HPLC法测定(8a,9R)-辛可宁的有关物质

（永州职业技术学院,湖南永州425000）

(8a,9R)-辛可宁中文全名为(8a,9R)-辛可宁-9-醇单 [[(S)-[(1R)-2-甲基-1-(1-氧代丙氧基)丙氧基](4-苯基丁基)氧膦基]乙酸]盐，CAS号为137590-32-0，分子式为 C19H29O6P.C19H22N2O，相对分子质量为678.79，为福辛普利钠原料药的中间体[1]。福辛普利钠为用于治疗高血压和心力衰竭常用药，在临床上得到了广泛的应用。本研究建立了HPLC法测定(8a,9R)-辛可宁有关物质的方法，并进行了方法学验证。

1 材料和方法

1.1 材料与试剂

样品：(8a,9R)-辛可宁（湖北鑫鸣泰化学有限公司，批号 20160401、20160501、20160601）；正己烷：色谱纯，阿拉丁；异丙醇：色谱纯，阿拉丁；乙腈：色谱纯，阿拉丁；其他试剂均为分析纯。

1.2 主要仪器

高效液相色谱仪：岛津LC-10AT VP泵（日本岛津），岛津SPD-10AVP检测器（日本岛津）；Labsolutions色谱数据工作站；电子天平：AG135型，梅特勒-托利仪器（上海）有限公司。

1.3 试验方法

1）供试品溶液制备：取本品30mg，精密称定，置25mL量瓶中，加水适量使溶解并加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2）对照溶液制备：精密量取上述供试品溶液1mL，置100mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

3）高温破坏样品溶液制备：取本品适量，平铺于称量瓶中，置80℃烘箱中放置24h，取约30mg，精密称定，置25mL量瓶中，加水适量使溶解并加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

4）光照破坏样品溶液制备：取本品适量，平铺于称量瓶中，置4500±500Lx照度下放置24h，取约30mg，精密称定，置25mL量瓶中，加水适量使溶解并加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

5）氧化破坏样品溶液制备：取本品30mg，精密称定，置25mL量瓶中，加30%双氧水0.2mL，室温放置10min后，加水适量使溶解并加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

6）酸破坏样品溶液制备：取本品30mg，精密称定，置25mL量瓶中，加0.1mol/L的盐酸溶液0.5mL，室温放置10min后，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液0.5mL中和，再加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

7）碱破坏样品溶液制备：取本品30mg，精密称定，置25mL量瓶中，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液0.5mL，室温放置10min后，加0.1mol/L的盐酸溶液0.5mL中和，再加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

8）氧化空白样品溶液制备：量取30%双氧水0.2mL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

9）酸碱空白样品溶液制备：分别量取0.1mol/L的盐酸溶液与0.1mol/L的氢氧化钠溶液各0.5mL，置25mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

10）色谱条件：色谱柱为Agilent硅胶柱（250×4.6mm，5μm），以正己烷∶异丙醇∶乙腈∶水∶磷酸（17∶51∶332∶1∶0.2）为流动相，流速为 1mL/min，检测波长为205nm，柱温为40℃，进样量20μL。

2 结果分析

2.1 色谱条件的选择

参考福辛普利钠EP标准，我们选择流动相A：磷酸∶水∶乙腈（0.5∶3.5∶1000）、流动相 B：正己烷∶异丙醇（1∶3），通过调整流动相A与流动相 B的配比，以本品碱破坏供试品溶液进行液相色谱条件摸索。

2.2 专属性试验分析

精密量取上述溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果本品经酸、碱、氧化、高温和光照破坏后，主成分峰与各杂质峰分离度较好，破坏前后物料基本守恒。

2.3 检测限、定量限

精密称取(8a,9R)-辛可尼适量，加水适量使溶解并加流动相稀释制成每1mL约含1μg的溶液，用流动相逐级稀释成浓度分别为0.041μg/mL、0.124μg/mL的溶液，精密量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以信噪比（S/N）约为3作为检测限，以信噪比（S/N）约为10作为定量限，结果本品的检测限为0.8ng，定量限分别为2.5ng。

2.4 精密度试验

精密称取本品约30mg，6份，同法制成6份供试品溶液与对照溶液并检测，结果各杂质含量RSD 均＜5%（n=6，见表 2），表明精密度良好。

表2 精密度试验结果 单位：%

2.5 溶液稳定性试验

精密称取本品约30mg，置25mL量瓶中，加水适量使溶解并加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。置 25～30℃条件下，分别于 0h、2h、4h、6h、8h和12h取样检测，记录色谱图，与0h比较，结果 (8a,9R)-辛可尼峰面积RSD为1.0%（n=6），各杂质峰面积RSD均＜5%（n=6，见表3），未有新杂质产生。表明供试品溶液室温条件下放置12h内基本稳定。

表3 溶液稳定性考察结果 单位：%

2.6 耐用性试验

分别调整色谱条件中的柱温、流动相流速、比例及更换不同的色谱柱来考察其对杂质含量测定结果的影响，结果各杂质含量测定结果基本不变，表明本法耐用性良好（见表4）。

表4 反应时间优化实验 单位：%

3 样品测定

精密称取3批 (8a,9R)-辛可尼各约30mg，同法制成供试品溶液与对照溶液并检测，结果见表5。

表5 (8a,9R)-辛可尼有关物质检查结果 单位：%

4 结语

建立了测定(8a,9R)-辛可宁有关物质的HPLC方法。确定色谱条件为色谱柱为Agilent硅胶柱（250×4.6mm，5μm），以正己烷/%异丙醇∶乙腈∶水∶磷酸（17∶51∶332∶1∶0.2） 为流动相，流速为 1mL/min，检测波长为205nm，柱温为40℃，进样量20μL。结果表明本方法专属性强，(8a,9R)-辛可宁与各降解产物之间分离度良好；重复性试验各杂质含量RSD均＜5%（n=6），精密度良好。该方法操作简便，灵敏、快捷，可用于(8a,9R)-辛可宁有关物质测定。