p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1在胃癌组织中的表达及意义

闫斌,于跃利,韩丽红

1.包头医学院第一附属医院普外二科，内蒙古包头 014010；2.包头医学院生物化学教研室，内蒙古包头 014060

*论著*

p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1在胃癌组织中的表达及意义

闫斌1,于跃利1,韩丽红2

1.包头医学院第一附属医院普外二科，内蒙古包头 014010；2.包头医学院生物化学教研室，内蒙古包头 014060

目的 探讨磷酸化雷帕霉素靶蛋白 (p-mTOR)、p-4EBP1及p-S6K1蛋白的表达水平与胃癌常见临床病理因素的关系。 方法 选择2014年3月—2016年6月在包头市肿瘤医院行手术切除的60例胃癌患者为观察组，对照组为癌旁组织(肿瘤边缘5 cm处)胃组织40例。采用免疫组化的方法检测60例胃癌组织及40例癌旁胃组织中p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1的表达情况。结果p-mTOR在观察组和对照组的阳性率分别为36.7%和10.0%，p-4EBP1在观察组和对照组的阳性率分别为80.0%和60.0%，p-S6K1在观察组和对照组的阳性率分别为26.7%和10.0%。p-mTOR、p-4EBP1和p-S6K1在胃癌组织中的表达水平高于癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1在胃癌组织中过度表达可能是胃癌发生的重要机制之一。

胃癌；磷酸化雷帕霉素靶蛋白；4E结合蛋白1；磷酸化核糖体S6蛋白激酶1；免疫组织化学法

胃癌是来源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤，胃癌是全球发病率第5位的恶性肿瘤，致死率仅次于肺癌、肝癌居第3位。胃癌的治疗措施包括手术、化疗、放疗、内分泌治疗及生物靶向治疗等，其中手术结合化学药物治疗是胃癌治疗的最佳方案。当今医疗技术水平的不断提升，胃癌发生及发展相应分子生物学机制，日益成为临床研究人员关注之重点，哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）是近些年发现的蛋白质翻译、核糖体合成及细胞内参当中一种十分重要的生物学行为[1]。该次研究通过选取 2014年 3月—2016年6月在包头市肿瘤医院诊治的60例胃癌患者，就mTOR信号通路与胃癌组织相关性予以分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

观察组为2014年3月—2016年6月在包头市肿瘤医院行手术切除的60例胃癌患者，于手术前均未采用化疗及放疗经历，且均为首次手术，收集胃癌组织、癌旁组织(肿瘤边缘4 cm处)；对照组为癌旁组织(肿瘤边缘5 cm处)胃组织40例。取其组织，均防止于液氮罐内，实施冷冻保存。所选取观察组胃癌患者中，男性患者为37例，女为23例，年龄39～75岁，平均年龄为48.8岁，病程1～5年，患者均经相关病理学诊断确诊病症类型。对照组患者男性患者为27例，女为13例，年龄42～71岁，平均年龄为45.6岁，病程1～5年。两组患者性别、年龄、病程等一般资料差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法

p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1蛋白的检测方法采用免疫组化法：一抗p-mTOR(Bioworld Technology,BS4706)、P-S6K1(PR-1281P）、P-4EBP1(bs-3018R），一抗稀释度分别为 1:100、1:100、1:50。二抗:HRP标记抗兔二抗。pmTOR、p-4EBP1和p-S6K1均以胞质中出现棕黄色颗粒为阳性，以0.01 mol/L PBS代替一抗作为阴性判断标准。

1.3 统计方法

采用SPSS 19.0统计学软件处理所得数据，彩用均数±标准差（±s）表示计量资料，t对其实施检验，采用直线相关分析两因素的相关性，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

p-mTOR在观察组和对照组的阳性率分别为36.7%和10.0%，p-4EBP1在观察组和对照组的阳性率分别为80.0%和60.0%，p-S6K1在观察组和对照组的阳性率分别为26.7%和10.0%。p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1在胃癌组织当中相应表达水平高于癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。在胃癌中，p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1的染色阳性部分主要集中于胃癌细胞的胞浆部分，成棕色、弥漫性的分布于细胞胞浆当中，在对照组的胃癌旁组织中，染色的阳性部分主要集中于细胞胞浆，呈棕色如图1、图2、图3）。

表1 p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1表达情况

图1 p-mTOR在胃癌旁组织及胃癌组织中的表达

图2 p-4EBP1在胃癌旁组织及胃癌组织中的表达

图3 p-S6K1在胃癌旁组织及胃癌组织中的表达

3 讨论

相关报道显示[2-6]，mTOR信号通路与乳腺癌、胃癌、结肠癌、甲状腺癌等多种恶性肿瘤的的发生、发展密切相关。当mTOR受到其通路方面的PTEN基因、上游生长因子受体等多因素的影响下，能够对细胞凋亡产生抑制作用，对于肿瘤血管相应形成具有促进作用，并促进肿瘤侵袭转移。mTOR在肝癌、胰腺癌、胃癌等[7-9]消化系肿瘤中亦存在高表达和活化，已成为胃癌治疗的新靶点。

张刚等[10]采用免疫组织化学法及Westernblot方法检测P-AKT及P-mTOR在胃癌(100例)、癌旁(80例)及胃组织正常黏膜(100例)中的表达水平，并分析其与常见病理学指标之间的关系，探讨两者之间的相关性。结果pmT0R在胃癌、癌旁及胃组织正常黏膜中的阳性表达均呈降低趋势，与Westernblot结果一致。p-AKT在胃癌中的表达与肿瘤分化程度有关，p-mTOR在胃癌中的表达与淋巴结转移有关。p-AKT及p-mTOR在同一例胃癌患者中表达呈显著正相关。该次研究结果显示p-mTOR在观察组和对照组的阳性率分别为36.7%和10.0%，p-4EBP1在观察组和对照组的阳性率分别为80.0%和60.0%，p-S6K1在观察组和对照组的阳性率分别为26.7%和10.0%。pmTOR、p-4EBP1及p-S6K1在胃癌组织当中相应表达水平高于癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。与该次的结果相似。伴随mTOR信号通路在整个抗癌研究的广泛应用，其通过抑制靶向，或将此信号相应传导通路当中的某位点给予下调，则会对肿瘤发生及发展作用造成影响。

综上所述，针对胃癌患者，mTOR信号通路在其组织当中特异性激活，而mTOR信号通路可能作用于胃癌的发生及发展。

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Expression and Significance of p-mTOR,p-4EBP1 and p-S6K1 in the Gastric Cancer Tissue

YAN Bin1,YU Yue-li1,HAN Li-hong2
1.Second Department of General Surgery,First Affiliated Hospital of Baotou Medical College,Baotou,Inner Mongolia, 014010 China；2.Biological and Chemistry Teaching and Research Room,Baotou，Inner Mongdia 014060 China

Objective To discuss the correlation between the expression level of p-mTOR,p-4EBP1 and p-S6K1 and common clinical pathological factors of gastric cancer.Methods 60 cases of patients with gastric cancer with operative incision in our hospital from March 2014 to June 2016 were selected as the observation group,and 40 cases of patients with paracancerous tissue gastric tissue(tumor marginal 5cm)were selected as the control group,and the expression of p-mTOR,p-4EBP1 and p-S6K1 was tested by the immunohistochemical method.Results The positive rate of p-mTOR,p-4EBP1 and p-S6K1 in the observation group and the control group was respectively 36.7%and 10.0%,80.0%and 60.0%and 26.7%and 10.0%,and the expression level of p-mTOR,p-4EBP1 and p-S6K1 in the gastric tissue was higher than that in the paracancerous tissue,andthe differences had statistical significance（P＜0.05）.Conclusion The overexpression of p-mTOR,p-4EBP1 and p-S6K1 in the gastric tissue may be one of the important mechanism of occurrence of gastric cancer.

Gastric cancer;p-mTOR;p-4EBP1;p-S6K1;Immunohistochemical method

R735

A doi 10.11966/j.issn.2095-994X.2017.03.01.01

2016-12-20；

2017-01-05

包头市科技计划项目（2015S2004-5-6)；内蒙古自治区高等学校科学研究项目（NJZY16204)；包头医学院博士启动基金项目（BSJJ201605)。

闫斌（1978.11-），男，内蒙古包头人，本科，副主任医师，主要从事普外科疾病的诊断与治疗工作。

韩丽红（1979.9-），女，内蒙古赤峰人，博士，教授，主要从事肿瘤基因诊断研究工作，E-mail:ybacm@163.com。