猪附红细胞体病实验室诊断

张志庆

摘要：依照山东省菏泽市牡丹区某养殖场生猪养殖现状，整合养殖场猪群发病死亡的主要原因，通过无菌采集方式获取发病猪血液作为检验病料，应用血涂片、细菌分离培养、病毒核酸检验等方式进行实验室应用诊断。从结果中获取结论，其中细菌分离培养以及病毒核酸检验结果大多都表现为阴性，通过血涂片操作显示出大多数红细胞边缘整齐度较差，存有不同不规则形状，能适应红细胞体基本感染特征，其养殖场此例猪群发病重要原因是附红细胞体感染。

关键词：猪;附红细胞体病;实验室诊断

中图分类号：S858.28  文献标识码：B     doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.14.052

0引言

附红细胞体病主要是由附红细胞体诱发疾病，主要表现为发热、溶血性贫血、黄疸等人畜共患传染病，该病病原体属于支原体科，此病大多发生在夏秋时节，容易产生流行性，加上病害寄主范围较广，在目前多种动物养殖中都会产生。

1实验室诊断材料与方法

在检测病科中主要通过无菌采集方式获取5头病猪血液，在试剂选用中主要是应用革兰氏染色液、RNA快速抽提试剂盒、基因组DNA提取试剂盒。猪圆环病毒2型、繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、乙型脑炎病毒等。在细菌分离培养中，在洁净度较高的工作台中，通过灭菌接种环提取相应的抽检血液样本，将其在鲜血以及常见的琼脂培养基中均匀性涂抹，成功接种后在培养基中37℃培养箱环境中倒置培养16?24 h，实验人员要对菌落具体变化现状进行分析。在病毒核酸提取中，通过RNA抽提试剂盒对总RNA快速提取。之后做好cDNA以及PCR扩增操作，对PCR产物凝膠电泳现状进行分析，在1.2%琼脂糖凝胶上将获取的PCR进行电泳，再将凝胶块能放人到凝胶成像仪器中，对其结果进行分析。在血涂片检查中，要应用革兰氏染色镜进行检验，对血涂片革兰氏进行染色操作，实验人员要通过显微镜进行观察检查。在姬姆萨染色镜检操作中，选取常用方法对血涂片进行合理制备，等到血膜全部干后，应用甲醇进行固定。在染色架中放置血涂片，及时滴加稀释成功的姬姆萨染色液，使其能在完整的血膜中进行覆盖，在正常室温状态下将其染色15?30 min。实验人员选取适量蒸馏水从玻片端进行冲洗，玻片风干后及时进行镜检^[1]。

2结果与分析

对患有红细胞体病的病死猪进行剖检能得出，生猪脂肪层、内脏器官等处都受到不同程度感染，泛发性黄疸表现突出。生猪全身肌肉群开始变色黯淡，血液大多都是表现为水样状态，凝固性较差。全身淋巴结肿大问题较为严重，切面呈现出外翻现象，潮红突出，有诸多液体渗出。肝脏肿大问题严重，质地脆弱，细胞大多是表现为脂肪变性问题，主要是为黄棕色以及土黄色。胆囊肿大突出，并且胆汁浓稠度较高，脾脏位置肿大明显，质地脆弱。在膀胱粘膜中布有不同程度血点，心肌松软苍白，脑部位置存有严重积液问题。

将鲜血营养琼脂培养基与普通琼脂培养基通过接种血液后，37℃环境中通过16 h培养，并未能发现菌落存在生长现状。在病毒核算检验中，选取各类特异引物对核酸样本采取PCR扩增措施，将获取的产物在琼脂糖凝胶中进行电泳，未能出现预期扩增条带，各个病毒在检测过程中主要表现为阴性。在血涂片检查结果分析中能得出，技术人员对血涂片革兰氏染色镜检并未发现细菌存在。从姬姆萨染色镜检现状中能得出，在可见范围内诸多红细胞开始发生明显变形问题，其原有的光滑形态开始逐步丧失，边缘处平整度较差，开始展示出层次不齐的不规则形状。在红细胞表层中大量附着的病原体会被染成不规则性颗粒，技术人员基于油镜进行观察，其外部不规则现象突出，中间位置明亮度较高，将其判定为附红细胞体。

在试验开展中主要对5个发病猪血液样本进行细菌分离培养操作，对血涂片进行全面检查，做好病毒核酸规范化检测，对附红细胞体感染问题进行确诊。附红细胞体属于嗜血支原体科，该病一年四季在生猪养殖中均会发生，其中夏秋季节高发，可以基于垂直以及水平方式进行传播，大量昆虫等会对此类病害进行传播。在生猪长期养殖中养殖环境较差，管理措施不合理，养殖环境温度变化较快等都会导致病情全面扩大，带来较为严重的经济损失。目前针对附红细胞体病在诊断中可选取的诊断应用措施较多，如应用较多的血涂片检查诊断方式，但是此类方式仅是作为实验辅助性方式，因为其会产生假阳性结果，诱发误判问题。在实验诊断中应用速率较快的是酶联免疫吸附试验，但是此类方法在具体应用中受到检测抗原纯度影响会产生诸多假阴性结果，目前都是在各类流行病学检查中应用。在诊断方法应用中分子生物学诊断技术应用重要性较强，在临床中应用较多的是PCR技术，其敏感性与特异性突出。虽然针对此类疾病可以选取多种诊断方式，但是由于生猪患病后各项表现不明显，对疾病诊断工作开展具有较大限制作用^[2]。

3预防与治疗措施

在生猪现代化规模养殖中要对养殖饲养各个环节进行规范化管理，在养殖活动中投入充足高营养含量的全价饲料，确保猪群能健康生长。要对养殖环境温度情况进行控制，做好养殖区域通风以及温度控制工作。对饲养中存有的各类应激因素进行控制。在猪附红细胞体病高发阶段，要及时采取针对性措施对吸血昆虫进行杀灭。技术人员要定期对针头、注射器等进行全面消毒处理，在疫苗接种及治疗注射中，1头生猪使用1个针头^[3]。在母猪接产中要及时选取针对性消毒控制措施。养殖中技术人员要强化养殖环境消毒处理，定期对猪舍环境进行清理，对生猪排泄物进行清除，做好卫生消毒工作与驱动管理操作。最大程度降低生猪养殖中病害发生几率。在日常投喂饲料中补充适量金霉素、四环素、土霉素、阿散酸等，对猪附红细胞体病具有良好预防应用成效。

如在每吨饲料中要补充48 g金霉素或是在每升饮水中添加50 mg金霉素，连续应用1周时间，能对猪附红细胞体病发生情况进行控制。在母猪分娩前要依照其体重大小，以11 mg/kg体重为标准注射土霉素，能有效防控母猪发病，针对1日龄仔猪每头注射50 mg土霉素，能对仔猪发病情况进行控制。在药物防治过程中，针对每千克体重通过静脉注射10?15 mg新胂凡纳明，再应用相同方式注射葡萄糖注射液与维生素C，连续注射3d。在每吨饲料中投入600?800 g土霉素，设定2?3个疗程，相关技术人员依照3 mg/kg体重注射相应的四环素。对于患病仔猪，在治疗中应用磺胺-5-甲氧嘧啶注射液进行肌肉注射，连续施加1次，连续应用3d。在猪附红细胞体病患病初期，可应用三氮脒进行防治，但是针对于病重猪效果不佳。生猪每千克体重注入5?7 g三氮脒，通过深度肌肉注射，间隔48 h注射1次。在阿散酸施加中，每吨饲料投入180 g，连续施加1周。

4结束语

通过一例猪附红细胞体病的实验室诊断得出，该类疾病在诊断中可应用的方法较多。要结合一例猪附红细胞体病发病具体现状采取针对性预防控制措施，降低猪附红细胞体病发病几率，提升猪养殖成效。

参考文献

[1]张喜懿，温贵兰，张升波，等.一例猪附红细胞体病的实验室诊断[J].贵州畜牧兽医，2019，43（2）：27-30.

[2]鄢长庆，杨明.一例猪附红细胞体病的诊断与治疗[J].畜牧兽医科技信息，2018（7）：96-97.

[3]张垂调.一例猪附红细胞体病的诊治[J].福建畜牧兽医，2016（1）：43.