芹菜素对雌性小鼠性激素的剂量效应研究

龙昌权　刘倩　杨琴　罗斌　杨纲

【摘  要】初步研究剂量浓度不同的芹菜素对雌性小鼠性激素中雌二醇含量的影响，对进一步发掘其剂量效应提供一定的实验科学依据。将48只4～6周龄的雌性小鼠分为4组，即低、中、高剂量组以及空白对照组，每组12只，对照组给予0.01ml/g生理盐水灌胃，实验组给予0.01 ml/g 不同剂量（低剂量组252mg/L，中剂量组504mg/L，高剂量组1008mg/L）的芹菜素悬浊液进行灌胃。实验人员通过连续分批的7d、14d、21d进行芹菜素以及生理盐水灌胃后将小鼠分批次处死进行眦静脉丛取血。采用ELISA检测试剂盒进行血清中雌二醇（Estradiol，E2）的测定。将获取数据录入SPSS17.0软件，利用x±s多组间比较采用方差齐性检验和单因素方差分析;检验水平α= 0.05。结果为P<0.05，再经过图表分析可知，芹菜素对雌二醇的分泌有促进作用，成正相关关系。

【关键词】芹菜素;雌性小鼠;雌二醇;性激素

【中图分类号】R249     【文献标识码】A       【文章编号】1004-7484（2019）10-0026-02

Dose Effect of Apigenin on Sex Hormones in Female Mice

LONG Chang-quan LIU-Qian YANG-Qin LUO-Bin TAN-Yi Yang-Gang*

college of basic medical sciences， changsha medical university，Hunan Changsha410219，China

Abstract：Preliminary study on the effect of apigenin with different dose concentration on estradiol content in female mice sex hormones provides certain experimental scientific basis for further exploring its dose effect. Forty-eight 4-to 6-week-old female mice were divided into 4 groups， i.e. low， medium， high dose group and blank control group， with 12 mice in each group. the control group was given 0.01ml/g normal saline and the experimental group was given 0.01 ml/g apigenin suspension of different doses （252mg/L in low dose group， 504mg/L in medium dose group and 1008mg/L in high dose group） for gastric perfusion. The researchers administered apigenin and normal saline to mice for 7 days， 14 days and 21 days， and then executed the mice in batches to collect blood from canthus venous plexus. Estradiol （E2） in serum was determined by ELISA kit. The acquired data were entered into SPSS17.0 software， and the homogeneity of variance test and one-way analysis of variance were used for comparison among groups. Test level α= 0.05. The result was p < 0.05， and the chart analysis showed that apigenin had a positive correlation with estradiol secretion.

Key words：apigenin;female mice;estradiol;sex hormone

芹菜素，又名芹黃素，是地中海沼泽区域驯化而来的一种半天然生成素，它的蛋白成分远远高于栽培的芹菜[1]。经研究，芹菜素有抑制癌细胞活性生长的功能，且能作为抗HIV和其他抗病毒药物，还具有抗炎症、老化、帕金森综合征，活性血管等作用[2]。

目前，据以往的研究资料来看，有关于芹菜素对生殖系统作用的研究资料较少，而近年来科学研究参与了对女性雌激素分泌的调节作用的研究。Zand RS等研究了72种黄酮类化合物及其结构相似的化合物，发现芹菜素具有较强的孕前激素样活性[3]。芹菜素单独作为用药价值时体现出雌激素的性质，但是它与其它化学物质如乙炔共同用药时，表现出抗雌激素分泌的性质[4]。田原等推测芹菜素对雌二醇及孕酮分泌的抑制是通过抑制芳香化酶的活性实现的，并且有一定的量效关系[5]。936mg/kg.bwAP降低大鼠精子质量，降低精子运动速度，升高精子畸形率，损伤睾丸组织结构和精子尾部线粒体超微结构。AP可引起血清性激素水平变化[7]。芹菜素能够明显干扰雌性大鼠的生殖内分泌， 缩短其性周期[11]。本研究进行体内实验，通过对发情期大鼠进行分组，分别用不同浓度的芹菜素进行处理，再检测血清中雌二醇含量变化，研究其剂量效应。不同浓度的芹菜素和血清中雌二醇之间的相关性。为临床上女性不孕不育的治疗提供新方向。同时以期能够进一步发掘芹菜素的药用价值。

1 材料和方法

1.1  实验动物：成年6-8周龄的雌性小鼠48只，体重（平均30.19g）g，周龄6～8周（长沙市天勤生物科技有限公司）。

每天定时给予对照组0.01ml/g生理盐水灌胃，，实验组给予0.01 ml/g 不同剂量（低剂量组252mg/L，中剂量组504mg/L，高剂量组1008mg/L）的芹菜素混悬液灌胃。实验人员通过连续分批的7d、14d、21d进行芹菜素以及生理盐水灌胃后将小鼠分批次处死进行眦静脉丛取血。采用ELISA检测试剂盒进行血清中雌二醇（Estradiol，E2）的测定。

1.2儀器与材料：JA3003N电子秤（上海精密科学仪器有限公司）;三用恒温水浴箱（上海精宏实验设备有限公司）。芹菜素购于西安玉泉生物科技有限公司，纯度为98%，灌胃之前用蒸馏水配置成最高浓度混悬液并进行同比稀释成浓度混悬液。ELISA检测血清中雌二醇（Estradiol，E2）试剂盒（武汉纯度生物有限公司）。

1.3分组与方法：将48只6-8周龄的雌性小鼠分为4组：空白对照组（生理盐水），低剂量组，中剂量组和高剂量组，每组各12只。动物饲养在长沙医学院动物中心实验室的二级实验室内。每天定时给予对照组0.01ml/g生理盐水灌胃，，实验组给予0.01 ml/g 不同剂量（低剂量组252mg/L，中剂量组504mg/L，高剂量组1008mg/L）的芹菜素悬浊液灌胃。实验人员通过连续分批的7d、14d、21d进行芹菜素以及生理盐水灌胃后将小鼠分批次处死进行眦静脉丛取血，所取血液放入离心管采用差速离心机（3000rpm，5～6min），静置分层，取上清液采用ELISA检测试剂盒进行血清中雌二醇（Estradiol，E2）的测定。

1.4统计学处理：将获取数据录入SPSS17.0软件，利用x±s多组间比较采用方差齐性检验和单因素方差分析，检验水平α= 0.05。

2实验结果

3讨论

本实验我们应用形态学、统计学、分子生物学等技术全方面检测不同浓度的芹菜素处理下，发情期雌性小鼠血清中雌二醇的变化，乳腺导管发育是否增生，观察子宫内膜的变化。旨在初步探索芹菜素对雌性小鼠血清中雌二醇的剂量效应，进一步发掘其剂量效应。国内外芹菜素对小鼠性激素影响的研究不多。本研究针对芹菜素一方面具有雌激素样作用，另一方面又具有拮抗雌激素作用，检测不同浓度的芹菜素对雌性大鼠血清雌二醇含量的影响，来研究芹菜素对雌性小鼠性激素的影响。通过对发情期雌性小鼠灌胃已提纯的芹菜素来建立动物模型，通过采用ELISA检测试剂盒进行血清中雌二醇的含量，为临床上女性不孕不育的治疗提供新的方向。

实验结果表明， 芹菜素对雌二醇的分泌有促进作用，成正相关关系。Shivayogi P.等研究发现芹菜素对雌性大鼠有雌激素和抗雌激素的作用，本次实验结果表明雌性小鼠与芹菜素浓度呈正相关。

参考文献

[1] 张晓晶，刘子蜻，党瑜慧，刘佳微，吴双，汪燕妮，李芝兰. 芹菜素对小鼠肇丸标志酶活性的影响.2013年11期.

[2] 窦笑菊，周子琪，谢东峰 .芹菜素的生物学活性研究进展.2018-02-09.

[3]李娴，姜恩魁，封利，张奇芳.侧脑室注射芹菜素对情期雌性大鼠生殖激素含量影响的研究. 锦州医学院学报. 2006 Feb.，27 （1）.

[4]Hiremath SP，  Badami S， Hunasagatta SK， et al.Antifertilityand hormonal properties of flavones of Striga orobanchioides [J] Eur J Pharmaco12000， 391  （1一2）：193一197.

[5]汪燕妮，党瑜慧，刘佳微，吴双，刘玲飞，李芝兰. 芹菜素对小鼠血清性激素和精子活动度影响的剂量效应研究. 天然产物研究与开发Nat Prod Re.s Dev  2013.  25：1357-1361

[6]Breinholt V，  Larsen JC. Detection of weak estrongenic flavonoids using a recombinant yeast strain and a modified MCF7ce11 proliferation assay[J] .Chem Res Toxicol，1998，  11 （6）：  622一629

[7] 刘玲飞. 芹菜素对雄性大鼠生殖系统功能的影响及其相关机制探讨 .  兰州大学 .  2015-05-01.

[8]张友源，孙胜楠，金少瑾，朱云峰，徐翠翠，马莺，卢卫红. 芹菜中的化学成分及对生殖系统影响研究进展. 2019-01-10.

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[10] 张奇芳，姜恩魁，齐艳红.侧脑室注射芹菜素对情期雌性大鼠生殖轴影响的研究.   锦州医学院学报. 2006 Feb.，27 （1）.

[11]张丽波，姜恩魁， 芹菜素对雌性大鼠性周期的影响. 辽宁医学院学报.  2007-02-15.

通讯作者：杨纲，职称：讲师;

论文为校级课题论文，项目编号：长医教〔2019〕61号-131