免疫化学发光法、酶联免疫吸附法测定25羟维生素D在常见甲状腺相关疾病诊断中的应用价值

张晶晶，汤俊明，吴黎明，黄 莺，冯斯依，陈 翔

·临床经验·

免疫化学发光法、酶联免疫吸附法测定25羟维生素D在常见甲状腺相关疾病诊断中的应用价值

张晶晶1，汤俊明1，吴黎明1，黄 莺1，冯斯依1，陈 翔2

目的 采用免疫化学发光法(CLIA)、酶联免疫吸附法(ELISA)检测25羟维生素D[25(OH)D3]在常见甲状腺相关疾病患者外周血中的表达水平，并对两种检测方法的结果进行比较。方法 应用CLIA及ELISA法同时测定97例健康人群(NC组)、57例Graves病(GD组)、69例桥本甲状腺炎(HT组)及73例亚急性甲状腺炎(SAT组)患者血清中的25(OH)D3水平，同时检测四组人群中的血钙、血磷水平及甲状腺功能相关指标。结果 CLIA法及ELISA法检测结果均显示，四组甲状腺相关疾病患者血清间25(OH)D3水平差异存在统计学意义，两两组间比较示NC组血清中25(OH)D3的水平最高(63.46±17.28 ELISA法及57.28±16.36 CLIA法,P<0.05)，GD组大于HT、SAT组(47.26±13.63 ELISA法及46.86±11.64 CLIA法,P<0.05)。ELISA法检测的25(OH)D3值高于CLIA法，但差异无统计学意义(P>0.05)。GD及HT组中，25(OH)D3与血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)及游离甲状腺素(FT4)存在正相关性与促甲状腺激素(TSH)及抗甲状腺过氧化物酶体(TPOAb)存在负性相关，而NC组及SAT组中25(OH)D3与甲状腺功能指标间不相关。结论 与健康人群相比，甲状腺相关疾病各组患者血清中25(OH)D3水平明显降低，CLIA法及ELISA法检测25(OH)D3结果相关系数高，均适用于临床检测外中血中25(OH)D3。

酶联免疫吸附法；免疫化学发光法；25羟维生素D；甲状腺相关疾病

维生素D是一种脂溶性维生素，在肝脏25羟化酶的作用下转化为25羟维生素D[25(OH)D3]，再经肾脏中P450氧化酶的催化转化为有生物活性的1,25-二羟基维生素D[1,25-(OH)2D]。25(OH)D3为维生素D的主要运输形式，在血液中浓度高，稳定性好，半衰期长，故血清25(OH)D3浓度是评价维生素D含量的最为有效的指标[1]。维生素D在调节钙磷平衡及骨代谢平衡中的作用已为人们熟知，近期的研究发现在一些自身免疫性疾病患者中维生素D缺乏的发生率明显增加，包括多发性硬化、类风湿关节炎、1型糖尿病[2]及甲状腺相关疾病[3-4]。本研究拟采用免疫化学发光法(CLIA)及酶联免疫吸附法(ELISA)检测三种常见的甲状腺疾病Graves病(GD)、桥本甲状腺炎(HT)及亚急性甲状腺炎(SAT)患者外周血中25(OH)D3水平，分析其与血钙、血磷、甲状腺功能、甲状腺自身抗体等指标间的相关性，并对两种检测方法的结果进行对比。

1 对象与方法

1.1 研究对象 2013年12月-2015年10月在我院内分泌科就诊的患者199例，其中GD组57例，男21例，女36例，年龄(32.29±12.63)岁；HT组69例，男27例，女42例，年龄(35.62±14.36)岁；SAT组73例，男26例，女47例，年龄(31.63±14.21)岁。健康对照组(NC组)97例，男34例，女63例，年龄(33.56±8.63)岁。NC组为本院体检中心体检者，符合身体健康标准，甲状腺功能及B超检查均正常。询问病史排除恶性肿瘤，及自身免疫性疾病包括：

表1 甲状腺相关疾病组与健康对照组甲状腺指标及25(OH)D3水平比较

指标Graves病组(n=57)桥本氏甲状腺炎组(n=69)亚急性甲状腺炎组(n=73)健康对照组(n=97)血钙(mmol/L)2．34±0．322．38±0．292．30±0．262．36±0．24血磷(mmol/L)1．16±0．291．16±0．211．13±0．231．18±0．26FT3(pmpl/L)24．26±8．32∗4．21±0．87△10．06±3．84∗△▲4．73±0．63FT4(pmpl/L)68．36±14．08∗8．57±3．21∗△32．64±11．08∗△▲16．24±6．21TSH(mIU)0．01±0．12∗54．264．2．31∗△0．02±0．14∗▲1．26±0．32TPOAb(IU/ml)90．87±19．26∗1263．57±682．31∗△9．82±3．68△▲7．30±3．1625(OH)D3(nmol/L)ELISA法47．26±13．63∗36．23±18．26∗△40．26±17．21∗△63．46±17．28CLIA法46．86±11．64∗31．63±17．52∗△38．27±17．79∗△57．28±16．36注：与健康对照组相比，∗P<0．05；与Graves病组相比，△P<0．05；与桥本氏甲状腺炎组相比，▲P<0．05

系统性红斑狼疮、重症肌无力、风湿类疾病等。GD诊断标准：①有甲状腺毒症所致的高代谢症状和体征；②血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)高于正常值，促甲状腺激素(TSH)低于正常值；③甲状腺弥漫性肿大(触诊及甲状腺B超)；④摄碘率升高。HT诊断标准[5]：①HT典型临床表现；②甲状腺触诊可见弥漫性对称性肿大；③抗甲状腺过氧化物酶体(TPOAb)显著增高，促甲状腺抗体受体(TRAb)阴性。SAT诊断标准：①全身急性炎症症状；②甲状腺触诊肿大，触痛明显；B超可见低片状回声；③实验室检查血沉加快，甲状腺功能异常。所有患者均为我院内分泌科初诊，未经治疗的患者。GD、HT、SAT、 NC组间年龄、性别差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 检测方法 所有研究对象均禁食8～10 h后空腹静息状态下采集肘静脉血3～5 mL数管，3000 r/min离心10 min分离血清用以相应检测。TSH、FT3、FT4、TPOAb的测定采用化学发光免疫分析仪(罗氏Cobas 8000)。全自动生化仪(Olympus 2700)测定血钙、血磷。25(OH)D3分别采用CLIA法(西门子，ADVIA Centaur)及ELISA法测定(广州菲康生物技术有限公司，PC-002)。

2 结 果

2.1 甲状腺相关疾病组与健康对照组甲状腺指标及25(OH)D3水平比较 方差分析结果显示，四组间TSH差别有统计学意义(P<0.05)，两两比较显示HT组TSH水平高于其余三组(P<0.05)，GD、SAT组明显低于NC组(P<0.05)。GD组FT3含量显著高于其余三组(P<0.05)，SAT组FT3水平高于NC、HT组，而HT及NC组FT3水平无统计学差异。FT4水平在GD、SAT、NC、HT组中依次降低且差异均有统计学意义(P<0.05)。HT组中TPOAb含量最高，GD组次之，NC组最低，其差异均有统计学意义(P<0.05)。ELISA法检测四组25(OH)D3水平均高于CLIA法，但差异无统计学意义(P>0.05)；方差分析结果显示，四组间25(OH)D3差异有统计学意义(P<0.05)，两两组间t检验分析结果显示，NC组中25(OH)D3的值高于GD、HT、SAT组(P<0.05)，GD组高于HT、SAT组(P<0.05)， HT组低于SAT组，但差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.2 CLIA法及ELISA法检测25(OH)D3的水平与甲状腺激素水平的相关性分析 CLIA法及ELISA法所测25(OH)D3相关性良好(r=0.83,P<0.05)。经Pearson相关分析显示NC组25(OH)D3与各项研究指标均无相关性。GD组、HT组25(OH)D3与FT3、FT4呈正相关，与TSH、TPOAb负性相关。SAT组中25(OH)D3各项指标间无相关性。两种检测方法相关性分析结果一致。见表2。

3 讨 论

维生素D是人体中一种脂溶性维生素，不仅在钙磷代谢中具有重要作用，在甲状腺等疾病的发病过程中也扮演重要角色[6-8]。本研究涉及了三种常见的甲状腺疾病，包括Graves病、桥本甲状腺炎和亚急性甲状腺炎，前两者为自身免疫性疾病。目前国内外的研究已证实，维生素D通过与维生素D受体结合，调节Th1辅助细胞/Th2辅助细胞的平衡，降低B淋巴细胞的活性，从而抑制自身抗体的产生，缓解体液免疫对宿主细胞的攻击[9]。由此可见，体内维生素D的水平与甲状腺的功能直接相关相关，低维生素D水平无法限制B淋巴细胞的活性，从而延缓自身抗体对甲状腺体的攻击。因此，在HT及GD组中，血清中25(OH)D3明显低于对照组，并与甲状腺功能指标FT3、FT4正相关与TSH、TPOAb负性相关。SAT为病毒感染后引发的甲状腺炎症，关于其发病机制，除病毒感染因素等，也有学者认为其发病亦有自身免疫因素参与[10]。由于维生素D参与了机体的体液和细胞免疫，因此SAT患者存在低维生素D血症的可能性也比健康人更高，我们的结果也显示，SAT组血清中的25(OH)D3明显低于对照组。综上所述，三种类型的甲状腺疾病的发生均与低维生素D血症相关，然而低维生素D血症是甲状腺相关疾病的诱因还是结局目前尚无法定论。

25(OH)D3的检测方法主要有四种：放射免疫法(RIA)、免疫化学发光法(CLIA)、酶联免疫吸附法(ELISA)及高效液相色谱法(HPLC)[11]。HPLC法灵敏度、特异性较高，但存在设备昂贵，标本处理复杂等缺点无法在临床开展。同样，RIA法虽兼具灵敏度、特异性高的优势，也存在有放射性污染等缺点。CLIA法及ELISA法为目前临床最常用的两种检测方法，有文献比较，ELISA法的敏感性及特异性不如CLIA法。我们的研究结果显示：ELISA法的质控变异系数(CV值)高于CLIA法，在健康对照组及三组甲状腺疾病组中，ELISA法检测的结果均高于CLIA法，但两种方法差异无统计学意义。考虑到ELISA法对设备和操作要求较低，并有无污染的优势，也适用于临床检测 25(OH)D3。

血清中25(OH)D3受年龄、性别、季节、地域环境、日照时间影响较大。本研究主要检测了宜兴地区青中年甲状腺相关疾病患者群体血清中25(OH)D3中，并通过统计分析血清中25(OH)D3与甲状腺功能指标间的相关性，并对目前常用的两种25(OH)D3检测方法的结果一致性进行了比较。对于血清中25(OH)D3低于正常的GD、HT及SAT患者，可以尝试甲状腺疾病基础治疗的同时，加以补充维生素D以调节免疫[12]，为临床治疗扩展提供新的思路。

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(本文编辑：叶华珍)

214200江苏宜兴，江苏大学附属宜兴市人民医院，1.检验科，2.甲状腺乳腺外科

陈 翔, E-mail:chenxiang_1979@hotmail.com

张晶晶，汤俊明，吴黎明，等.免疫化学发光法、酶联免疫吸附法测定25羟维生素D在常见甲状腺相关疾病诊断中的应用价值[J].东南国防医药，2016,18(6):647-649.

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10.3969/j.issn.1672-271X.2016.06.024

2016-04-01；

2016-07-18)