铁岭地区猪肉源大肠杆菌耐药性的调查研究

安妮

1 前言

大肠埃希菌（E.coli）俗称大肠杆菌，是人和动物肠道内的正常菌群成员之一，常随粪便排出，故被用作水、食品和饲料等卫生检测的指标。少数具有致病性，可以引起畜禽特别是幼畜禽的大肠杆菌病。本研究拟对铁岭地区猪肉源大肠杆菌的药物敏感性进行检测，为指导临床合理使用抗菌药物提供依据，以减少耐药菌株的产生。

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 菌株

2019年7月，从铁岭地区2家市场采集的样品中分离得到13株大肠杆菌。

2.1.2药物

氨苄西林、头孢唑啉、头孢噻肟、美罗培南、庆大霉素、阿米卡星、链霉素、四环素、氯霉素、氟苯尼考、萘啶酸、环丙沙星、黏菌素、磷霉素、复方新诺明。

2.2 方法

采用琼脂稀释法，对13株大肠杆菌进行耐药性检测。

2.2.1菌液制备

将已纯化并鉴定的大肠杆菌在琼脂平板上划线培养后，挑取单个菌落接种于2mL MH 肉汤管中，37℃恒温振荡培养4～8小时，用MH肉汤稀释菌液，至含菌量约为1×106 CFU/mL，备用。

2.2.2 抗菌药的稀释

把抗菌药物原液按试管二倍稀释法在试管中稀释到需要的各個梯度，吸入2mL药液放进做好标记的平皿中。

2.2.3 药物琼脂平板的制备

用25mL灭菌移液管吸取18mL 冷却至50～60℃MH琼脂，加入已有2mL抗菌药物的平皿中，吹打混匀。同时每种药物设有两个空白琼脂平板。在超净工作台中风干冷却后，立即使用。

2.2.4 细菌的接种

按照药物浓度从低到高的顺序，将菌液接种到琼脂平板表面。将接种好菌液的琼脂平板放置在超净台内，直到接种的菌液被琼脂完全吸干。然后将平板放入培养箱，37℃恒温培养18～24h。

2.2.5 结果判定

当接种前后两块空白的MH平板上的所有接种点的菌生长良好，而无接种细菌的平皿均无菌落生长时，实验组完全不见细菌生长的最低药物浓度为该药物对细菌的最小抑菌浓度（MIC）。以 MIC值规定的敏感、耐药折点值范围判断结果。受试药物的敏感折点值判断标准见表1。

3 结果与分析

实验中13株大肠杆菌对氨苄西林、四环素、氯霉素的耐药率在70%以上，对的头孢唑啉、氟苯尼考、萘啶酸、复方新诺明的耐药率在15%以上，对头孢噻肟、美罗培南、阿米卡星、链霉素、环丙沙星、黏菌素均敏感。

4 讨论

本研究中，大肠杆菌对四环素的耐药率高达92.3%，分析其原因可能是四环素类抗生素作为广谱抗生素，在临床上使用范围广泛，存在交叉耐药。

氨苄西林、头孢唑啉、头孢噻肟和美罗培南都属于β-内酰胺类抗生素。在本研究中，氨苄西林的耐药率达到76.9%，而头孢唑林的耐药率有46.2%，而头孢噻肟和美罗培南则全部敏感，差别比较大。本研究中，氨苄西林属青霉素类β-内酰胺抗生素，头孢唑啉和头孢噻肟则属于头孢菌素类β-内酰胺抗生素。青霉素类β-内酰胺抗生素与头孢菌素类β-内酰胺抗生素对不同的青霉素结合蛋白具有不同的亲和力，这可能是本研究中大肠杆菌对两类药物耐药率不同的原因之一。而且氨苄西林在临床上使用也较头孢唑林和头孢噻肟早，这可能也是前两者的耐药率较后两者高的原因之一。

氟苯尼考和氯霉素同属酰胺醇类抗生素。本研究中，氟苯尼考的耐药率在15.4%，而氯霉素则达到76.9%，这可能是由于其临床应用较后者少。

阿米卡星、庆大霉素属于氨基糖苷类抗生素。本研究中，庆大霉素的耐药率达到0.7%，虽然此药已在临床广泛应用，但是其耐药性维持时间短，停药一段时间后易恢复敏感性，这是庆大霉素的耐药率依然能维持较低值的原因。阿米卡星则全部敏感，这可能是由于其临床应用较庆大霉素少。

5 结论

实验表明，一些常用药物在猪肉源大肠杆菌中的耐药率较高，这将给临床治疗大肠杆菌的感染带来困难。为了达到最佳的治疗效果，需要正确合理地使用抗生素，在药敏试验的基础上有针对性地选择用药，加强对细菌耐药性的监测以及对临床用药的指导和监管，避免耐药菌向人类的传播。