时间:2024-08-31
麻鸿飞,季生吉,马连学
(辽宁抚顺矿务局总医院检验科 辽宁 抚顺 113008)
淋巴瘤患者血浆中miR-21、miR-155、miR-210的表达及临床意义
麻鸿飞,季生吉,马连学
(辽宁抚顺矿务局总医院检验科 辽宁 抚顺 113008)
目的 探讨淋巴瘤细胞患者血浆中miR-21、miR-155、miR-210的表达情况及临床应用价值。方法选取淋巴瘤患者36例,淋巴结炎性肿大患者36例与健康人群36例,抽取外周血,经处理后,采用实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定3组血浆中miR-21、miR-155、miR-210表达情况,并分析三种miRNA的诊断率。结果淋巴瘤病例组血浆中miR-21、miR-155、miR-210表达量显著高于淋巴结炎性肿大组、健康对照组(P<0.05);miR-21诊断率为56.92%,miR-155诊断率为66.13%,miR-210诊断率为48.08%,三者联合诊断率为83.33%。结论通过对血浆中miR-21、miR-155、miR-210的表达进行测定,可用于淋巴瘤的临床诊断与疗效判定,且三者联合检测具有较高诊断率,值得推广。
淋巴瘤;miRNA;表达;意义
淋巴瘤是一种源自淋巴组织和淋巴结的恶性肿瘤疾病,该病男性患病率高于女性,该病发病率以4%的速度逐年递增,迅速成为了严重影响人类健康的恶性肿瘤,给人们的生命健康造成了极大的威胁[1]。为此,加强淋巴瘤的诊断、治疗与预后评价成为控制淋巴瘤的关键。目前,淋巴瘤诊断主要依靠淋巴结活检病理诊断,但若淋巴瘤不属于非表浅淋巴结肿大或者淋巴结较小的情况,则很难取材,并且病理诊断无法分析肿瘤负荷、分期、浸润程度等情况,无法为临床治疗提供更加全面的临床信息。游离肿瘤标志物主要是指蛋白多糖、细胞因子、核酸等物质,其主要由肿瘤细胞内部或者表面合成,或者由其他细胞诱导合成,并在其他体液、血液中均有相应表达。微小RNA(miRNA)作为一种单链小分子RNA,调节着人类1/3左右的基因。近年来,大量临床报道证实[2],在细胞生命活动调节中,miRNA可能参与各种信号传导途径,并在细胞分化、增殖、免疫反应等过程中发挥着重要作用,故推断血浆中miR-21、miR-155、miR-210可作为淋巴瘤诊断、疗效评价的重要指标。现结合本科室淋巴瘤患者血浆miR-21、miR-155、miR-210测定结果做如下总结。
1.1 临床资料 本研究病例均来自本院2013年1月~2015年12月接诊的淋巴瘤患者,所有患者均经淋巴结组织病理学检测确诊,选取36例作为本研究病例组,其中女12例,男24例,平均年龄(54.21±2.21)岁;从同期接诊患者中选取淋巴结炎性肿大患者36例,其中女14例,男22例,平均年龄(52.35±2.62)岁;另从同期健康体检人群中选取健康人群36例作为对照组,其中女15例,男21例,平均年龄(53.57±2.41)岁,3组患者临床资料比较差异均无统计学意义,具有可比性。
1.2 方法
1.2.1 标本采集与预处理 每例对象各取外周血3 mL,置于EDTA-K2抗凝管内,以1 600 rpm速度,行10 min离心处理,取上层血浆转移至EP管内,再以13 300 rpm速度,行10 min离心处理,取上层血浆置于EP管内,保存在-80℃环境下备用。
1.2.2 总RNA提取与纯化预处理 取1.5 mLEP管,置入500 μL血浆,置于75℃中加热5 min,放置于42℃下温育1 h。向处理后样本中加入体积相等的TRIzol试剂,充分混合,静置于室温下,20 min后向其中加入氯仿(1/5体积),充分振荡15 s,静置2 min;在4℃下行15 min离心处理,取上清液,并向其中加入体积相等的异丙醇,充分摇匀,放置于-20℃环境下沉淀,次日再次于4℃环境下,行10 min离心处理,去除上清液,并向其中加入75%乙醇(1倍体积),充分洗涤后,再次于4℃环境下,行10 min离心处理,去除上清液,沉淀晾干之后向其中加入适量的DEPC·H2O,确保其完全溶解,即可获得血浆RNA样本。
1.2.3 RNA定量与质量鉴定 采用分光光度计对RNA纯度、浓度进行测定,做好标记。
1.2.4 RT-PCR 运用实时定量反转录-聚合酶链反应(RTPCR)对总RAN RT引物、PCR引物进行测定。
1.2.5 PCR产物电泳及分析 取标本PCR产物8 μl电泳,对目的PCR产物条带进行测定,并运用Quantity one软件对扩增条带亮度进行分析,并测定基因U6亮度。
1.3 统计学方法 采用SPSS15.0对本次研究数据进行分析处理,组间均数比较独立样本均以t值检验。α=0.05为检验标准。
2.1 3组对象3种miRNA表达 淋巴瘤病例组血浆中miR-21、miR-155、miR-210表达量与淋巴结炎性肿大组、健康对照组比较,有显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。
2.2 3组对象3种miRNA表达诊断价值 miR-21诊断率为56.92%,miR-155诊断率为66.13%,miR-210诊断率为48.08%,三者联合诊断率为83.33%。见表2。
淋巴瘤的发病原因目前尚不明确,但学界认为与自身免疫功能异常、感染、放射性物质环境等均有直接关联[3]。组织活检是淋巴瘤诊断的主要标准,该方法具有较高准确性,且操作方法非常直观,但这种方法取材难度较大,加之创伤面积大,患者普遍难以接受。为此,排除临床特征检查和影像学等诊断手段,血清肿瘤标记物的优势随之体现,并成为了临床疾病诊断、预后判断等重要方法[4]。目前关于miRNA的来源问题尚无统一定论,但经过长期的研究已证实,其与血细胞有较大关联,且经过大量实验发现,外周miRNA在酸碱、温度等变化的情况下,其表达仍然非常稳定,同时外周血不存在性别差异,更利于参照值的设定[5]。为此,血浆miRNA检测是一种操作简单且不易受干扰的标志物,故本研究通过对血浆中miR-21、miR-155、miR-210表达进行测定,分析其在淋巴瘤诊断中的应用价值。
表1 miR-21、miR-155、miR-210在3组中的表达量(±s)
表1 miR-21、miR-155、miR-210在3组中的表达量(±s)
注:与病例组比较,aP<0.05
项目miR-21 miR-155 miR-210健康对照组(n=36)1.10±0.55a1.04±0.49a1.50±0.91a病例组(n=36)1.34±0.39 1.23±0.34 2.01±1.01淋巴结炎性组(n=36)0.78±0.23a0.62±0.35a1.09±0.32a
表2 miR-21、miR-155、miR-210对3组的诊断率(n)
miR-21在多种实体瘤中均有表达,有研究者[6]通过对比正常人与弥漫大B细胞淋巴瘤患者血清中miR-21表达,结果发现,淋巴瘤患者的表达量是常人的2.56倍左右,故其认为在弥漫大B细胞淋巴瘤诊断、鉴别中,可将miR-21作为重要标志物。miR-155位于人类21号染色体上,其表达水平直接受到BIC转录水平的影响。有研究[7]通过对弥漫大B细胞淋巴瘤患者血清miR-155表达量进行测定,结果发现,miR-155的拷贝数相较于正常的B细胞中表达量高出10-30倍。miR-210作为一种缺氧特异性miRNA,当体外处于缺氧状态时,其表达量会呈现为明显升高,有研究者[8]通过对弥漫大B细胞淋巴瘤患者血清与淋巴组织中miR-210表达量进行测定发现,均呈现为高表达,且相较于常人高出4.15倍。
本研究通过选取miR-21、miR-155、miR-210作为肿瘤检测标志物,采用RT-PCR对其表达量进行测定,结果发现,淋巴瘤病例组患者中miR-21、miR-155、miR-210表达量均显著高于淋巴结炎性肿大组、健康对照组(P<0.05)。该结果与上述各文献报道结果一致,这表明miR-21、miR-155、miR-210在淋巴瘤中均呈现为高表达,可用于淋巴瘤的临床诊断。另通过对miR-21、miR-155、miR-210诊断价值进行对比,结果显示,三者联合诊断的诊断率可达到了83.33%,显著高于miR-21、miR-155、miR-210单一诊断率。该结果表明,三者联合诊断具有更高的诊断价值。
综上所述,通过对淋巴瘤、淋巴结炎性肿大与健康人群血浆中miR-21、miR-155、miR-210进行测定,证实miR-21、miR-155、miR-210在淋巴瘤中呈现为高表达,且三者联合诊断具有较高价值,故认为miR-21、miR-155、miR-210在淋巴瘤诊断、治疗、预后判定中具有较高应用价值。
[1]胡应霞,张海蓉,石围,等.血浆miR-155、miR-196a、miR-21和miR-210对胰腺癌的早期诊断价值[J].肿瘤,2015,34(10):1135-1143.
[2]叶俏,沈洁,黄菊.血浆循环DNA在原发性干燥综合征和淋巴瘤中的比较分析[J].中华全科医学,2014,11(1):15-17.
[3]李春红,付蓉,王一浩,等.miR-21在弥漫大B细胞淋巴瘤肿瘤组织中的表达及临床意义[J].中国实验血液学杂志,2014,21(2):339-343.
[4]李春红,付蓉.miR-21过表达与淋巴瘤诊治[J].中国肿瘤临床,2014,51(7):471-474.
[5]史晋叔,张娟,李剑.miR-155在弥漫性大B细胞淋巴瘤发病中的作用及可能机制[J].中国实验血液学杂志,2014,21(3):869-872.
[6]卞国奉,陈爱军.miR-21、miR-155在乳腺癌患者血液与肿瘤组织中表达水平的相关性研究[J].海南医学,2012,39(18):1-3.
[7]俞心念,陈宝安.MicroRNA在弥漫大B细胞淋巴瘤诊断预后方面的研究进展[J].中国实验血液学杂志,2013,20(5):1351-1355.
[8]马瑞,哈德提·别克米托夫,顾霞,等.淋巴瘤组织和血浆中TNT-α表达及其临床意义[J].临床与实验病理学杂志,2011,26(9):939-943.
10.3969/j.issn.1009-4393.2017.07.014
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