胸腹水脱落细胞学瘤包石蜡切片免疫组织化学染色的应用

张福田 赖续文 张 伟

胸腹水脱落细胞学瘤包石蜡切片免疫组织化学染色的应用

张福田 赖续文 张 伟

（广州军区广州总医院病理科，广东510010）

胸腹水脱落细胞学；瘤包石蜡切片；免疫组织化学染色

胸腹水脱落细胞学涂片做免疫组织化学染色，因具有取材方便、易行，病人痛苦小等优点而适用于临床［1］。脱落细胞学涂片免疫组织化学染色技术最需要注意的问题是背景染色和涂片粘附的牢固程度。因为背景的存在会影响阳性结果的判断，尤其是抗原表达少的弱阳性病例；而涂片涂的不好、厚薄不均、粘贴不牢，都将会在免疫组织化学染色操作时把涂上的细胞冲洗或修复掉片，造成染色失败［3］。为解决上述问题，我们采用了脱落细胞学瘤包石蜡切片免疫组织化学染色技术，经多次反复实验证明，瘤包石蜡切片免疫组织化学染色结果，背景清晰，阳性物明显突出，易于诊断，细胞粘附牢固，极少出现细胞被冲洗及修复脱落掉片的现象，保证了检测的成功率和阳性率。获得满意效果，现报道如下。

材料和方法

1.标本

收集我院送检的新鲜胸腹水标本，自然沉淀后肉眼见有沉淀物的标本。

2.方法

2.1 留取新鲜胸腹水标本静置60min，去上清液，留取近瓶底液体约100ml，混匀后取液体于4个5ml离心管内离心（3000r／min）后去除上清液，取各管沉淀物汇总于一个离心管内（可以取少量沉淀物制成涂片）。加无水乙醇混匀，重新离心（3000r／min），去上清液，取出离心沉淀物用通透性好的纸将其包裹后放入10%的中性甲醛中固定，放入包埋盒内后经LEICA PELORIS全自动组织脱水机进行常规脱水、透明、浸蜡。

2.2 从包埋盒内取出沉淀物用Thermo Shan-don HISTOCENTRE 3石蜡包埋机将其包成蜡块，再用Thermo FINESSE E＋切片机切片，切片前应先去除蜡块周围过多的石蜡，然后切成3-4μm的切片，捞片用涂胶片。60℃烤箱中烤片过夜。（可以多切多捞一张片做常规HE染色图1）。

2.3 采用免疫组织化学Envision法染色，选用北京中杉金桥生物有限公司的一抗有：CK、CK7、Vim等。二抗试剂盒为Dako Envision通用多聚物酶标检测系统。按试剂盒说明书操作进行。DAB显色，苏木素复染，切片脱水、透明、封片。

结 果

脱落细胞学瘤包石蜡切片免疫组织化学染色后，细胞形态清晰，易于观察，阳性结果定位准确，背景清晰，呈棕黄色，未见有非特异性染色的现象出现，少见有细胞冲洗及修复脱落掉片的现象［3］（图2和图3）。保证了检测的成功率和提高了对恶性肿瘤的阳性检出率。

讨 论

常规胸腹水涂片厚，细胞易重叠，细胞量少，有时难以看到足够诊断的形态学改变。细胞涂片免疫组织化学染色常因内源性血浆蛋白以及红细胞干扰，使背景出现非特异性染色，对恶性肿瘤的阳性检出率和鉴别诊断影响很大。应用胸腹水瘤包石蜡切片技术可以得到细胞数量丰富的HE切片。切片可以复制，资料容易保存。胸腹水瘤包石蜡切片免疫组织化学染色所检测的病例阳性部位明显，颜色鲜艳，位于细胞膜及细胞浆，定性和定位准确，背景清晰干净，未见有非特异性染色的现象出现，少见有细胞脱落掉片的现象。阳性结果明显，成功率高，容易让医生做出明确的诊断。

在细胞学标本处理上，一定要对送检胸腹水即时处理，尽量收集有效成分，固定及时，形态保存完好，抗原物质的抗原性不丢失、不扩散、不被破坏［2］。由于胸腹水离心后标本易散开，必须用通透性好的纸将其包好，防止漏出来污染其它组织。

在做免疫组织化学染色时，注意要用涂胶片，切片在烤片后才不至于在高压抗原修复时掉片［2］。沉淀物包埋做免疫组织化学染色在胸腹水的诊断中对明确肿瘤类型、组织来源和鉴别诊断起重要作用，但也需要结合形态学特点做诊断［2］，故做免疫组化的同时，最好多切一张片做常规HE染色对照观察。

［1］朱晓梅，鲍扬漪，何皖伟，等.细胞涂片免疫组织化学染色体会。临床与实验病理学杂志，1999；15（5）：469

［2］郑晓玲，邵云，李晓兵，等.免疫组织化学染色方法在胸腹水沉积物检测中的应用初探。军事医学科学院院刊，2007，31（2）194-195

［3］蔡俊杰，丁彦青，赵菲.脱落细胞涂片免疫组织化学技术有关问题的探讨。中国组织化学与细胞化学杂志，1999，8（4）

图 版 说 明

图1 瘤包石蜡切片常规HE染色 （×100）

图2 瘤包石蜡切片CK免疫组织化学染色（＋）（×100）

图3 瘤包石蜡切片Vim免疫组织化学染色（＋）（×100）

EXPLANATION OF FIGURES

Fig.1 Tumor cells paraffin-embedden conventional slice HE staining HE×100

Fig.2 Tumor cells paraffin-embedden immunohistochemical staining Pan-CK is positive EnVision×100

Fig.3 Tumor cells paraffin-embedden immunohistochemical staining Vimentin is positive EnVision×100

R448.20

A

10.3870／zgzzhx.2011.05.018

2011-03-09

2011-06-26

张福田，男（1982年），汉族，技师。