白屈菜对大鼠软组织损伤中炎性因子1L-1β的影响

时间：2024-09-03

王研，鞠薇薇，夏荣钧，丁哲，李卫东，林黎娟

(1. 辽东学院医学院，辽宁丹东 118003; 2. 丹东市第一医院麻醉科，辽宁丹东 118002)

急性软组织损伤是指人体的皮肤、皮下组织、肌肉、肌腱、筋膜、韧带、关节嚢和神经、血管等遭到外来暴力伤害所引发的急性损伤，但无骨折、脱位。主要表现为局部疼痛肿胀、瘀斑及功能障碍等，是运动系统中的一种常见病[1]，中医治疗急性软组织损伤有独特的优势，如疗效可靠、副作用小等。白屈菜是一种传统满药，近年来药理学研究表明，白屈菜碱具有抗肿瘤、镇痛、解痉、抗炎、降低血管通透性、减轻肿胀等多方面的药理作用，满族民间验方中常使用白屈菜治疗急性软组织损伤，本实验通过研究白屈菜对大鼠急性软组织损伤中1L-1β含量的变化，探讨其治疗急性软组织损伤的机制，为满药的临床应用提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物

SD大鼠52只(48只正式实验，余备用)，雄性，体重220±10 g，辽宁长生生物技术股份有限公司提供。动物房清洁、通风、干燥，SD大鼠用固体干燥饲料喂食，自由饮水，大鼠适应性喂养3 w后正式实验。

1.1.2 试验药物与试剂

硫化钠由成都金山化学试剂有限公司生产，批号为060320；白屈菜购于百草厅大药房，委托中医院制剂室制备成外用药膏；扶他林由北京诺华制药有限公司生产，批号为国药准字H11021640；IL-1β指标检测试剂和Rat 1L-1 beta ELISA Kit均由ABclonal Biotechnology公司生产，武汉爱博泰克生物科技有限公司进口分装，批号为968NM74320,规格为96孔/盒。

1.2 实验方法

1.2.1 实验动物分组

经适应性喂养3 w后，将48只大鼠按体重编号，编号完成后按随机数字表法分为4个大组(n=12)，即实验组(白屈菜组)、药物对照组(扶他林组)、模型对照组、空白对照组。各大组再分为4 个小组(n=3)，即第1、3、7、10 d组。

1.2.2动物造模

按参考文献[2]～[4]的方法，在造模前一天将所有大鼠左侧臀部及大腿用7%硫化钠溶液脱毛, 将模型对照组、白屈菜组、扶他林组大鼠采用打击法进行造模。大鼠侧卧于自制的软组织打击器上,用提前准备好的直径20 mm、100 g砝码,沿自制的直径23 mm、高80 cm的PVC管中自由下落至左侧下肢标记处，反复8次，造成软组织损伤模型。

1.2.3 实验给药

大鼠造模成功后1 h开始敷药，将医用棉布裁剪成超过造模边缘0.5 cm的圆形，将白屈菜药膏涂抹于棉布上外敷于损伤处，并用3M透明胶贴粘贴，每次敷药4 h，为防止大鼠撕咬敷药处，用伊丽莎白圈套于大鼠颈部，并全程守护，每日固定时间为大鼠敷药，共10 d。

1.2.4 临床观察

实验过程中，于造模成功大鼠清醒后及造模后第1、3、7、10 d观察大鼠软组织损伤症状，并参照王佳[5]等的软组织损伤评分标准(见表1)，由同一人进行盲评。

表1 大鼠软组织损伤症候指数评分表

1.2.5 指标检测

造模次日为第1 d，于造模后第1、3、7、10 d分别于各组处死3只大鼠，在损伤中心部位切取切约0.5 cm×0.5 cm×0.25 cm肌肉组织，将肌肉组织用生理盐水漂洗1 min，吸干后用电子天平秤取15 mg，按10 mg∶0.5mL比例加入0.9%生理盐水，用玻璃组织匀浆器匀浆，待标本充分匀浆后，导入事先准备好的试管中编号，以2 500 r/min转速离心15 min，收集离心后的上清液，后放入-80 ℃深冻冰箱中保存备用。采用酶联免疫法(ELISA)检测组织中1L-1β浓度。

1.2.6 数据分析方法

2 结果

2.1 大鼠软组织损伤症候指数评分

造模后白屈菜组、扶他林组和模型对照组大鼠损伤证候指数评分随时间推移而逐渐降低，造模后第0、1、10 d白屈菜组和扶他林组相较于模型对照组无统计学意义(P>0.05)，第3、7 d评分较造模后白屈菜组、扶他林组与模型对照组在第1、3 d无统计学意义,白屈菜组与扶他林组较模型对照组在第7、10 d评分明显降低(P<0.05)，见表2。

表2 各组大鼠软组织损伤症候指数评分

注：*P<0.05，与模型组相比较

2.2 各组大鼠肌肉组织 IL-1β含量比较

实验结果显示，大鼠损伤肌肉组织中IL-1β含量，造模后第1 d白屈菜组、扶他林组与模型对照组较空白对照组比较均升高，有统计学意义(P<0.05)，白屈菜组、扶他林组与模型对照组比较，无统计学意义(P>0.05)，白屈菜组与扶他林组比较无统计学意义(P>0.05)；造模后第3 d，白屈菜组、扶他林组、模型对照组较造模后第1 d均增高，与模型组比较白屈菜组、扶他林组均有统计学意义(P<0.05)，白屈菜组与扶他林组相比较无统计学意义(P>0.05)；造模后第7 d，与空白对照组比较白屈菜组、扶他林组与模型对照组有统计学意义(P<0.05)，白屈菜组与扶他林组相较于模型对照组比较均有统计学意义(P<0.05)，白屈菜组与扶他林组比较，无统计学意义(P>0.05)；造模后第10 d天，与空白对照组比较，白屈菜组、扶他林组与模型对照组均无统计学意义(P>0.05)，与模型对照组比较，白屈菜组、扶他林组均无统计学意义(P>0.05)，结果见表3和图1。

表3 各组肌肉组织中1L-1β浓度结果单位：ng/L，n=3)

注：与模型对照组比较，*P<0.05 ；与空白对照组比较，☆P<0.05

3 讨论

IL-1是一组炎症前期细胞因子，而IL-1β是其主要的分泌形式，对炎症反应的产生和加重方面发挥着重要作用，对炎症的产生和促进发挥着重要作用，主要表现为：不仅可以启动炎症级联反应，还可以刺激产生相关的炎症递质和其他细胞因子而引起组织损伤。现有研究已经表明在血液及局部组织中IL-1β的含量与炎症的严重程度成正相关，所以在相关炎症的临床和实验研究中IL-1β常被用来判断疾病严重程度和评价药效的可靠指标[6]。

造模后第1 d，白屈菜组、扶他林组和模型对照组大鼠肌肉组织中IL-1β含量较空白对照组均明显升高，表明造模成功，证明实验所采用的造模方法已经造成大鼠急性软组织损伤，白屈菜组、扶他林组与模型对照组比较IL-1β含量降低，说明白屈菜和扶他林可以抑制炎性因子的释放，相较于模型对照组抑制效果还不明显(P>0.05)。造模后第3 d，白屈菜组、扶他林组、模型对照组大鼠损伤肌肉组织中IL-1β含量达到最高值，提示损伤组织炎性因子释放达到高峰，炎症反应最为明显。白屈菜组与扶他林组相较于模型对照组IL-1β含量降低，提示白屈菜与扶他林可以有效抑制组织释放炎性因子，有一定的治疗效果。造模后第7 d，白屈菜组、扶他林组、模型对照组大鼠损伤肌肉组织中IL-1β含量较第3 d下降，提示炎症因子释放减少，损伤组织已进入恢复期，且白屈菜组与扶他林组比模型对照组IL-1β含量低，提示两种药物对抑制炎症因子的释放，减轻炎症反应有一定的效果。造模后第10 d，造模各组大鼠肌肉组织中IL-1β含量持续降低，其中白屈菜组与扶他林组比模型对照组IL-1β含量低，提示白屈菜和扶他林对抑制炎症因子的释放具有一定的作用，但与空白对照组比较无统计学意义，提示即使不予治疗，大鼠在肌肉组织损伤后第10 d组织也会逐步愈合，且白屈菜组与扶他林组治疗效果相近(P>0.05)。

通过对大鼠造模后局部组织肌肉颜色、肿胀程度、皮下淤血情况以及肢体活动障碍情况的观察，统计大鼠软组织损伤症候指数评分，提示造模后从第1 d到第10 d，白屈菜组、扶他林组以及模型对照组损伤证候指数评分逐渐降低，在造模后第0、1 d，造模的3组大鼠软组织损伤评分无差异(P>0.05)，造模后第3 d，评分达到高峰，提示炎症反应症状在造模后第3 d最为严重，造模后第3、7 d白屈菜组与扶他林组评分低于模型对照组，提示白屈菜与扶他林对缓解软组织损伤后的炎症反应症状有一定疗效。造模后第10 d，白屈菜组与扶他林组评分相较于模型对照组，损伤指数评分无统计学意义，实验过程中发现，大鼠在实验后第10 d，脱毛区鼠毛已经开始生长，大鼠趋向痊愈，白屈菜组与扶他林组疗效无显著性差异。结合炎性因子实验结果，提示大鼠软组织损伤后10 d，敷药治疗与不治疗无显著性差异，可以考虑在后续实验中适当缩短实验的时间。