Galectin-3、Midkine和CK18诊断女性甲状腺癌价值

游庆华 徐冬香 高晓芳 叶慧英

复旦大学附属浦东医院(上海，201300)

甲状腺癌是近年来发病率增长最快的恶性肿瘤，是内分泌系统最常见恶性肿瘤[1]，甲状腺癌多见于女性[2]。与其它恶性肿瘤相比病死率较低，绝对死亡人数保持稳定[3]，但随着甲状腺癌发病率快速增加，给社会和家庭带来沉重的家庭负担，成为全球亟待解决的公共卫生问题。因此早期诊断和医学干预依然是改善患者生存质量，提高远期生存率的关键。良恶性甲状腺结节的鉴别诊断是医学界研究的热点，超声是临床常用的鉴别良恶性结节的方法，但是某些良性甲状腺结节可出现明显乳头状增生以及淋巴结转移现象，导致临床误诊。生物分子标志物半乳糖凝集素(Gal-3)、中期因子(MK)和人细胞角蛋白(CK-18)等在疾病诊断中具有较高特异性[4-5]，本研究拟从生物分子角度分析其诊断甲状腺癌的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2015年1月—2017年1月本院收治的女性甲状腺结节患者为研究对象。纳入标准：①首次诊断甲状腺结节；②有完整临床资料；③有明确的病理诊断。排除标准：①单纯囊性甲状腺结节患者；②临床资料缺失；③资料缺失。所有患者入院后完善血常规、凝血全套、甲状腺B超、甲状腺功能，均超声引导下穿刺活检或术后病理检查。研究已经获得本院伦理会批注，患者均知情签署同意书。

1.2 标本采集及检测

常规消毒，B超引导下穿刺甲状腺内(或结节内)，将吸出物均匀涂于3块载玻片，室温晾干，其中2张纯丙酮固定5min；TBS洗涤5min×3次；分别滴加一抗，湿盒中20～25℃温育60min， 4℃过夜；TBS洗涤5min×3次；滴加EnVision反应液(抗鼠，抗兔)50μl/片，室温下温育30min；TBS洗涤5min×3次0.05%DAB+0.03%H:0:显色5～10min或显微镜下观察见棕黄色反应后终止。经流水洗涤、苏木素衬染、盐酸酒精分化、蓝化、递增梯度酒精脱、二甲苯透明、常规树脂封片后高倍镜下阅片。对照设置：已知阳性病例做阳性对照，用TBS代替一抗做阴性对照。结果判读：gal-3、MK和CK-18阳性染色定位于胞质内和胞膜，采用半定量计分法判定：按阳性着色程度评分，0分为无着色，1分为浅黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色；按阳性细胞所占比例评分，0分为<5%，1分为5%～10%，2分为10%～50%，3分为50%～80%，4分为>80%。根据两者乘积判定阳性结果：0分为阴性(-)，1～4分为弱阳性(+)，5～8分为中度阳性(++)，9～12分为强阳性(+++)。良性甲状腺结节与恶性甲状腺结节以术后病理结果为准，免疫组化“-”为良性(阴性)，“+”、“++”、“+++“”为恶性(阳性)。鉴别良恶性，a表示真阳性，b表示假阳性，c表示假阴性，d表示真阴性，灵敏度=a/a+c，特异度=d/b+d，阳性预测值=a/a+b，阴性预测值=d/c+d。

1.3 统计学分析

SPSS 25.0进行数据分析，以率(%)表示gal-3、MK和CK-18检出率，采用Mann Whitney U检验，四格表计算gal-3、MK、CK18鉴别良恶性甲状腺结节的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值，所有统计均采用双侧检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 研究对象术后病理诊断

经术后病理确诊100例，年龄 (49.2±6.3)岁(31～69岁)，结节直径(10.5±3.2)mm(3～19mm)。甲状腺恶性结节36例(36.0%)，其中乳头状癌33例(33.0%)，滤泡癌2例(2.0%)，髓样癌1例(1.0%)；良性结节64例(64.00%)，其中结节性甲状腺肿38例(38.0%)，桥本病6例(6.0%)，甲状腺腺瘤20例(20.0%)。

2.2 Gal-3在不同性质甲状腺结节中的表达及甲状腺癌诊断价值

免疫组化检查结果示：恶性组Gal-3阴性0例，弱阳性6例，中度阳性5例，强阳性25例；良性组Gal-3阴性50例，弱阳性14例，中度阳性0例，强阳性0例，两组Gal-3表达存在差异(P<0.05)，见表1。Gal-3正确诊断甲状腺结节恶性36例，良性50例，灵敏度100.0%、特异度78.2%，阳性预测值72.0%、阴性预测值100.0%。

表1 不同性质甲状腺结节Gal-3表达[例(%)]

2.3 MK在不同性质甲状腺结节中的表达及甲状腺癌诊断价值

免疫组化检查结果示：恶性组MK阴性2例，弱阳性7例，中度阳性9例，强阳性18例；良性组MK阴性52例，弱阳性12例，中度阳性0例，强阳性0例，两组MK表达存在差异(P<0.05)，见表2。Gal-3正确诊断恶性甲状腺结节34例，良性甲状腺结节52例，灵敏度94.4%、特异度81.3%，阳性预测值73.9%、阴性预测值96.3%。

表2 不同性质甲状腺结节MK表达[例(%)]

A：良性甲状腺结节 B：恶性甲状腺结节

2.4 CK-18在不同性质甲状腺结节中的表达及甲状腺癌诊断价值

免疫组化检查结果示：恶性组CK-18阴性3例，弱阳性1例，中度阳性3例，强阳性29例；良性组CK-18阴性54例，弱阳性5例，中度阳性4例，强阳性1例，两组CK-18表达存在差异(P<0.05)，见表3。CK-18正确诊断恶性甲状腺结节33例，良性甲状腺结节54例，灵敏度91.7%、特异度84.4%，阳性预测值76.7%、阴性预测值94.7%。

表3 不同性质甲状腺结节CK-18表达[例(%)]

3 讨论

Gal-3是一类多功能β半乳糖结合蛋白，可表达于肿瘤细胞和非肿瘤细胞，在细胞增生不同阶段表达不同，具有调控细胞增殖、细胞与间质粘附、炎症反应、肿瘤转移、免疫应答等多种作用；在肺癌、卵巢癌、胃癌等多种恶性肿瘤中均高水平表达，刺激肿瘤细胞增殖、抑制凋亡，促进血管生成、肿瘤细胞与外基质作用，被证实与肿瘤发生和进展密切相关[6]。许文琼等[7]观察甲状腺癌中Gal-3 阳性表达率明显高于良性甲状腺结节。某些因素作用下Gal-3过度表达会导致细胞恶性转化和转移癌细胞产生[8]。本研究恶性组Gal-3阳性表达率高于良性组，提示Gal-3阳性表达的甲状腺结节具有高度恶变的可能。而本研究良性组也有部分患者出现Gal-3阳性表达，分析可能原因为巨噬细胞激活后Gal-3表达，导致Gal-3细胞外分泌和胞浆合并。本研究统计分析Gal-3诊断甲状腺癌的灵敏度达100.0%，提示Gal-3可作为鉴别良恶性甲状腺结节的敏感生物学指标。

MK是一种新型分泌型细胞因子，在胚胎发育期与细胞生长分化过程中有重要作用。健康成人MK少有表达或表达量极低，在恶性肿瘤组织中呈现高度表达，在肿瘤细胞增殖、迁移、血管生成等多种生物学行为中发挥重要作用，且与恶性肿瘤恶性程度和预后密切相关[9-11]。近年来研究表明MK表达与甲状腺关系密切，免疫组化研究表明MK在甲状腺癌组织中表达水平较正常组织明显增高[12-13]，杨鹏飞等[14]发现甲状腺恶性结节患者外周血血清中MK 浓度明显高于良性结节患者和正常人群。本研究恶性甲状腺结节中MK阳性表达率明显高于良性组，说明MK与甲状腺恶性肿瘤的发生有关，MK诊断甲状腺癌的灵敏度和特异度分别为94.4%、81.3%，提示MK可以作为鉴别甲状腺结节性质的可靠指标。

CK-18是一种低分子量角蛋白，特异性表达与上皮细胞内，尤其是腺上皮来源细胞[15]。在细胞恶性转化过程中有重要作用，且持续存在于上皮细胞肿瘤中，在正常淋巴组织中几乎不表达，为诊断癌微转移提供了客观依据。目前研究多关注CK-19与甲状腺癌中的表达特点及其临床意义，证实CK-19几乎表达与所有类型甲状腺癌组织中，而在良性甲状腺结节中阳性表达量<5.00%，是鉴别良恶性甲状腺结节的关键证据之一[16]。CK-18与CK-19同属于角蛋白家族，CK-18与甲状腺癌关系的研究较少，在甲状腺癌的表达特点尚不清楚，本研究免疫组化检测CK-18在恶性甲状腺结节中呈高度表达，且明显高于良性组，对甲状腺癌诊断具有较高价值，提示采用免疫组化方法对甲状腺结节进行CK-18单抗标记, 可提高对肿瘤细胞侵犯被膜和血管的检出率, 为甲状腺癌临床病理诊断及其与良性甲状腺结节的鉴别提供客观依据。

综上，本研究观察的女性甲状腺癌患者Gal-3、MK、CK-18阳性表达均明显增高，提示检测甲状腺结节组织Gal-3、MK、CK-18有助于鉴别良恶性甲状腺结节。