临床微生物实验室B族链球菌检测进展

滕洁丽

【摘要】传统的GBS的检测方法包括临床样本直接涂片染色镜检和细菌培养，一些新的检测方法包括乳胶凝聚实验、免疫层析法、基因组学法（荧光原位杂交法、斑点印迹法、实时荧光定量PCR法）、蛋白质组学法，这些检测方法的使用显著提高了疾病的早期诊断水平，但仍有必要进一步了解与总结。本文就GBS实验检测方法及进展进行综述。

【关键词】B族链球菌;细菌培养;PCR

B族链球菌（Streptococcus agalactiae，GBS）正常寄居在人的陰道与直肠，其感染对母婴危害非常大，能诱发孕产妇绒毛膜膜炎、子宫内膜炎等，严重可致早产和死胎，因此早发现早预防十分必要。随着临床实验室检测技术的快速发展，为临床早发现早预防提供便利。本文主要内容包括：GBS标本直接检测法、细菌培养法及分子生物学检测法。

1 标本直接染色镜检

GBS属于兼性厌氧的β溶血性革兰氏阳性链球菌，单个、成双、链状排列、长短不一，有经验的检验人员可通过直接镜检可初步判断。直接染色镜检操作简便，结果直观，比较快速，但总体敏感度从34%-100%不等，特异性普遍低为61%-72%，阳性预测值为13%-33%。在用涂片染色镜检法检测GBS时，需要采用多次取材并做多张涂片，以提高检测的阳性率。此法简便适用于基层，可作为带菌者的筛选方法。

2 细菌培养法

细菌培养法是GBS检测的金标准。采样一般为阴道拭子（采用无菌拭子，于阴道口约1/3处旋转取样，不需要使用阴道扩张器）和直肠拭子（在肛门口深2cm左右轻轻旋转采样）。

2.1普通培养法

将标本直接种在血平板上，接种后置于5% CO2、35℃孵育箱，孵育2d观察菌落生长情况，如有菌落生长则作鉴定。提高检测率可先将标本经肉汤培养基培养12小时后再转血平板培养。

2.2液体显色培养

将标本置于液体显色培养基中，利用GBS具有产生橙色类萝卜素天然色素的独特性，使培养基显色。特异性和敏感度较高，结果可以通过肉眼判读。缺点：一些弱阳性结果会呈点状散于培养基中或出现在沉淀物与上清液交界面，不可震荡培养基。

2.3显色平板培养

显色平板培养是传统培养法的改良，在平板上添加某类抑制剂和指示剂，使GBS菌落显色为特定的颜色。如安图的GBS显色平板，GBS菌落为粉红色，非目标菌多数为蓝色或绿色，易于辨认。

细菌培养法优点可以做药敏，缺点因其操作过程复杂、耗时长（需要24～48 h），并且由于阴道及肛门周围杂菌较多，检测结果会有一定的假阳性和假阴性，但准确性高。

3   CAMP试验

CAMP试验为触酶阴性和协同溶血试验，挑取可疑菌落进行CAMP实验，在血琼脂平板上用产生β-溶血素的金黄色葡萄球菌培养物划一条直线，然后将链球菌培养物划一条线，与金黄色葡萄球菌培养物的划线相互垂直，二者相距3～5mm，各链球菌分离菌划线间距10～20mm。置37℃温箱内培养24h后观察结果。在两划线交界处是否出现箭头样的溶血区，出现为阳性，反之阴性。这是一种特异性诊断试验，但试验时间长，操作步骤繁琐，容易受到部分β-溶血链球菌（如假豕链球菌等）及血平板各批绵羊血不同的干扰，还有其他很多因素影响。

4   聚合酶链反应

聚合酶链反应（polymerase chain reaction， PCR）快速诊断GBS的原理是通过设计特异性引物和探针，对GBS中保守序列进行扩增，用荧光的强度检测产物的数量。靶基因快速准确的扩增百万倍，达到迅速、敏感检测 GBS的目的。荧光定量PCR法是通过实时荧光PCR仪检测荧光强度以判断孕妇是否具有GBS感染，有快速、准确、敏感度高等特点，在临床上更为实用，是目前临床上应用较普遍的GBS检测方式，已在许多医院中投入使用，但是其仪器昂贵、技术要求较高的特点限制了该技术在基层医院的广泛应用。

5  结束语

GBS检测方法很多，直接涂片染色操作简便直观实惠。培养法准确率高，还可以做药敏，但耗时长。PCR简单、快速具有高灵敏度和特异度，但对实验室条件要求高。每个方法都有优缺点，我们可以根据自己的实际情况选择合适的检测方法。随着科学的不断进步，检测技术的不断发展未来有能通过先进技术解决现在方法的局限性。

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