miR-122-5p与上皮性卵巢癌临床病理特征关系及手术预后价值

刘 静 赵宏霞 吴华梅 江 利 刘彦霞 韩 克

泰康仙林鼓楼医院(南京,210046)

上皮性卵巢癌(EOC)恶性程度较高，对符合手术指征的患者及时手术切除是延长生存时间的最可靠方法[1-2]。但是接受手术治疗患者，术后生存结局存在明显差异，推测存在某些影响患者治疗预后的关键因素。miR-122-5p已被发现在肝癌的发生发展过程中扮演重要角色[3]，且基础研究[4]指出miR-122-5p可通过靶向ERCC1而抑制卵巢癌HO8910细胞的增殖、侵袭等恶性生物学行为，但关于miR-122-5p与EOC治疗预后的影响研究目前开展极少。本文探讨EOC组织中miR-122-5p的表达对患者病情及治疗预后的影响，为EOC发病机制、术后死亡风险分层、治疗方案制定等提供指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2014年8月-2017年8月在本院接受手术治疗的EOC患者作为研究对象。纳入标准：①术中病理诊断为EOC，符合国际妇产科联合会(FIGO)、世界卫生组织制定的分类分级标准；②顺利完成手术、无严重手术相关并发症；③配合治疗、病例资料完整；④本人签署知情同意书。排除标准：①术前接受放化疗、激素治疗等；②术前存在严重血液系统疾病、自身免疫性疾病、其他原发恶性肿瘤性疾病等可能影响EOC患者治疗结局的其他情况；③拒绝随访或者随访过程失联病例。本研究经院伦理委员会审批。

1.2 miR-122-5p测定

术中取患者肿瘤组织、癌旁正常组织(距离肿瘤边缘3cm的正常卵巢组织)标本，置液氮罐中冻存。取肿瘤组织、癌旁正常组织标本各100mg，液氮碾磨法碾磨成粉末后加入1ml Trizol裂解液，参照说明书步骤提取总RNA。使用逆转录试剂盒逆转录RNA获得cDNA，内参为U6。在荧光定量PCR仪上进行实时荧光定量PCR，引物序列如下：U6上游引物5’-TGCGAACGATGCAAGCTGA-3’，下游引物5’-GCGAATGAGCGTGCGAAG-3’； miR-122-5p上游引物5’-CTAGAGCTAAGCGAGAG-3’，下游引物5’-TGCAAGCTGAGCGGTAAG。反应体系包括：引物及探针Mix 1μl、TaqMan 通用混合物溶液10μl、cDNA 1.33μl、无核酸酶的水7.67μl。反应条件：95℃预变性10min、95℃变性15s、60℃复性60s，上述过程共计45个循环。2﹣△△Ct法计算miR-122-5p相对表达量。

1.3 病例资料收集及随访

查阅所有入组患者的病例资料采集基本人口学及临床病理特征信息，包括年龄、组织类型、分化程度、临床分期、淋巴结转移。术后24h开始随访，通过电话、门诊复查等方式进行，随访截止日期为2020年8月1日或该时间点前患者死亡时间。记录患者的总生存时间(术后24h至患者死亡时间)。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 一般临床资料

共纳入118例，年龄(56.7±12.8)岁(39～77岁)，术前体质指数(BMI)(23.7±1.9)kg/m2(21～26 kg/m2)。

2.2 miR-122-5p表达水平与生存结局及ROC曲线

患者肿瘤组织中miR-122-5p(0.31±0.08)低于癌旁正常组织(0.40±0.11)(P<0.05)。随访118例患者，随访期内死亡49例归于死亡组，余69例归于存活组。死亡组肿瘤组织中miR-122-5p(0.26±0.06)低于存活组(0.34±0.11)(P<0.05)，癌旁正常组织中miR-122-5p(0.41±0.08)与存活组(0.40±0.09)无差异(P>0.05)。ROC曲线显示，肿瘤组织中miR-122-5p表达水平预测术后随访期死亡的最佳截断值为0.30，AUC为0.808(95%CI 0.738～0.891)，敏感度68.1%、特异度75.5%。见图1(封三)。

2.3 miR-122-5p表达水平与预后生存

根据ROC曲线最佳截断值将所有入组的EOC患者分为高表达组(miR-122-5p>0.30)64例、低表达组(miR-122-5p≤0.30)54例。高表达组术后生存结局优于低表达组(P<0.05)。见图2(封三)。

2.4 miR-122-5p表达水平与临床病理特征

高表达组、低表达组患者的年龄、组织类型、分化程度分布无差异(P>0.05)，FIGO分期、淋巴结转移分布有差异(P<0.05)。见表1。

表1 不同miR-122-5p表达水平患者临床病理特征比较[例(%)]

2.5 影响EOC患者术后生存多因素Cox回归分析

以EOC患者术后生存结局作为因变量(0=生存，1=死亡)，单因素分析中有差异的指标纳入多因素Cox回归分析。发现，miR-122-5p≤0.30、FIGO分期Ⅲ期、合并淋巴结转移是EOC患者术后死亡的独立危险因素(P<0.05)。见表2。

表2 影响EOC患者术后生存的多因素分析

3 讨论

miR-122-5p是一种重要的microRNA类型，其表达改变可影响下游靶基因及相关信号通路的功能变化，进而引发一系列疾病的发生发展。已有研究指出miR-122-5p与消化系统疾病的发生相关，如Matsuzaki[5]研究指出miR-122-5p可能通过影响氧化应激参与肝损伤发生；PEI[6]发现miR-122-5p在胃癌组织中表达下调并发挥肿瘤抑制作用。卵巢癌的发生发展也涉及较多microRNA，机体miR-122-5p水平是否对卵巢癌病情及预后产生直接影响目前尚无明确结论。本文中发现EOC患者肿瘤组织中存在miR-122-5p异常低表达，这与苗培田[4]结论吻合；术后死亡组患者肿瘤组织中miR-122-5p表达水平较低，推测miR-122-5p异常可能影响了EOC患者的术后生存结局。

本文中经ROC曲线，miR-122-5p预测EOC患者术后生存结局的最佳截断值，并以此对EOC患者分组发现，高表达组术后生存结局优于低表达组。提示miR-122-5p低表达可能对EOC患者术后生存情况产生一定负面影响，但miR-122-5p低表达产生影响的具体机制不明，还有待后续深入研究。

本研究进一步探讨EOC患者临床病理特征与肿瘤组织中miR-122-5p表达关系发现，FIGO分期、淋巴结转移等与miR-122-5p表达相关，主要表现为miR-122-5p低表达者FIGO分期较高、伴淋巴结转移等概率更高。提示miR-122-5p表达减少甚至缺失可能导致EOC患者临床病理特征不理想、病情较为严重，术后复发及死亡风险增高。分析EOC患者随访期死亡的影响因素发现，miR-122-5p≤0.30、FIGO分期Ⅲ期、深肌层浸润、合并淋巴结转移等均是EOC患者术后死亡的独立危险因素。miR-122-5p异常低表达可能由于解除了对癌细胞恶性行为的抑制作用，导致术后残留微小肿瘤灶迅速增殖并导致局部复发及远处转移[7-9]。肿瘤分期较高、浸润较深、淋巴结转移已在诸多国内外研究[10-12]中被明确是恶性肿瘤复发转移及预后不良的危险因素，本文结果与其吻合。

综上所述，在可接受手术治疗的EOC患者中，miR-122-5p低表达是患者病情严重、术后生存结局不佳的重要影响因素。该分析可能为临床工作在EOC治疗方案的选择等临床实践方面提供一定帮助。