1 h和3 h比较，白细胞数、红细胞数差异均无统计学意义；1 h和5 h、10 h比较，白细胞数方面差异无统计学意义，而红细胞数差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 充池后静置时间、混匀程度、样本采集后放置时间会对某些检验结果产生影响。

浆膜腔积液；质量控制；时间；白细胞；红细胞

浆膜腔积液标本采集与处理[1]是样本质量控制环节中的重要部分，采集不当、转运检验不及时、以及检验中样本处理不恰当等都会导致检验结果的不准确。现对32例随机样本按实验需求进行下列实验，仅探寻样品采集后：样本充池后静置时间、混匀程度、样本采集后放置时间会对某些检验结果产生影响。

1 资料与方法

1.1 临床资料 现随机抽取本院在2016年8月期间采集到的浆膜腔积液32例，包括男18例，女14例，年龄24～65岁，平均（53.3±4.6）岁。其中胸水20例，腹水12例。纳入标准：经EDTA-K2（100mg/mL）抗凝（6mL积液加入EDTA-K 20.1mL）后流动性好无凝固现象、无大小凝块、标识清晰、非脓性及乳糜积液。排除标准：凡不符合纳入标准者。

1.2 实验器材 改良牛鲍血细胞计数板和盖玻片（上海求精生化仪器试剂有限公司）、OLYMPUS光学显微镜（日本OLYMPUS公司）、一次性微量吸管和EDTA-K2真空采集管（烟台永明医疗科技有限公司）。

1.3 实验方法 手工显微镜镜检按《全国临床检验操作规程》第4版[2]操作，对采集的样本混匀后均分为3份，分别进行试验①、②、③。①充池后静置0～1min、1～2min、2～3min、3～4min分别进行细胞计数；②分析混合不均匀样本，分析混合均匀样本；③样本被放置1 h、3 h、5 h、10 h后混匀进行细胞计数。三个实验均是计数白细胞（WBC）、红细胞（RBC）。

1.4 统计学方法 本研究数据均用SPSS 13.0统计软件处理，计量资料采用“x±s”表示,组间比较采用t检验,计数资料以率（%）表示,采用χ2检验；P＜0.05为差异有统计学意义。细胞计量单位（109/L）

2 结果

2.1 充池后静置不同时间的比较 随静置时间推移，白细胞、红细胞计数均逐渐增加。在白细胞、红细胞各自差异方面：0～1min同1～2min差异无统计学意义；2～3min同3～4min比较差异无统计学意义；1～2min同2～3min、3～4min分别比较差异有统计学意义；0～1min同2～3min、3～4min比较差异有统计学意义，见表1。

表1 充池后静置不同时间细胞计数的比较

表1 充池后静置不同时间细胞计数的比较

注：和2～3min、3～4min比较，a P＜0.05；和2～3min，3～4min比较，b P＜0.05

红细胞78.2±2.3a 88.4±3.0b 106.6±3.3 107.0±3.7时间（min）0～1 1～2 2～3 3～4白细胞1.12±0.04a 1.50±0.09b 1.89±0.11 1.90±0.13

2.2 积液不同混匀程度细胞计数结果的比较 不均匀组同均匀组白细胞数差异、红细胞数差异有统计学意义，见表2。

表2 积液不同混匀程度细胞计数结果的比较

表2 积液不同混匀程度细胞计数结果的比较

注：和均匀组相比较，a P＜0.05

组别不均匀组均匀组例数32 32白细胞0.76±0.08a 1.05±0.12红细胞50.4±2.7a 77.5±3.3

2.3 不同放置时间后检查结果比较 随放置时间推移，白细胞数、红细胞数均有所减少。1 h和3 h比较，白细胞数、红细胞数差异均无统计学意义；1 h和5 h、10 h分别比较，白细胞数差异无统计学意义，而红细胞数差异有统计学意义，见表3。

表3 积液放置不同时间后细胞计数结果得比较

表3 积液放置不同时间后细胞计数结果得比较

注：和5 h、10 h比较，b P＜0.05

红细胞88.5±4.5b 86.4±4.1 77.2±4.1 73.7±3.8时间（h）1 3 5 1 0例数32 32 32 32白细胞1.19±0.22 1.16±0.21 1.14±0.18 1.13±0.11

3 讨论

引发浆膜腔积液的相关疾病包括结核、胸膜炎、腹膜炎、肺炎、脾破裂、肝硬化、肝癌以及某些肿瘤等疾病，可能出现的临床症状包括营养不良、浮肿、腮腺肿胀、胆汁性肝硬化等[3]。积液按性质一般分为漏出液和渗出液，二者产生的机制和原因不同[4]，前者为非炎症性，后者为炎症性。浆膜腔积液检查有常规的理学检查，包括积液量、颜色、透明度、凝块形成、比重及酸碱度等，还有细胞学和化学检查，包括检查细胞的数量和种类，检测蛋白质、葡萄糖、脂类和肿瘤标志物等，此外还发展了特异性化学、免疫学等指标，提高了浆膜腔积液性质诊断的符合率。通过这些检验可以鉴别漏出液和渗出液，还可以鉴别良性和恶性积液为临床找出积液原因提供重要依据[5-7]。近些年又有学者[8]提出用血细胞分析仪对浆膜腔积液进行形态学检查，但并未显示良好价值。但也有资料[9-10]显示仪器法浆膜腔积液细胞计数与手工法具有良好相关性,且具有简便、经济、准确性高等优点。但不论是仪器或手工镜检法，若积液采集后未能及时送检并处理，那么放置较长时间的样本理化性质将发生改变，如糖和蛋白质分解、酶活性降低等，细胞的数量和形态也会发生变化，如细胞数量增多、减少、溶解和肿胀变性等[11]。这些都将加大理学、形态学、生化学的检验误差，甚至有可能会出现临床无法接受的结果。

本研究的实验结果显示，计数池充池后随静置时间推移积液内白细胞和红细胞数量逐渐变化，0～1min同1～2min差异无统计学意义，原因在于此段时间部分细胞还处于悬浮状态尚未沉于计数池底，细胞重叠未停留在同一平面，所以在初期，视野内细胞数量较少[12]。随静置时间的推移，细胞增长快速，2～3min与3～4min差异无统计学意义，因此段时间细胞已全部下沉至计数池底,细胞停留在同一平面计数结果基本稳定，但0～1min、1～2min与2～3min、3～4min分别比较差异有统计学意义（P＜0.05），因此充池后应静置2～3min后再计数；在本研究中，不均匀组与均匀组的白细胞、红细胞差异有统计学意义（P＜0.05），原因在于浆膜腔积液由医生采集后，若实验室较远或护理人员工作忙碌，样本不能够立即被运送检验，积液中的细胞会发生沉淀导致样本上层细胞减少。因此，检验前应充分混匀样本，否则细胞数会有所减少；本实验还显示，随样本采集后放置时间延长，积液内白细胞、红细胞数量均减少，白细胞1 h和3 h、5 h、10 h分别比较，差异无统计学意义，而红细胞数1 h与3 h比较差异无统计学意义,但与5 h、10 h比较差异有统计学意义（P＜0.05），原因在于，浆膜腔积液离体后，随放置时间的延长，样本中的糖分被持续增加的细菌等微生物分解，积液渗透压被降低，细胞生存能力下降，导致细胞肿胀、破坏溶解致使细胞数量减少[13]。本实验中虽然白细胞计数随时间延长减低不明显，个时间段差异均无统计学意义，但放置3 h的红细胞与5 h、10 h计数比较已有统计学意义。因此根据本实验结果，建议积液采集后应在短时间内检验完毕，最好不要超过3 h。

综上所述，在浆膜腔积液检查的诸多质控环节中本文所论述的充池后静置时间、混匀程度采集后放置时间对检验的准确度会产生一定的影响，在临床工作中医、护、技人员加强注意按标准和规范操作是得到及时准确的检验结果的前提。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2017.32.070