用TTC培养基法对食品进行微生物检验的效果及价值研究

梁健宇

摘要：目的：探讨TTC培养基法对食品进行微生物检验的价值。方法：遴选本检验所需要检验的100份食品样品进行研究（2019年03月至2020年12月），由同一位工作人员采集两份同样的样品，其中一份实施TTC培养基法、平板菌落计数法检验，另一份将样品送往上级实验室检验，对两份样品进行同种项目检测，并以上级实验室检验为金标准，分析不同检验方法临床价值。结果：平板菌落计数法检验结果与金标准相符率83.00%，TTC培养基法检验结果与金标准相符率为99.00%，组间对比P<0.05。结论：TTC培养基法在食品微生物检验中准确率较高，可作为检验食品质量的优选方案，值得借鉴。

关键词：TTC培养基法;食品;微生物检验;平板菌落计数法;上级实验室;食品质量

【中图分类号】G644.5             【文献标识码】A             【文章编号】2107-2306（2021）07--02

受益于社会经济的发展、居民生活质量的提升，当前我国居民对食品卫生要求逐渐升高，但研究发现食物在加工及运输过程中受多种因素影响，极易出现卫生状况不合格等情况，究其原因是食物与微生物接触后导致食物发生污染，不仅会影响食品质量，亦可影响我国居民健康程度，鉴于此需对食品进行有效检验[1]。目前多通过平板菌落计数法对食品中微生物菌落总数进行检验，但据悉该方案虽可获得一定价值，但平板菌落计数法无法确保检验质量，近年随着食品微生物检验技术的发展，目前TTC培养基法被应用在临床检验中，为进一步明确其临床价值，本文遴选2019年03月至2020年12月接收食品样品100份进行研究，具体情况如下。

1资料与方法

1.1一般资料

遴选100份食品样品进行研究，其中48份小吃、46份冷冻饮品、6份能力验证样品，均来源于本实验室检验的样品。TTC溶液来自广东环凯微生物科技有限公司，平板计数琼脂来自北京陆桥技术股份有限公司，营养琼脂来自广东环凯微生物科技有限公司。

1.2方法

纳入研究100份食品样品均实施TTC培养基法、平板菌落计数法检验，具体操作方法如下：（1）平板菌落计数法：为确保检验结果准确性，平板菌落计数法检验需按照国际标准（GB4789.2-2016标准）进行，实施前采集25g样品放入含无菌生理盐水（225ml）锥形瓶中，通过摇晃使样品充分混匀;其次吸出1ml样品（无菌吸管），而后沿着试管壁缓慢注入9ml生理盐水，通过震荡混合，得到1：100的样品溶液;按上述方法制备出1：1000、1：10000的样品溶液。在检验过程中根据样品污染情况选择稀释合适的样品溶液，分别吸取1ml放置入无菌器皿中（每个稀释度做2个器皿），分别提取1ml空白稀释液放置入2个器皿中（空白对照样品）。最后对琼脂培养基进行加温（46℃）處理，将15ml加入器皿中通过转动混匀，当出现琼脂块后翻转放置在36℃温度中培养48-50h。（2）TTC培养基法：为确保检验结果准确性，TTC培养基法实施需按照GB4789.2-2016标准进行，首先取1ml0.5%的TTC溶液（100ml）加入琼脂培养基中制备出TTC琼脂培养基，样品接种及培养方法如平板菌落计数法。

1.3观察指标

以上级实验室检验结果为金标准，分析TTC培养基法、平板菌落计数法检验与金标准符合率。

1.4统计学方法

食品样品选用SPSS22.0统计软件分析准确率等计数资料（以n、%表示，X2检验），有统计学意义以P<0.05表示。

2.结果

上级实验室检验结果为金标准，对比发现TTC培养基法检验与金标准相符率为99.00%，平板菌落计数法与金标准相符率为83.00%，组间对比（P<0.05）。详见表1。

3.讨论

随着社会的发展近年食品加工企业得到了快速发展，市面上食品种类越来越多，但近年食品安全问题层出不穷，不仅严重威胁人体健康，还提高社会大众对食物安全重视程度[2]。据悉食品在加工、贮存、运输过程中会接触各种微生物，一旦食品中微生物含量超标会导致食物变质，鉴于此需加强食品的检验以明确其是否合格，针对不合格者需及时处理，避免进入市场后引起的社会性问题[3]。

既往人们多通过平板菌落计数法对食品中微生物进行检验，但其检验效果及准确性一般，但最新研究发现TTC培养基法在食品检验中亦可获得理想价值，为进一步探讨TTC培养基法在食品微生物检验中价值，本文选择100份食品样品进行研究，给予其不同方案检验以明确准确率最高方案，为临床检验食品质量提供参考，结果显示：以上级实验室结果为金标准发现平板菌落计数法检验结果与金标准相符率83.00%，TTC培养基法检验结果与金标准相符率为99.00%，组间对比差异具有统计学意义（P<0.05），由此证实TTC培养基法在食品检验中更具优势，可替代平板菌落计数法成为检验食品质量的首选方案，分析：（1）从理论上将平板菌落计数法主要是根据固体培养器皿中微生物沉积情况对菌落数量进行分析，但在实际检验过程中需要对待检样品进行稀释，将样品中的微生物分散成单个细胞，并将取得的稀释液涂抹在平板上进行分析，在实施细菌培养过程单个细胞通过繁殖均可形成菌落，不需要借助显微镜便可直接发现;其次在菌落计算完毕后可通过稀释倍数等对微生物总量进行计算，分析其感染程度，通过实践发现平板菌落计数法操作简单，因此被广泛应用在微生物检验过程中，但该方案对操作人员专业能力要求较高，若操作过程中没有将各个微生物分开，或平行划线、扇形划线等操作要求不达标，不仅会导致微生物集合在一起，还会影响菌落计数结果，因此一旦实际操作过程中检验人员专业知识不足或操作水平无法达到检验要求，便会导致检验不不合格等情况[4-8]。（2）TTC培养基法作为标准的氧化还原电位为80mV的氧化还原位置，在水中无色但一旦被还原，便会转化为红色且不会溶于水;研究发现，大部分微生物中含有脱氢酶，其会导致作用物发生脱氢效果，因此在实施过程中自琼脂中加入适量的TTC（每100ml中加入0.5%TTC1ml），借助细菌微生物特性使其变成红色，在检验过程中通过观察TTC琼脂颜色，便可对微生物含量进行测定[9]。与平板菌落计数法相比TTC培养基法准确率较高，据悉当食品样品污染程度较严重（每个器皿中微生物含量计数>200）便会平板计数无法进行，而TTC培养基法检验中即使微生物含量计数>300依旧可准确检出微生物数量，但该方案检验成本较高，无法广泛应用在食品微生物检验过程中[10]。

食品微生物检验结果受制度、设备、流程、人为因素等影响，制度因素是指实验室制定的检验质量标准不完善，医院平时在管理中对检验标准宣传不足，导致工作人员在实际检验中不按照规定制度进行检验，致使检验结果准确率不高;所谓设备因素是指进行微生物检验的设备出现老化、故障，导致检验结果出现误差，从而影响检验结果准确率，还有部分检验人员因操作不规范导致检验数据不准确;所谓流程因素是檢验人员对检验流程、培养基方法认知不足，导致培养基在存贮过程中发生污染;人为因素是检验人员专业能力不足所致，实验室管理人员对检验人员考核不足，平时没有加强专业能力培训会导致其无法满足检验需求，从而出现管理失误等情况，除上述因素外食品微生物检验结果还受多种因素影响，因此检验人员在工作中一定要加强自身专业素养提升，避免因自身因素影响检验结果准确率。结合上述影响检验结果因素，微生物检验科室一定要结合相关标准、规定，规范检验制度明确检验过程中需要注意事项，从而确保检验质量;其次在实验室管理中一定要保持良好的通风及照明，并尽量在干净无菌环境中进行检验，避免其他因素造成的污染，同时需按照相关规定合理穿戴检验服，以确保自身安全性;再者定期对实验室进行消毒，所用设备均需按照相关要求消毒、灭菌后使用，同时实验室要加强质量控制，还需重视检验制度的制定与完善，降低其他因素对检验结果的影响。为确保微生物检验结果及质量，检验室需定期引进先进的设备，在设备使用前需首先明确设备操作方法，还需根据提示进行预热，同时对科室内专业人员进行培训使其按照相关流程进行工作，而在工作中需保持谨慎的态度，尽可能准确记录培养基颜色、生物学指标等，确保其在培养过程中满足微生物生长要求，避免影响检验结果准确率。

注意事项：TTC培养基法检验结果不仅受操作流程规范程度、无菌制度的影响，还易受检验人员专业能力影响，因此检验室在管理中要加强检验人员专业能力的培训，尽可能通过定期培训、讲座、技能考核等提高其专业能力，使其在工作中高质量完成各检验任务，还可有效处理突发事件，确保检验结果准确性。实验室环境也会影响检验结果，因此在实验室检验过程中需合理控制温度、湿度，尽可能让各个培养皿干燥、整洁并符合检验要求，而操作人员在检验前需对各项参数进行检查，确保其各正常运转且不会影响检验结果。为避免操作流程复杂影响检验结果，需对食品微生物的检验检测材料、设备、方式进行明确，不可随意更改，还需对食品微生物进行针对性抽检，以明确其检验结果。

不足之处：基于本研究方案设计较为简单，通过对比研究虽可证实TTC培养基法价值，但未明确其对细菌菌落检出情况，加之本研究纳入样本数量较少，无法为检验人员提供高质量的参考，鉴于此后期需优化研究设计方案，通过多指标、多数据对比为食品检验人员提供参考，还需尽可能扩大研究样本以分析影响检验结果因素，从而展开针对性管理，提高TTC培养基法检验价值。

综上所述，TTC培养基法可提高食品检验准确率，因此可将其作为检验食品质量的首选方案，值得借鉴。

参考文献：

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[8]葛雯，李鑫，张爽.抗疫背景下“食品微生物检验技术”课程思政探索与实践——以“食品微生物检验员的素养要求”教学任务为例[J].淮北职业技术学院学报，2020，19（03）：44-46.

[9]杨文君.食品微生物检验常用培养基配制及灭菌后贮存有效期的研究[J].现代食品，2020，12（09）：187-190.

[10]傅志丰，周鹤，许文蓓.浅谈食品微生物检验中菌落总数和大肠菌群测定注意事项[J].食品安全导刊，2019，15（26）：34-36.