妊娠期肝内胆汁淤积症中AFABP、sirt1、sVCAM-1表达及意义

陈 娟 孙翠珍 李 芸 周 薇 申 利*

1.河南省新乡市辉县市人民医院(453600)；2.华中科技大学同济医学院附属梨园医院

妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)是一种妊娠并发症，病因不完全明确，免疫功能失常、遗传易感性、内分泌激素失调、药物、环境均与其发作存在一定联系[1]。研究表明，ICP的发展和肝功能异常、胆汁酸水平上升有密切联系[2]。脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(AFABP)在脂肪酸的运转、摄取中均发挥作用，AFABP水平变化和非酒精性脂肪性肝病的发生有联系[3]。沉默信息调节因子1(sirt1)有调节T淋巴细胞、巨噬细胞、树突状细胞的作用，同时可参与胆汁酸的合成并有调节作用，在胆汁酸肝循环中发挥重要作用[4]。可溶性血管细胞黏附因子-1(sVCAM-1)是免疫球蛋白超家族的一员。目前关于AFABP、sirt1、sVCAM-1在ICP中表达研究较少，因此本文探究其在ICP中的表达及其可能影响，为该疾病的早期诊治提供参考。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选择2020年1月-2021年1月本院诊治的ICP患者60例作为ICP组，健康孕妇50例作为健康组。纳入标准：ICP患者符合《妊娠期肝内胆汁淤积症诊疗指南(2015)》诊断标准[5]；空腹血清总胆汁酸水平≥10μmol/L；存在皮肤瘙痒、黄疸等症状；病例资料完整。排除标准：①合并妊娠期心脏病、高血压；②合并胆石症及肝功能异常；③合并全身感染；④有免疫系统疾病，精神类疾病。两组研究对象均已知情并同意本次研究，且该研究通过院伦理委员会审核批准。

1.2 检测方法

于孕妇入院当天抽取静脉血分离血清，酶联免疫吸附试验法检测AFABP、sVCAM-1水平，试剂盒由上海臻科生物科技有限公司生产；采用实时荧光定量(PCR)法对sirt1进行检测，Trizol法提取血清RNA，使用Takara逆转录试剂盒2μg完整无杂质的RNA逆转录为cDNA，采用Primer5.0软件设计引物序列，启动PCR仪，反应体系：0.4μl上下游引物、1μlcDNA模板、10μlSYBGreen，加蒸馏水至20μl。反应条件：95℃预变性1s、95℃5s、60℃31s，共进行40个循环，采用2-ΔΔCt方法计算sirt1表达量。sirt1上游引物序列：5’-TACCCCATGAAGTGCCTCAA-3’，下游引物序列：5’-CCTTTTGTGTTCGTGGAGGT-3’。

1.3 严重程度评价

根据《妊娠期肝内胆汁淤积症诊疗指南(2015)》[5]对ICP症状严重程度进行评价。轻度：血清胆汁酸≥10～40μmol/L，临床症状表现为皮肤瘙痒；重度，血清胆汁酸≥40μmol/L，瘙痒症状较为严重，且伴随着其他症状，如黄疸等。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 一般情况

ICP组确诊孕周(28.5±2.0)周(28～32周)，年龄(28.0±35.5)(24～35岁)；健康组孕周(28.5±4.0)周(26～34周)，年龄(29.0±5.5)岁(25～36岁)。两组均衡可比(P>0.05)。

2.2 各组AFABP、sirt1、sVCAM-1表达对比

与健康组相比，ICP组sirt1表达降低，AFABP、sVCAM-1表达升高(P<0.05)；ICP组中，重度患者AFABP、sVCAM-1高于轻度患者，sirt1低于轻度患者(均P<0.05)。见表1。

表1 各组AFABP、sirt1、sVCAM-1表达对比

2.3 AFABP、sirt1、sVCAM-1相关性分析

AFABP、sirt1、sVCAM-1之间Pearson相关性分析显示，AFABP与sirt1之间负相关(r=-0.621，P=0.001)；AFABP与sVCAM-1之间正相关(r=0.640，P=0.001)；sirt1与sVCAM-1之间负相关(r=-0.647，P=0.001)。

2.4 ROC曲线分析

ROC曲线显示，AFABP、sirt1、sVCAM-1联合诊断ICP的价值高于单项诊断(P<0.05)。见表2。

表2 各指标诊断ICP的ROC曲线分析

3 讨论

ICP是一种妊娠期发生的特有肝脏疾病，患者会出现肝功能异常、胆汁酸含量升高等特征[6-8]。ICP患者的肝内胆汁淤积、肝内胆汁酸水平上升与体内异常雌激素水平有关，会引起胎盘血灌注不足造成胎儿宫内血氧缺失，导致胎儿在宫内室息、窘迫，严重者会使胎儿死亡，对孕妇肝功能也会造成损伤[9-10]。临床上对ICP早期诊断和评估，对患者早期治疗尤为重要。

AFABP是巨噬细胞和脂肪细胞中所存在的一组小分子蛋白质物质[11-12]。在体内长链脂肪酸的代谢、摄取、运转中均有参与，可以将胆固醇转运到细胞核、线粒体及内质网等特定的细胞器中，胆固醇在肝细胞内的转化产生胆汁酸，胆汁酸的生成会引发肝内胆汁淤积症的发生[13-14]。本研究发现，ICP患者AFABP水平明显上升，且随疾病严重程度上升而加剧，表明AFABP与ICP病情及严重程度存在一定联系。

研究表明ICP患者会出现胆汁酸代谢异常。sirt1在能量、炎症代谢和心血管疾病等疾病的发生中均有参与，对胆汁酸的肝肠循环有促进作用[15-16]。研究发现，胆固醇7α-羟化酶对胆汁酸的合成有抑制作用，当胆固醇7α-羟化酶出现异常表达时，胆汁酸水平会上升，sirt1可通过对法尼酯衍生物X受体和肝X受体α等受体表达的调控，调控胆固醇7α-羟化酶表达，进而抑制胆汁酸合成；sirt1对炎性因子肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6有抑制作用，从而起到抑制炎症作用[17-18]。本研究结果显示，sirt1在ICP组水平低于健康组，表明sirt1对胆汁酸的抑制作用减弱，对胆汁酸肝肠循环的促进能力减弱，导致妊娠期肝内胆汁淤积症发生。

sVCAM-1对白细胞与内皮细胞的黏附具有促进作用，导致血管功能障碍，造成组织损伤，影响胎儿于宫内生长，严重时会导致胎儿死亡[19]。随着sVCAM-1水平升高加剧血管内皮损伤加重[20-21]。本研究发现，sVCAM-1于ICP患者体内表达升高，且随着病情严重程度的发展升高加剧，表明sVCAM-1对内皮血管的损伤加重。虽然本文证实了AFABP、sirt1、sVCAM-1和ICP但关系，但因样本过少，还需大样本多中心研究论证结论。

综上所述，本文研究发现，ICP患者sirt1呈低表达，AFABP、sVCAM-1呈高表达，临床可参考诊断评估。