miR-206在子痫前期患者胎盘组织中表达及与预后关系

张晓义 邱春霞 王尼萍

广东省广州市白云区妇幼保健院(510080)

子痫前期(PE)是妊娠期最严重的并发症之一，若不及时控制病情可逐步进展至子痫威胁母儿生命安全[1-2]。积极规避此类事件发生、提升PE患者的分娩安全性是目前临床关注及研究的重点。miR-206在骨骼肌中被首次发现，其在骨骼肌发育及相关疾病作用研究较为透彻，但近期研究显示其在乳腺癌[3]、胃癌[4]等多种恶性肿瘤组织中也有异常表达。Chunzhi Sheng[5]研究结果显示，PE患者血浆miR-206水平明显升高，在PE的发生发展过程中可能扮演重要角色，但对PE产妇产后不良结局影响研究不多。本研究获取PE患者的胎盘组织标本并测定miR-206表达量，为阐明PE患者不良预后的可能机制及靶向干预、优化分娩结局治疗寻找理论支持。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2018年1月-2019年12月在本院产科就诊并分娩的PE患者90例临床资料为PE组。纳入标准：①符合相关共识中PE的诊断标准[6]；②单胎、剖宫产；③既往无PE病史；④规律接受产检且临床资料完整。排除标准：①合并妊娠期糖尿病等其他妊娠合并症；②年龄<20岁或>50岁；③合并甲亢、甲减、严重自身免疫性疾病、恶性肿瘤等可影响PE病情及正常孕产过程的疾病。同期在本院正常产前检查并顺产的健康孕妇100例为对照组。研究对象均获得知情同意，本院伦理委员会批准此次研究计划。

1.2 胎盘组织中miR-206测定

两组产妇均留取分娩后胎盘标本组织，离体后立即剪取约30g胎盘组织，迅速放入4℃生理盐水清洗血迹备用。使用Trizol试剂盒提取胎盘组织的细胞总RNA，使用逆转录试剂盒合成cDNA，以cDNA为模板参照荧光定量PCR试剂盒说明书、在ABI7500荧光定量PCR仪上进行基因扩增。miR-206上游引物序列为5’-ACUGACGUGATGCGAAGUCG-3’，下游引物序列为5’-GCUGAACGUUAGCGAUGAG-3’。以U6为内参，其上游引物序列为5’-AGCGGUUGCAGAUCGUGCG-3’，下游引物序列为5’-CGAAGUGCUAGAGCGAAGC-3’。PCR反应体系共20μl，包括模板cDNA 1μl、上下游引物各0.5μl、2×SYBRpremix Ex TaqTMⅡPCR 8μl、RNase-free water 10μl。反应条件如下：95℃ 10s→60℃ 30s→72℃ 30s，共计40个循环。采用2﹣△△CT法分析miR-206的相对表达情况。

1.3 PE患者预后评估

记录PE患者产后不良结局，将产后大出血、心功能衰竭、肺水肿等归于预后不良。收集PE组患者临床资料，包括年龄、分娩孕周、分娩史、孕前体质指数(BMI)、孕期体重增长及分娩前24h肝功能、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、肌酐(SCr)、尿酸(UA)、D-二聚体(DD)水平，胎盘组织miR-206表达水平。

1.4 统计学方法

使用SPSS 20.0数据分析。计数资料组间比较采用χ2检验；计量资料组间比较采用独立样本t检验。胎盘组织miR-206表达水平对PE患者预后不良的预测价值采用受试者工作特征(ROC)曲线。PE患者预后不良的影响因素采用logistics回归分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般临床资料

PE组年龄(37.5±6.5)岁(23～42岁)，分娩孕周(38.1±2.6)周(36～40)，产次(1.3±0.5)次(1～2次)。对照组年龄(37.8±6.9)岁(25～43岁)，分娩孕周(38.3±2.8)周(35～39周)，产次(1.3±0.6)次(1～2次)。两组无差异(P>0.05)。

2.2 胎盘组织中miR-206表达水平

PE组胎盘组织中miR-206表达量(0.61±0.09)高于对照组(0.42±0.08)(t=15.406，P=0.000)。

2.3 PE患者不同miR-206表达水平与产后不良结局

根据miR-206表达水平的中位数进行分组，PE组miR-206高水平者产后不良结局总发生率高于低水平者(P<0.05)。见表1。

表1 PE组不同miR-206表达水平者不良结局比较[例(%)]

2.4 PE患者分娩预后的单因素分析

PE患者中，预后不良与预后良好者年龄，分娩前24h TG、SCr、UA水平，胎盘组织miR-206表达水平等均存在差异(P<0.05)；分娩孕周、分娩史、孕前BMI、孕期体重增长、肝功能、TC等无差异(P>0.05)。见表2。

表2 影响PE患者分娩预后的单因素分析

2.5 PE患者分娩预后的多因素分析

以PE患者分娩预后不良作为因变量(0=预后良好，1=预后不良)，单因素分析中有差异的指标如年龄，分娩前24h TG、SCr、UA水平，胎盘组织miR-206表达水平纳入logistics回归模型。分析结果显示，年龄≥30岁，分娩前24h TG、SCr、UA水平较高，胎盘组织miR-206表达水平较高分别是PE患者分娩预后不良的独立危险因素(P<0.05)。见表3。

表3 影响PE患者分娩预后的多因素分析

3 讨论

PE是严重的妊娠并发症之一，病因复杂、分娩后不良结局发生率较高。miR-206被发现在骨骼肌相关疾病中扮演重要角色，如骨肉瘤中miR-206过表达可抑制癌细胞增殖并与患者良好的预后相关[7]。目前在其他恶性肿瘤中也发现miR-206的差异性表达，如在结肠癌中表达增加、通过激活CCL2促进肿瘤进展[8]，在肝癌中表达降低，对癌细胞的增殖抑制作用减弱[9]。miR-206与子痫前期的关系也有一定报道，如Schlosser[10]研究发现，循环miR-206和wnt信号通路与女性心血管并发症和先兆子痫史有关；何大秀[11]指出miR-206在早发型子痫前期女性血清中表达水平显著升高。但目前关于miR-206与PE患者产后预后不良的相关性研究很少，本文以此为切入点展开阐述。

本研究发现，PE患者胎盘组织中miR-206表达水平增高，与吴青清[12]在胎盘组织中测定miR-206表达量结果一致。进一步根据PE组患者胎盘组织中miR-206表达水平的中位数进行分组比较与不良预后差异发现，高miR-206孕妇产后不良结局总发生率高于低miR-206组，提示胎盘组织miR-206高表达与产妇分娩后不良结局有一定关系。

根据PE组分娩结局分组行单因素、多因素分析，年龄≥30岁，分娩前24h TG、SCr、UA水平较高，胎盘组织miR-206表达水平较高分别是PE患者分娩预后不良的独立危险因素。进一步明确胎盘组织miR-206高表达可促使PE患者产后不良预后。但导致不良预后发生的具体途径有待后续更多基础及临床研究明确。此外，年龄及TG、SCr、UA对PE患者分娩预后的影响已在既往不同研究中被证实，如杨彩梅等[13]的研究指出，年龄≥35岁为早发型PE的危险因素；董琳娜等[14]指出TG可有效预测孕妇发生子痫前期的风险；侯书宁等[15]研究发现，SCr等肾功能指标可用于子痫前期的预测，本文结果与上述研究结论基本吻合。

综上所述， PE患者胎盘组织中miR-206表达量异常增高，且是产后预后不良的独立危险因素。可能为PE的病因学、预后评估、治疗方案探索等提供新的指标和思路。