HPV DNA检测诊断宫颈癌前病变的意义

智艳芳 李肖甫 李雁青 荣守华

HPV DNA检测诊断宫颈癌前病变的意义

智艳芳 李肖甫 李雁青 荣守华

目的 检测宫颈脱落细胞中HPV DNA进而诊断宫颈癌前病变，提高诊断率。方法 选取300例宫颈脱落细胞液用杂交捕获II代法（HC2法）检测HPV DNA感染情况，并用TCT法检测细胞病变情况。结果 300例样本中，细胞学阴性（NILM）127例（42.33%），ASCUS 95例（31.67%），ASC-H 16例（5.33%），LSIL 46例（15.33%），HSIL16例（5.33%）。所对应HPV感染率分别为依次为35.43%、61.05%、75.00%、78.26%和87.50%。同时31～50岁年龄段感染率高于其他年龄段(P＜0.05)。结论 HPV感染与宫颈癌前病变关系密切，随宫颈病变程度的增加而显著增加（HSIL＞LSIL＞ASC-H＞ASCUS＞NILM）。

人乳头瘤病毒；宫颈肿瘤；癌前病变；细胞诊断学

人乳头瘤病毒(hum anpapillom avirus,HPV)是最常见的性传播感染病原体之一，是导致宫颈癌发生的主要原因。因此，许多学者提出应当将检测HPV感染作为宫颈癌的一种筛查手段，以期在初筛中浓缩高风险人群[1-2]。本文通过二代杂交捕获技术（HC2）检测高危型HPV在宫颈癌前病变不同时期的感染情况，探讨HPV检测在宫颈癌前病变中的意义，为宫颈癌的防治提供依据。

1 资料与方法

1.1 临床标本来源及采集 采集2010年1月～2011年1月郑州大学第三附属医院门诊就诊的已婚或有性生活史的女性患者样本300份。分别采用TCT公司和美国Digene公司的一次性取样器，刷取宫颈外口和颈管脱落细胞进行TCT和HPV检测。患者年龄19～76岁，平均37.11岁。无子宫切除和相关宫颈手术史, 无盆腔放射治疗史。

1.2 人乳头瘤病毒检测 采用美国Digene公司提供的试剂盒，通过基因杂交捕获技术检测高危型HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)。工作原理：样本在碱性条件下加热水解，使DNA双链变为单链；试剂盒提供全长8000个碱基对的RNA混合探针，通过碱基配对的原理又重新组成RNA 2DNA双链杂合体(杂交)。杂交后的样本加到有单克隆抗体的96孔捕获板中，该抗体捕获杂交的RNA 2DNA双链杂合体。然后再与带有单克隆抗体的化学发光剂相作用，通过光信号放大被记录下来。

1.3 细胞学诊断 刷取的宫颈脱落细胞液经Th inp rep 2000系统自动制片机处理后，制成直径2cm薄层细胞涂片(TCT)，然后固定、染色。采用TBS(the Bethesda system)分级系统。分为未见癌细胞/癌前病变细胞(正常+炎症反应，NILM)、不明确诊断意义的非典型鳞状上皮细胞(ASCUS)、未明确意义的非典型鳞状上皮细胞不排除高度鳞状上皮细胞内病变(ASC-H)、低度鳞状上皮内病变(LSIL)和高度鳞状上皮细胞内病变(HSIL)，共5组。

1.4 统计学方法 所有数据采用SPSS17.0统计软件进行检验，数据采用χ2检验。P＜0.05为差异具有统计学意义。

表1 不同年龄组HPV感染情况

2 结果

2.1 HPV检出率与年龄的关系 300份样本中HPV阳性169例（占56.33%），感染年龄（37.11±9.52）岁，其中17～20岁和61～76岁两组的人数较少，其他各年龄组HPV感染率比较，31～50岁年龄段感染率总体高于其他年龄段(P＜0.05)，见表1。

2.2 宫颈脱落细胞学检测结果 TCT镜下检查：NILM 127例，年龄（37.11±8.40）岁；ASCUS 95例，年龄（38.35± 10.70）岁；ASC-H 16例，年龄（42.31±8.30）岁；LSIL46例，年龄（35.26±9.93）岁；HSIL16例，年龄（39.12±8.55）岁。见表2。结果表明，HSIL组的发病年龄在40岁左右。

表2 各细胞学病变组年龄分布情况

2.3 HPV与TCT检测结果比较 在300份样本中HPV阳性169例，TCT发现细胞形态和结构改变173例。细胞学检查细胞形态和结构未发现明显改变（N ILM）的样本中，HPV感染率为35.43%（45/127）；细胞形态和结构出现异常时HPV的检出率不断升高。在ASCUS和ASC-H组中，HPV感染率分别为61.05%（58/95）和75.00%(12/16)；LSIL组达78.26%(36/46)；HSIL组达87.50%(14/16)。检验：ASCUS和ASC-H两组之间差异无统计学意义(χ2=1.144，P=0.285＞0.05)；N ILM组与其他组比较差异均有统计学意义(P＜0.01)。表明细胞形态和结构的异常与HPV感染密切相关，即HPV阳性检出率HSIL＞LSIL＞ASC-H＞ASCUS＞NILM（见表3）。

表3 各组HPV感染情况

3 讨论

3.1 检测HPV感染的意义 目前HPV检测广泛用于HPV相关恶性病变的自然史和病因学研究。临床上正在成为宫颈癌的另一种或是附加的筛检方法。将HPV检测用于宫颈癌检查的基础在于HPV感染与浸润性宫颈癌和癌前病变密切相关。现有的流行病学资料显示，大约80%的低度宫颈癌前病变的患者体内可以分离出HPV，高度宫颈癌前病变的患者中有90%可以分离出HPV，几乎所有患浸润性宫颈癌的妇女都能分离出HPV。一组特异性、称为高危型HPV的持续感染，现在被公认为是宫颈癌的单一因素或是必要、联合致癌因素。HPV DNA检测检查宫颈癌前病变的灵敏度（84%～100%）通常高于Pap涂片法，但特异性较低（64%～95%）。HPV检测技术尤其是HC2法的出现为宫颈癌及癌前病变的诊断及病变进展的预测提供了准确的依据[3-4]。HC2检测反映了高危型HPV感染与宫颈病变之间的关系。

3.2 HPV与年龄 在本研究的300例样本中，HPV感染率为56.33%，31～50岁年龄段HPV感染率总趋势略高于其他年龄段。脱落细胞正常HPV的感染率最低，为35.43%。HPV感染约2个月后机体产生抗体，依靠免疫能力8～10个月可使HPV感染由阳性转变为阴性，但仍有10%～15%呈持续性感染状态[5-6]。经过8～10年，宫颈上皮细胞发生不典型增生，导致不同程度的癌前病变，继而癌变[3]。这里所说的HPV感染率是横断面感染率，横断0岁感染高峰也可能与中年阶段更换性伴侣有关。考虑到我国较为保守的性观念、性行为，笔者认为持续感染的增加或潜伏期HPV的再激活能更好地解释本研究中31～50岁感染高峰。Castie等[7]也报道了在哥斯达黎加，45岁及以上女性人群的HPV感染更多是和病毒持续感染有关，而非新的HPV感染。鉴于围绝经期高危型HPV阳性可能和病毒持续感染增加相关，高危型HPV筛查在围绝经期女性中的临床意义大于其在年轻妇女中的临床意义。对于围绝经期高危型HPV阳性的女性，进一步的细胞学检查要优先予以推荐

3.3 TCT改善了制片技术 膜式液基薄层细胞学检测系统是制片技术的重大革新。首先是解决了取材问题，液基取材采用固定样式的扫帚式刷子按规定手法操作，旋转式刷拭，取材具有代表性，刷头全部进入细胞保存液，不会丢失细胞标本。保存液中的细胞经Thin PreP2000系统程序化处理后，黏液、血液、炎细胞与上皮细胞分离，经高精密过滤器过滤，再混合后制成的涂片均匀一致，为单细胞层。在涂片中的不正常细胞容易被观察，并且湿固定的细胞核结构清晰，易于鉴别，降低了假阴性率，相对于其他检查能及早发现异常细胞，是宫颈癌筛查的理想技术。在本组实验中LSIL、HSIL两组患者年龄＜40岁，这一佐证提示宫颈癌发生的年龄有逐渐年轻化的趋势[8]。

3.4 HPV与细胞学的关系 在ASC-US和ASC-H两组中有60%以上的患者感染HPV；LSIL组HPV感染占78.26%；HSIL组占87.50%。本文虽然缺少病理组织学的结果，但是随着TBS的级别增高，HPV的感染率也出现升高的倾向。它们之间的关系是：HPV阳性检出率HSIL＞LSIL＞ASC-H＞ASCUS＞NILM，这与文献报道一致[9]。

宫颈癌早期发现和早期治疗仍是当今治疗的有效措施。治疗上除手术切除肿瘤组织外，还应该切除HPV感染的组织，这一治疗观点已经被越来越多的学者接受，HPV的持续感染是治愈效果差和复发的重要原因。因此HPV检测有利于宫颈癌及宫颈癌前病变的诊断，并可以对感染情况进行评价，即HPV阳性尚存在HSIL＞LSIL＞ASC-H＞ASCUS＞N ILM组的规律，若这一关系出现顺序的倒错，提示细胞病理学医生在对宫颈病变诊断或分级可能存在偏差[10]。因此，HPV感染与否对宫颈疾病治疗方法的选择、治疗效果的评价和随访都提供了有利的依据。

所以，将高危型HPV检测作为筛查手段，可以比通常采用的宫颈细胞学检测更有效地浓缩高风险人群，对临床具有指导作用。例如细胞学阴性而高危型HPV阳性者，发病风险度较大，应密切定期随访。就如Cuzik等[11]所认为的那样，应当将HPV置于子宫颈癌的病因链，使HPV检测成为一种筛选子宫颈癌的手段，这必将有助于宫颈癌的预防。

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O bjective Human papilloma virus(HPV) DNA were detected to diagnose the precancerous cervical lesions and raise the diagnosis rate. Methods 300 specimens of cervical desquamated cells and secretion from cervical canal were tested w ith hybrid capture II (HC2 HPV DNA)and thinprep cytology(TCT)methods. Results Among 300 desquamated cervical cells specimens w ith TCT examination,127 specimens showed Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy（42.33%）,95 ASCUS（31.67%）,16 ASC-H（5.33%）, 46 LSIL （15.33%）and 16 HSIL（5.33%）. The positiverates of HPV however, were：61.50% of ASCUS, 75.00% of ASC-H, 78.26% of LSIL and 87.50% of HSIL, respectively. There was a slightly higher rate in age 31-50 groups, and the positive rate in NILM was 35.4%. Conclusion There was a high correlation (P＜0.01) between HPV infection and the abnormal cell morphology and cell construction. The Rate of positive HPV infection was obviously increased when abnormal cellular morphology and structure were found (HSIL＞LSIL＞ASC-H＞ASCUS＞NILM).

Human papillomavirus;Cervixneoplasms;Precancerous conditions;Cytodiagnosis

book=13,ebook=62

10.3969/j.issn.1009-4393.2012.26.008

450052 郑州大学第三附属医院细胞室 （智艳芳 李肖甫 荣守华） 310009 浙江大学医学院附属第二医院 （李雁青）