GLCCI1 基因位点 rs37972、rs37973 基因多态性与难治性哮喘间的关系

冷秋平 王文艺 陈丽萍

新疆维吾尔自治区人民医院呼吸与危重症医学科,新疆 乌鲁木齐 830002

难治性哮喘是指除外患者药物依从性和导致支气管哮喘恶化等因素后，经过6个月及以上的规范化应用两种或超过两种的支气管哮喘控制药物治疗和管理后仍不能理想控制的哮喘[1]。研究发现支气管哮喘患者糖皮质激素诱导转录因子1 基因位点基因突变可引起机体对糖皮质激素吸入治疗的反应性下降，因此我们拟通过探索分析rs37972、rs37973 的基因多态性和新疆地区难治性哮喘患者间关系，为新疆地区的难治性哮喘患者的个体化及精准治疗提供理论依据。

1 对象与方法

1.1研究对象 对我院住院规范化吸入ICS/LABA 治疗6月及以上的支气管哮喘患者进行随访，从中纳入支气管哮喘完全控制者30 例(ACT 评分 25 分)：女17例，男13例，平均年龄为(51.74±16.89)岁；难治性哮喘者30例(ACT 评分<20 分)，女18例，男12例，平均年龄为(49.23±12.05)岁；同期健康体检者30例，女16例，男14例，平均年龄为(50.12±11.25)岁，均已签署过知情同意书。

1.2研究方法

1.2.1DNA 制备 依照 Greiner 公司提供全血基因组 DNA 试剂盒说明书进行 DNA 制备。

1.2.2基因位点选取 通过盲筛的方法在UCSC 数据中选取GLCCI1 的位于启动区的基因位点rs37972、rs37973。

1.2.3引物设计 应用美国 Sequenom 公司 MassARRAY Assay Design 软件进行引物设计。

1.2.4基因分型检测 应用多重 PCR 技术、MassARRAY的 i-PLEX 单碱基延伸技术，并最终通过基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析质谱技术进行分型检测。

1.3数据分析 采用 SPSS 22.0 数据分析软件系统进行。计量资料应用均数±标准差；组间基因型或等位基因分布频率的比较应用χ2检验，计算相对风险度(OR)和 95%可信区间(CI)；3 种基因型间比较应用方差分析，2 种基因型间比较应用 t 检验。P<0.05，有统计学差异。

2 结 果

2.1rs37972、rs37973 SNP 位点基因型分布情况 rs37972存在三种基因型(CC/CT/TT)、rs37973存在三种基因型(AA/AG/GG)可发现水脑畸形、无脑或露脑畸形、前脑无裂畸形、胸腹壁缺损、右位心、胸外心、单心室、严重心内膜垫缺损(12-13+6)、体蒂异常、肢体或长骨完全或部分缺失、形态异常等。通常按照胎儿从上到下、从头到脚的顺序依次逐项检查，可避免因遗漏扫查内容而造成的漏诊[6]。

使用HWE软件检测基因型的P值，与哈迪-温伯格平衡定律相符，具总体代表性。

2.2rs37972 和 rs37973 基因型的比较 rs37972 的基因型分布频率三组间比较，无统计学差异(P>0.05)。rs37973 基因型分布频率三组间比较，差异无统计学意义(P>0.05)；GG 基因型频率显著高于正常对照组，P=0.041，但因三组间比较P>0.05，差异无统计学意义。详见表1、表2。

表1 rs37972 基因型及等位基因分布频率比较

表2 rs37973基因型及等位基因分布频率比较

3 讨 论

研究表明，GLCCI1是 GC诱导炎症细胞凋亡的早期信号，若GLCCI1表达水平降低，将会直接引起炎症细胞凋亡的减少，从而降低机体对糖皮质激素的敏感性，而 rs37972、rs37973 的基因多态性可致患者对糖皮质激素治疗的敏感性降低[2]。目前尚未见文献报道rs37972、rs37973 基因多态性与难治性哮喘的关系。本研究中，我们对新疆地区支气管哮喘人群进行 GLCCI1 的 rs37972、rs37973 基因多态性检测，但未能发现难治性哮喘与rs37972、rs37973 的基因多态性存在相关性；但支气管哮喘完全控制组的 rs37973 的 GG 基因型频率显著高于正常对照组(P=0.041)，表明携带 GG 基因型支气管哮喘患者对糖皮质激素应答弱，可能通过调节GLCCI1 基因表达在糖皮质激素应答方面起作用。但本研究样本量较小，结果可能存在偏差，有待后续增加样本量进一步深入研究。