益生菌治疗非酒精性脂肪性肝病的临床研究

时间：2024-09-03

姚惠香，陈维雄，陈玮，朱金水，孙群

上海交通大学附属第六人民医院消化科，上海 200233

非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)已成为威胁人类健康的一大重要病因。最新的流行病学数据显示，全球人群中NAFLD的发病率非常高，接近20%［1］，且约10% ～15%的非酒精性脂肪性肝炎患者最终可以发展为肝硬化［2］。因此，有效的预防及治疗措施成为控制脂肪肝发展成终末期肝病的关键。近年来，随着微生态学研究的深入及发展，肝功能障碍、代谢性疾病与肠道微生态之间的相互联系正不断受到重视［3］，新的研究显示，肠道微生态改变、肠源性内毒素血症在NAFLD发病中起着重要作用［4］，因而推测益生菌可能对NAFLD具有潜在的治疗作用。本研究通过观察培菲康对NAFLD患者肝功能、肠道屏障功能及超声影像学变化，探索益生菌在治疗NAFLD中的作用及疗效。

1 对象与方法

1.1 研究对象

1.1.1 入选标准:2010年12月－2012年6月我院消化科门诊确诊脂肪肝的患者120例，年龄18～65岁，均符合中华医学会肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组2010年修订的《非酒精性脂肪性肝病或酒精性脂肪肝诊疗标准》［5］。

1.1.2 排除标准:排除妊娠及合并心、肝、肺、肾、脑血管、内分泌等原发疾病及精神病患者，过敏体质及多种药物过敏者;除外明显的肝损伤(血清转氨酶＞正常值上限2倍)。

1.2 研究方法

1.2.1 研究设计:采用随机、双盲、平行对照试验，考虑不超过20%的失访率，估算样本量为120例，签署知情同意书，治疗组和对照组均为60例，随机序列号由上海市第六人民医院临床评价中心统一装入密闭信封。

1.2.2 干预措施:符合入选条件的120例患者禁止使用调脂、降糖药物及其他微生态制剂及保肝药物。在给予健康宣教的基础上，治疗组给予口服培菲康(双歧杆菌三联活菌胶囊，上海信宜药厂)840 mg/次，2次/d，对照组不予相关药物治疗，干预过程共3个月。

1.3 观察指标

1.3.1 一般情况:测量治疗前后身高、体质量、腰围和臀围，并计算体质指数(BMI)和腰/臀围比值，记录合并用药情况。

1.3.2 血清学指标:治疗前后通过全自动生化分析仪(OLYMPUS AU2007型)检测患者空腹血清ALT、AST、GGT等指标;采用鲎试剂基质偶氮显色法测定血清内毒素(试剂盒由上海伊华医学科技公司提供);采用分光光度法测定二胺氧化酶(diamine oxidase，DAO)(邻茴香胺甲醇溶液、尸胺二氢氯化物、辣根过氧化物酶和二胺氧化酶标准液为美国Sigma公司产品)。

1.3.3 影像学检查:所有病例治疗前后均行使用A loak Prosound 5500彩色超声诊断仪(探头频率3.0 MHz)进行B超检查，采用直方图技术对脂肪肝做定量分析［6］，测量同一切面不同深度的肝组织回声，计算其衰减系数，评价脂肪肝程度［7］。

1.3.4 不良反应:按《药物临床试验质量管理规范》不良反应分级标准。

1.4 统计学处理统计分析采用SAS 9.2;计量资料用均数±标准差表示，计数资料用率表示;组间均数差异的比较采用t检验，率的比较采用χ2检验;所有统计学检验均为双侧检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况共有120例非酒精性脂肪性肝病患者纳入研究，治疗组与对照组各60例，其中对照组7例中途退出试验，治疗组4例中途退出试验，1例因资料不全被剔除。完成全部治疗、资料完整的病例共108例，治疗组55例，对照组53例。两组性别、年龄、BMI、腰臀比(WHR)差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性(见表1)。

2.2 肝功能评价(ALT、AST、GGT) 两组干预前肝功能指标差异无统计学意义(P＞0.05);治疗组干预后与干预前比较，肝功能指标明显下降，差异有统计学意义(P＜0.05);对照组干预前后肝功能比较，差异无统计学意义(P＞0.05);干预后，治疗组较对照组肝功能指标明显下降，差异有统计学意义(P＜0.05，见表2)。

表1 两组一般资料比较()Tab 1 Basal characteristics in two groups()

表2 两组干预前后生化指标比较(，U/L)Tab 2 Liver function in two groups(，U/L)

注:与本组干预前比较，*P＜0.05;与对照组干预后比较，#P＜0.05。

2.3 肠道屏障功能评价(内毒素、DAO水平) 两组干预前内毒素、DAO水平差异无统计学意义(P＞0.05);治疗组干预后与干预前比较，内毒素、DAO水平明显下降，差异有统计学意义(P＜0.05);对照组干预前后内毒素、DAO水平比较，差异无统计学意义(P＞0.05);干预后，治疗组较对照组内毒素、DAO水平明显下降，差异有统计学意义(P＜0.05，见表3)。

2.4 超声影像学评价两组干预前超声直方图测定肝脏衰减系数差异无统计学意义(P＞0.05);治疗组干预后与干预前比较，衰减系数明显下降，差异有统计学意义(P＜0.05)，对照组干预前后衰减系数差异无统计学意义(P＞0.05);干预后，治疗组与对照组比较，衰减系数明显下降，差异有统计学意义(P＜0.05，见表4)。

表3 两组干预前后内毒素、DAO水平比较()Tab 3 Endotoxin and DAO level in two groups()

注:与本组干预前比较，*P＜0.05;与对照组干预后比较，#P＜0.05。

表4 两组治疗前后肝脏超声衰减系数值()Tab 4 Attenuation coefficient in two groups()

注:与本组干预前比较，*P＜0.05;与对照组干预后比较，#P＜0.05。

2.5 不良反应试验期间两组均未观察到明显不良反应。

3 讨论

最新研究发现，NAFLD的发病与肠道微生态改变、肠源性内毒素血症有关［4］，为肠道微生态调节治疗NAFLD提供了理论依据。Lacono等［8］已通过小鼠实验证实了益生菌能缓解NAFLD及胰岛素抵抗，但目前仍缺少大样本的临床试验的疗效证据。为了进一步验证这一理论及证实肠道微生态治疗NAFLD的临床可行性，本研究运用了临床常用的调节肠道微生态的药物培菲康干预NAFLD患者，获得了确切的疗效。

肠道微生态系统是人体最大的微生态系统，含有人体最大的贮菌库和内毒素池，菌种达500余种，重量约1000 g，它们以一定的数量和比例，存在人体的肠道中，构成了肠道的重要生物屏障。肠道与肝脏在解剖和功能上密切相关，肠道微生态失衡，肠道生物屏障功能受损，大量内毒素进入门脉系统，促发炎症介质释放，导致了肝脏的氧化应激和炎症损伤［9-10］。因此，调节肠道微生态平衡，改善肠道屏障功能，减少肠源性内毒素吸收的药物已成为治疗NAFLD新的研究方向。培菲康为含长型双歧杆菌、嗜酸乳杆菌和粪肠球菌的微生态制剂，含活菌数不低于1.0×107CFU，这3种菌是肠道的有益菌，与宿主其他细菌处于共生状态，在肠道中对致病菌产生营养竞争、黏附竞争及生物化学抑制作用，其代谢产物能阻止致病微生物的定植和入侵，该药应用于临床已近20年，对各种原因引起的肠道菌群失调，维持肠道微生态平衡疗效确切［11］，但目前在治疗NAFLD方面的临床资料尚不多见。

肠黏膜通透性改变能准确反映肠道屏障功能，通过检测血内毒素和DAO活性，可间接反映肠道黏膜的完整性和通透性变化［12-13］。本实验通过检测干预前后患者血中内毒素和DAO水平的改变，观察益生菌对患者肠道屏障功能的影响。研究结果显示，治疗组给予益生菌干预后，与干预前及对照组相比，患者ALT、AST、GGT及内毒素、DAO水平显著下降、超声肝脏脂肪定量明显减少，治疗过程中未发生不良反应，提示益生菌能有效改善NAFLD患者的肠道屏障功能，改善患者的肝功能，减少肝脏脂肪沉积，且作用安全、有效，值得临床推广。

由于受试验条件限制，本试验未采用肝脏活检标本作为肝脏脂肪定量测定标准，未观察益生菌对NAFLD患者肠道细菌谱改变的影响，对于肠道菌群改变影响肠道屏障功能机制的研究尚不够。因此，有必要通过更完备、深入的试验来解决上述问题，为益生菌治疗NAFLD提供更充分的依据。

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