采用EBV-DNA载量检测方法检测1306例患者临床分析

阚惠娟 ，薛雪 ，虞健

1.江苏省苏州市立医院东区儿科，江苏苏州 215001;2.江苏省苏州市立医院东区检验科，江苏苏州 215001

Epstein-Barr病毒（EBV）是1964年由 EpsteinBarr等人在一个非洲患者体内发现的是，属于γ亚科疱疹病毒[1]。EBV主要经过唾液传播，感染后可长期潜伏于体内，一旦活化，可导致全身几乎所有脏器损害。目前临床上用于EBV的实验室检测方法主要有病毒培养、免疫学检测、EBV-DNA载量检测三大类。虞敏等认为EBV-DNA载量检测对小儿EB病毒感染是否处于活动期重要意义[2]。该文采用EBV-DNA载量检测方法分析2014年11月—2017年5月在苏州市立医院东区住院患者1306例进行临床分析。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取在苏州市立医院东区的1306例住院患者进行EBV-DNA检测，该研究经过医院伦理委员会讨论同意，并经患者家属签字同意。这些患者临床表现有：发热、扁桃体肿大、淋巴结肿大、肝脾肿大、肝功能异常及鼻咽部肿瘤、不明原因反复感染的患者。

1.2 EBV-DNA载量的检测方法

采用湖南圣湘生物科技有限公司的EB病毒核酸定量检测试剂盒，取外周血样本，使用同公司的全血基因组提取试剂处理，得到DNA作为待测样本，提取血清EBVDNA具体按照说明书进行，将待测样本严格按照说明书进行PCR扩增，检验结果的参考区间见试剂盒说明书。

1.3 统计方法

统计方法采用Excel建立数据库，运用统计学分析软件IBM SPSS19.0进行统计分析。计数资料采用[n（%）]表示，行χ2检验，各组间率的比较采用行×列字χ2检验，当总样本量n≥40且所有的单元格的理论频数 （期望频数）T≥5时，采用 Pearsonχ2检验，根据 person χ2的结果，当总样本量n≥40但有1≤T＜5时，采用连续性校正χ2检验，当总样本量n＜40，或最小理论频数T＜1，或检验所得P值接近于检验水准α，采用Fisher确切概率法检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同年龄段EBV感染情况

成人与儿童均可感染EBV，在检测的1306例住院患者中共检出407例EBV-DNA阳性患者，整体检出率31.16%（表1）。其中男性和女性EBV感染率阳性率分别为32.19%，29.88%（表2），差异无统计学意义（P＞0.05）。0～＜14岁儿童、14岁以上EBV-DNA阳性率分别318例（24.35%）和89例（6.81%），差异有统计学意义（P＜0.05）。在14岁以下儿童中，各年龄组：0～1岁、1～3岁、3～6岁，6～14岁，EBV-DNA阳性率分别为13.51% ，27.4% ，38.35%和32.87%。其中男性感染阳性率分别为17.24%、33.94%、37.33%、33.78%、，女性感染率分别为0.00%、28.49%、39.49%、31.91%（表3），运用统计学分析软件IBM SPSS statistic 19.0进行统计分析，不同年龄患者EBV感染率差异有统计学意义（P＜0.05），不同性别儿童EBV感染率差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 2014年11月—2017年5月期间不同年龄段EBV感染的分布情况

表2 2014年11月—2017年5月期间不同性别EBV感染的分布情况

表3 2014年11月—2017年5月期间14岁以下不同年龄段EBV感染的分布情况

不同性别EBV感染阳性率差异无统计学意义，P=0.4，＞0.05。

2.2 EBV病毒所致疾病临床表现

1306例住院患儿者中共检出的407例EBV-DNA阳性患者，其中，14岁以上患者89例，14岁以下患者318例，其临床诊断分布情况见分别见表4、表5

表4 14岁以上EBV-DNA阳性者临床诊断分布

表5 14岁以下EBV-DNA阳性者临床诊断分布

3 讨论

EBV，又称人类疱疹病毒4型，类似于其他疱疹病毒，EBV基因组为双链线性DNA分子，EBV的感染周期包括初始感染和潜伏感染。初始感染阶段促进了EBV的传播并引起原发感染，也对潜伏感染的建立起到了一定的作用[3]。EBV通过gp 350/200与B细胞表面的CR2相结合而进入B细胞，并诱导其分化为记忆性B细胞，形成长期潜伏感染，EB病毒在潜伏感染在B细胞中，EBV很少发生复制，从而逃避了机体的免疫监视，并且还可以诱导B细胞分化为类淋巴母细胞系细胞[4]。

活动期的EBV可破坏淋巴细胞，进入血液循环，绝大多数的血浆游离DNA片段大小为82～181kb，因此可采用PCR检测血浆中游离DNA的含量，通过定量分析可以准确测定出病毒载量，从而反映体内EBV复制情况。由于血浆EBV-DNA仅存在于病毒血症期，EBV感染2周后开始迅速下降，因此早期检测血清EBV-DNA可提高EBV现症感染，并对EBV感染是否处于活动期有重要指导意义[5]。该研究提取外周血全血中EBV-DNA进行定量检测，共检出EBV-DNA阳性407例，阳性率31%，其中男性243例，女性173例，男：女约1.3左右，不同性别EBVDNA阳性率差异无统计学意义（P＞0.05）。

该次研究的1306例患者中，发现所有年龄段均可感染EB病毒，故而EBV人群中普遍存在，有研究表明90%的健康人可终身携带[6]。该次研究中0～14岁儿童占78%，考虑与儿童免疫力低下，从而易感染EBV有关[7]。其中0～1岁、1～3岁、3～6岁，6～14岁，EBV-DNA 阳性率分别为13.51% ，27.4% ，38.35% 和32.87%，1～6岁儿童 EBV-DNA阳性率在14岁以下儿童中占大部分，约有68%左右，由此可见，1～6岁儿童对EBV尤其易感。其原因可能与1～6岁期间，儿童免疫系统逐步发育，但尚未发育成熟，其免疫功能容易受到病毒侵袭有关。该次研究结果与王春远、张胜等的研究相符[8-9]，而朱婵红等[10]分析335例外周血EBVDNA检测结果发现，0～3岁儿童EBV感染阳性率77%，与该研究略有差异，考虑可能与不同区域、不同人群有关。

该次研究中共检出的407例EBV-DNA阳性患者，其中14岁以上89例，14岁以下318例，不同年龄段患者感染EBV后的临床表现各有不同。14岁以下患者感染EBV后临床表现有：呼吸系统疾病占88%，传染性单核细胞增多症9.7%，其他疾病2.3%，其中合并有支原体感染136例（43%），见表5。呼吸系统疾病包括支气管肺炎、上呼吸道感染、扁桃体炎、急性支气管炎，合并有肝功能异常4%，合并有血液系统改变2%。由此可见儿童EBV感染后主要引起呼吸道感染，且容易合并支原体感染。有研究发现，EBV合并支原体感染可加重肺内外损伤，且EBV拷贝数高低是影响MP混合EBV感染后肺炎肺内外损伤程度的重要原因[11]。14岁以上EBV-DNA阳性患者临床表现以肿瘤为主（表4），其中鼻咽癌占79%。EBV是第一个发现能引起肿瘤的疾病毒[12]，目前EBV-DNA已成为鼻咽癌重要肿瘤标志物，在鼻咽癌的诊断、分期、治疗、预后中有重要指导意义[13]。由于EBV具有潜伏感染方式，14岁以下儿童期初发感染患者，在EBV活动期后一部分被清除，另有一部分将进入潜伏感染状态，成长过程中，在自身机体的免疫力低下或者环境改变等情况下，潜伏感染的EBV会被大量激活，再次进入裂解复制阶段，引起某些疾病，如传染性单核细胞增多症、慢性EBV感染(CAEBV)、嗜血细胞综合征（HLH）及肿瘤性疾病。因此儿童期EBV感染需引起重视并加强随访。