HLA-DR4、 自身抗体ACⅡ和抗Sa 抗体诊断类风湿关节炎的应用效果评估

汪辉

（湖北省监利市中医医院检验科，监利 433300）

类风湿性关节炎是一种由于免疫系统攻击机体正常细胞所引起的自身免疫性疾病， 患者主要表现出关节肿胀和疼痛， 经常伴有关节外器官受累及血清类风湿因子阳性， 可以导致关节畸形及功能丧失，严重影响患者日常生活，严重者甚至会出现终身残疾的情况[1-2]。 该病好发于女性，发病率为男性的2～3 倍，可发生于任何年龄，高发年龄为40～60 岁。类风湿关节炎治疗的主要目的在于减轻关节炎症反应，抑制病变发展及不可逆骨质破坏，尽可能保护关节和肌肉的功能， 最终达到病情完全缓解或降低疾病活动度的目标。 治疗原则包括患者教育、早期治疗、联合用药、个体化治疗方案以及功能锻炼。 早期的治疗就需要早期发现，患者患病早期比较隐匿， 一旦发病则症状很难通过服药消除，所以需要早期检查[3]。 通过相关生理指标的检测有助于及早发现及控制类风湿性关节炎的发生和发展[4]。 目前在临床上，比较认可的指标是白细胞抗原-DR4 (HLA-DR4)、自身抗体AC II、抗Sa 抗体。 因此，本研究拟对人类白细胞抗原-DR4(HLA-DR4)、 自身抗体AC II 和抗Sa 抗体在类风湿性关节炎诊断中的应用效果进行研究， 以期提高临床上对类风湿关节炎的早期诊断。 现将研究汇报如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019 年3 月至2020 年3 月期间在我院风湿科治疗的类风湿关节炎100 例患者作为研究对象。其中男38 例，女62 例；年龄24～68 岁，平均年龄（46.35±10.56）岁。同时选取我院收治的未发生类风湿关节炎的患者60 例，其中男22例，女38 例；年龄21～66 岁，平均年龄（45.98±10.21）岁。 纳入标准：（1）类风湿关节炎均符合2010 版《类风湿关节炎分类标准》；（2）全部患者均知情同意。排除标准：（1）合并严重的脏器疾病；（2）妊娠期女性；（3）合并免疫系统疾病者；（4）入院前1 个月服用激素等药物。 同期选取健康体检者60例作为健康对照组，其中男23 例，女37 例；年龄22～70 岁，平均年龄（46.15±9.86）岁。三组患者的一般资料差异无统计学意义（P>0.0.5），具有可比性。本研究经过我院伦理委员会批准。

1.2 检测方法 （1）标本的采集：抗体检测采集空腹静脉不抗凝血2.0～3.0 mL，1000 rpm 离心15 min 分离血清。 HLA-DR4 检测采取基因组DNA，按试剂盒说明书提取DNA，取全血200 μL，加入红细胞裂解液，振荡混匀，离心，留有细胞核，加有核细胞裂解液，振荡混匀至透明为止，将其加入至DNA 吸附硅胶柱上，离心，分别加入蛋白清洗液和离子清洗液进行DNA 清洗纯化， 最后使用DNA洗脱液洗脱DNA，用紫外分光光度计检测DNA 的浓度。样本如果不能及时检验，需保持-20℃冷冻待检，避免反复冻融。 DR 特异性引物序列为，上游：5-ACGTT TCTTGGAGCAGGTTAAACA-3；下游：5-CTGCACT GTGAAGCTCTCAC-3； 将样本DNA、底物、Taq 酶混匀，在PCR 扩增仪进行扩增，条件为96 ℃孵育150 s，96 ℃15 s - 65 ℃60 s 共10 个循环，96 ℃15 s - 62 ℃50 s - 72 ℃35 s 共22 个循环，4 ℃保存，扩增产物用2%琼脂糖凝胶进行8 min 电泳，于凝胶成像系统上拍照，记录结果。 （2）检测方法： 自身抗体ACⅡ和抗Sa 抗体采用酶联免疫吸附法试剂盒检测， 均采用德国欧蒙医学实验诊断股份有限公司生产的ELISA 法试剂；HLADR4 采用美国Texas BioGene 公司的MorganTM HLA-DR4 SSP 分型试剂盒，操作均依照说明书严格进行。

1.3 统计学分析 采用SPSS 分析软件， 计数资料组间单因素分析采用卡方检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。 对定量资料作受试者特征曲线(receiver operating characteristic curve，ROC)， 计算ROC 曲线下面积，AUC 在0.5～0.7 为诊断价值较差，0.7～0.9 为诊断价值中等，＞0.9 为诊断价值较高。

2 结果

2.1 3 组人群HLA-DR4、 自身抗体ACⅡ和抗Sa抗体阳性率比较 类风湿关节炎患者的HLADR4、自身抗体ACⅡ和抗Sa 抗体阳性率显著高于非类风湿关节炎患者及健康对照（P＜0.05）。 见表1。

表1 HLA-DR4、自身抗体ACⅡ和抗Sa 抗体阳性率比较[n（%）]

2.2 HLA-DR4、 自身抗体ACⅡ和抗Sa 抗体单项检测的灵敏度和特异性 3 项指标中，自身抗体ACⅡ的灵敏度（77.5%）和特异性（88.2%）最高，见表2。

表2 HLA-DR4、自身抗体ACⅡ和抗Sa 抗体单项检测的灵敏度和特异性（%）

2.3 HLA-DR4、 自身抗体ACⅡ和抗Sa 抗体联合检测的诊断效率 3 种指标联合检测具有的灵敏度、特异性高于单独检测，AUC 为0.912（P＜0.05）。见表3。

表3 HLA-DR4、自身抗体ACⅡ和抗Sa 抗体联合检测的诊断效率（%）

3 讨论

类风湿性关节炎以自身免疫为特征， 会导致患者出现关节滑膜增生从而引起滑膜炎甚至产生残疾，严重影响患者的生活质量[5]。 目前，对于类风湿性关节炎的发病机制尚未有清晰了解， 相关数据统计分析发现，生活习惯、遗传因素、环境因素和免疫分子调节异常都是导致类风湿性关节炎发病的危险因素[6]。 对于类风湿性关节炎的治疗以早发现早控制为基础， 早期类风湿性关节炎的病情是可逆的， 但进展到中后期则会出现不可逆的机体损伤，最终致残[7]。 由于缺乏特异性的诊断指标，使得类风湿性关节炎的早期诊断存在较大困难。

HLA-DR4 属于II 类主要组织相容性复合物，在抗原呈递过程中发挥作用， 由于其抗原与部分病毒分子的表面结构类似使得免疫系统错误识别产生免疫反应[8]。 有研究表明，HLA-DR4 的等位基因对类风湿性关节炎的病情进展具有较高的相关性，可用于病情严重程度的预测[9]。

自身抗体二型胶原蛋白（AC II）主要由软骨细胞产生，因此多存在于骨骼和关节组织中，有研究报道称，阳性AC II 是导致关节痛病情进一步发展为类风湿性关节炎并影响患者预后的独立危险因素[9]。 张平武等[10]报道AC II 与患者的风湿因子表达呈现正相关性， 可用于类风湿性关节炎临床诊断。

Sa 抗原主要存在于人的胚胎组织和关节滑膜中，正常情况下机体并不会产生其对应抗体，但有报道称在类风湿性关节炎患者血清中普遍存在有抗Sa 的IgG 抗体[11]。 张利军[12]利用Sa 抗原联合人类白细胞抗原-DR4 及抗环瓜氨酸肽抗体诊断类风湿性关节炎取得较高的灵敏度和特异性。

本研究证实， 类风湿关节炎患者的HLADR4、自身抗体ACⅡ和抗Sa 抗体阳性率显著高于非类风湿关节炎患者及健康对照（P<0.05）,而非类风湿关节炎患者及健康对照间无统计学差异。 提示， 三指标在类风湿关节炎患者中存在显著高表达，可以用于类风湿关节炎的临床判断。 利用三指标单独对类风湿关节炎进行诊断发现，三指标中，自身抗体ACⅡ的灵敏度和特异性最高分别为77.5%和88.2%。 为进一步提高诊断的灵敏度和特异性， 本研究对三指标的联合检测效果进行检测发现， 任意两项指标联合检测的效果均优于单一指标判断， 提示三种生物指示物的代谢通路不同,相互之间无显著相关性。 因此，联合检测三种指标具有最高的灵敏度、特异性，具有临床应用价值。

综上所述，HLA-DR4、自身抗体ACⅡ和抗Sa抗体诊断类风湿关节炎的诊断准确率较高， 可作为辅助诊断方式。