和牛母牛超数排卵及胚胎移植试验研究效果初报

刘善斋，刘洪瑜，涂晓华，刘永文

（1.国家肉牛牦牛产业技术体系亳州综合试验站，安徽 亳州236800；2.安徽农业大学动物科技学院，安徽 合肥230036）

供体母牛的超数排卵（简称超排）是牛胚胎移植的主要技术环节之一，超排是获得有效体内胚胎的重要来源［1］。家畜胚胎移植可以充分发挥优良母畜在品种改良和育种中的作用，尤其是对牛羊单胎动物来说，通过超排和胚胎移植技术（multiple ovulation and embryo transfer，MOET）可以使供体的繁殖后代增加6～7倍，它也是一项代替种畜引进，利用生产性能低下母牛繁殖良种牛的经济安全实用的高效繁殖技术。于2010年11月～2012年3月在亳州综合试验站依托单位（谯城区智纯肉乳黄牛繁育场），选择青年和牛母牛作为供体牛进行了超数排卵、胚胎采集工作；同时选择育成荷斯坦母牛和西杂母牛作为受体进行了的鲜胚胎移植工作，取得一定的效果。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供体牛和受体牛的选择 选择本场饲养的4头纯种青年和牛母牛作为供体牛，年龄在12～18月龄，体重400kg以上，营养中上等；并在本场选择67头育成荷斯坦母牛及西杂母牛作为受体牛，年龄1～1.5岁，均采用散栏圈养。选择自然发情正常的受体牛。

1.1.2 冻精来源 本站制作和牛冻精和国外冻精。

1.1.3 药品及器械 孕酮栓（CIDR），由新西兰进口，供体牛每次超排使用一支；促卵泡素（FSH）是中科院动物所生产，规格10IU/瓶；兽用前列腺素（PG）由中国农业科学院畜牧研究所研制生产，规格0.3mg/支；促排卵素（LHRH－A3），由宁波市激素制品有限公司生产，规格25μg/支；采卵液（PBS），由实验室配制；PBSS液从国外进口，由美国AB公司生产，规格50mL/袋；维生素 A、D、E针剂（VADE）由北京维尔德生物科技有限公司生产；胚胎采集器械由日本富士平株式会社进口。

1.2 方法

1.2.1 供体牛超排处理方法与程序 供体牛超排处理使用CIDR十FSH十PG方法［2］，见表1。

1.2.2 供体牛人工输精技术 观察和确定牛的发情时间，做到适时输精。一般情况在第9d和第10 d各输精一次，即第一次配种，在稳定发情后10～12 h，冻精1支/头，同时肌注促排3号25μg/头，第二次配种，在第一次配种后12h，冻精1支/头。对供体牛外阴清洁、消毒，输精器保持无菌，进行子宫体输精。

1.2.3 受体牛同期发情 同期发情的方法都采用CIDR十PG法，在受体牛阴道内放入CIDR的当天为0d；到第7d受体牛肌注PG（0.6mg/头）；到第10d下午取出CIDR；到第11～13d全天观察发情情况，以站立接受爬跨不动为发情标准。对发情的 牛到第19d进行移植。

表1 供体牛超排处理程序和方法

表2 受体牛同期发情实施方案

1.2.4 胚胎移植 胚胎从供体牛体内取出，在显微镜下检出，放入小平皿中的PBSS液中，胚胎移入PBSS液洗涤10次，鉴定胚胎质量A级、B级和C级胚胎为可用胚胎，三段法装入细管一装枪。

胚胎移植：保持无菌状态下将装有胚胎的细管装入移植枪，套上硬外套、软外套，移植前，在受体牛荐尾结合部硬鞘膜外腔内注射5%的盐酸利多卡因2～3mL进行局麻，使其保持安静，便于操作［3］。然后清洗外阴，用无菌纸擦拭，稍干酒精棉消毒，再用高压消毒过的生理棉片擦拭，用直肠把握法将胚胎输入具有黄体一侧的子宫角。

2 结果与分析

2.1 超排效果与分析

选择4头青年纯种和牛母牛进行超排，重复冲胚采卵13头次，共冲胚122枚、头均冲胚9.38枚，其中可用胚胎75枚，头均可用胚5.77枚，见表3。

如表3所示，整个超排结果得到平均5.77枚/头次的可用胚胎，可用胚胎率为61.48%。牛的超数排卵是一个复杂的生理过程，受很多因数的影响，包括品种、生物学特性、年龄、季节、时间、FSH品牌及剂量、卵巢状态、超排方法等等因数的影响。吴柱月等报道［4］，肉牛（包括西门塔尔牛、短角牛等）的超排结果，头均可用胚胎数，青年牛为5.9～7.2枚之间，经产牛为5.8～7.5枚之间，可用胚胎率，青年牛为63.6%，经产牛为69.2%。与此相比，本试验中和牛母牛的超排效果稍低，这是否与品种、激素或 营养等因素有关，还有待进一步研究。

表3 和牛青年母牛超排效果

2.2 受体牛的同期发情和胚胎移植妊娠结果

2011年2～3月在依托单位养殖场，对60头荷斯坦母牛和24头西杂母牛进行同期发情处理，处理结果见表4。结果获得75头同期发情，同期发情率达到89.2%，实际鲜胚移植了67头受体牛。2个月妊娠检查有35头怀孕，移植受胎率为52.23%。效果见表4。

表4 受体牛同期发情和胚胎移植效果

3 讨论

1）供体牛超排和重复超排效果极不稳定，受激素种类、剂量、超排程序、家畜品种、年龄、胎次、机体状况、遗传特性、繁殖力、卵巢功能、子宫环境、季节、环境等诸多因素的影响。此外，获得可用胚胎的数量尚受采卵操作技术水平的影响。所以在实践工作中要减少各种因素的影响，以求达到最好的效果。

2）由于胚胎移植技术已经成为一项成熟的技术，因此受体牛饲养管理已成为影响移植成功率的主要因素，所以必须对受体牛在胚胎移植前和移植后加强饲养管理［5］。这次荷斯坦牛和杂交牛获得移植妊娠率的效果相差很大，可能与受体牛品种及营养状况有关。

3）本次实验研究，使用和牛母牛进行超排，利用和牛纯种冻精输精生产胚胎，以及利用受体牛获得纯种和牛二代，在缩短世代间隔和快速扩繁方面与人工授精相比体现出胚胎移植的巨大优势。

4）本次试验研究，使用75头受体牛，同期发情后可移植胚胎头数为67头。如果能够使用鲜胚和冻胚结合移植受体牛，使受体牛能得到充分的利用，可以更大发挥胚胎移植的优势。

4 结论

和牛母牛可以使用CIDR十FSH十PG方法进行超数排卵，并采用胎移植技术提高其利用效率。

［1］李 铭，吴柱月，蒋小刚，等.供体牛重复超数排卵效果试验初报［J］.广西畜牧兽医，2005，（5）214－216.

［2］李 铭，吴柱月，莫柳忠，等.广西地区荷斯坦牛超数排卵效果分析［J］.中国畜牧兽医，2008，（3）：53－56.

［3］梁 坤.如何提高牛超排效果［J］.黑龙江动物繁殖，2002，（4）：14－15.

［4］吴柱月，李 铭，莫柳忠，等.广西牛胚胎移植技术研究结果及分析明［J］.中国畜牧杂志，2009，（增刊）：236－239.

［5］吴柱月，李 铭，莫柳忠，等.广西西门塔尔青年母牛和荷斯坦母牛超数排卵及胚胎移植初报［J］.广西畜牧兽医，2003，（4）：149－151.