细小病毒B19和儿童急性白血病关系的探讨

常　林，陈红兵，朱纯亮，朱　君，张雯雯



·论著·

细小病毒B19和儿童急性白血病关系的探讨

常林，陈红兵，朱纯亮，朱君，张雯雯

210009江苏南京，南京医科大学附属南京儿童医院检验科

[摘要]目的对急性白血病儿童细小病毒B19的感染及其影响进行探讨。方法回顾性分析某院2011年1月-2015年1月住院的110例急性白血病儿童的临床资料，把110例儿童分为两组：第1组：60名已接受化疗的急性白血病儿童；第2组：50例新发现的、未接受化疗急性白血病儿童; 第3组:选取100例性别、年龄均匹配的儿童为健康对照组。采用聚合酶链反应(PCR)技术检测细小病毒B19 DNA，ELISA法检测以上3组儿童的血清细小病毒B19 IgM抗体。结果①在110例患儿中，细小病毒B19 DNA和(或)IgM阳性的为61例，阳性率为55.5%；对照组均为阴性。②第1组细小病毒B19 DNA和IgM阳性率分别为28.3%和33.3%；第2组细小病毒B19 DNA和IgM阳性率分别为42.0%和52.0%。③细小病毒B19感染的急性白血病儿童贫血发生率为73.8%,无感染儿童贫血发生率为42.9%(P<0.05)； 细小病毒B19感染的急性白血病儿童血小板减少发生率为68.9%,无感染儿童血小板减少发生率为36.7%(P<0.05)。结论50%左右的急性白血病儿童存在细小病毒B19感染；新发现、未接受化疗的急性白血病儿童更容易存在细小病毒B19感染；细小病毒B19感染是急性白血病儿童红细胞系和血小板减少的重要原因。

[关键词]细小病毒B19；急性白血病；儿童

细小病毒B19是近些年来发现的一种重要病原体，可引起人类多种疾病，2～7岁的儿童是细小病毒B19的主要传染源[1]。已有文献报道患血液系统肿瘤的儿童细小病毒B19感染率较高，且该病毒可诱发慢性贫血和骨髓红细胞受抑[2]。本研究对在我院住院的急性白血病儿童进行细小病毒B19 DNA和特异性抗体细小病毒B19 IgM进行检测，以探讨急性白血病儿童中细小病毒B19的感染及其影响。

1对象与方法

1.1研究对象2011年1月-2015年1月来我院住院的110例急性白血病儿童，包括30例急性髓系白血病(acute myeloblastic leukemia, AML)儿童和80例急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia, ALL)儿童，其中男57例，女53例，年龄从1岁到14岁。将其分为两组：第1组：60例已接受化疗的急性白血病儿童；第2组：50例新发现、未接受化疗的急性白血病儿童。所有急性白血病儿童按照形态学(Morphology, M)、免疫学(Immunology, I)和细胞遗传学(Cytogenetic, C)MIC分型诊断标准[3]诊断。第3组：来本院体检健康，血常规等检查均正常的100例儿童纳入对照组，其中男52例，女48例，年龄从6个月到13岁。以上三组儿童年龄、性别等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2主要试剂和仪器细小病毒B19 DNA抽提试剂盒 (德国QIAGEN 公司)， 细小病毒B19-IgM抗体检测试剂盒(德国R-Biopharm 公司)，iCyclerIQ5 PCR仪(美国BIO-RAD公司)

1.3方法

1.3.1一般检查包括血常规、血涂片分类和骨髓细胞形态学检查。根据《全国临床检验操作规程》(第3版)判定，血液中儿童血红蛋白浓度<120 g/L为贫血，血小板计数<100×109为血小板减少。

1.3.2细小病毒B19 DNA的检测静脉抽取全血5 mL，按照说明书进行操作，采用PCR扩增法。两对引物序列如下: 5′-CTTTAGGTATAGC-CAACTGG-3′；5′-ACACTGAGTTTAC-TAGTGGC-3￣′￣；和￣5￣′￣-￣C￣A￣A￣A￣A￣G￣C￣A￣T￣G￣T￣-GAGTGAGG-3￣′￣；￣5￣′￣-￣C￣C￣T￣T￣A￣T￣A￣A￣T￣G￣G￣T￣-￣G￣C￣T￣C￣T￣G￣G￣G￣-￣3′(上海申能博彩生物有限公司合成)。细小病毒B19阳性对照DNA为东南大学病原微生物系馈赠。扩增产物在琼脂糖凝胶中电泳，EB染色，紫外线灯下观察结果。

1.3.3细小病毒B19 IgM抗体的检测操作按试剂盒说明书进行。

2结果

110例急性白血病儿童中两组共38例细小病毒B19 DNA阳性,阳性率34.5%(38/110)； 共46例细小病毒B19 IgM阳性,阳性率41.8%(46/110)；对照组100例均为阴性,差异有统计学意义(P<0.05，表1)。110例中有细小病毒B19感染的患病儿童为61例，阳性率为55.5%(61/110)，其中23例单独的B19 IgM阳性，15例单独的B19 DNA阳性，还有23例儿童B19 IgM和B19 DNA均为阳性； 49例未感染细小病毒B19。

回顾性分析患病儿童的血常规，发现61例细小病毒B19感染的患病儿童中，45例在检测前7 d～6个月出现明显的、进行性面色苍白,贫血发生率73.8%；22例长达10 d～22个月的B19 DNA阳性,连续动态监测发现，血红蛋白维持在42～90 g/L持续1～18个月。而49例未感染细小病毒B19患儿中21例贫血,贫血发生率42.9%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。细小病毒B19感染的急性白血病儿童血小板减少发生率为68.9%,在检测前7 d～6个月血小板计数在(10～80)×109/L之间；细小病毒B19阴性患病儿童血小板减少发生率36.7%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。

3讨论

2015年焦丽等[4]证实了近1/3的恶性肿瘤患儿存在B19感染，儿童血液系统肿瘤更易发生B19感染。Zaki等[5]研究表明，细小病毒B19感染是急性白血病儿童血细胞减少的重要原因，甚至细小病毒B19感染还影响化疗的疗效。细小病毒B19感染亦与肝脾及淋巴结肿大、红细胞系统受抑制、淋巴细胞增殖均有关联，而且细小病毒B19感染也许是急性白血病一项重要的发病机制。本组研究中， 50%左右的急性白血病儿童存在细小病毒B19感染,多数伴有不同程度的贫血; 22例细小病毒B19感染儿童持续时间长达10 d～22个月,并同时患有慢性贫血亦达1～18个月。De Maria等[6]认为，受感染的红细胞成为吞噬细胞的靶细胞，可能是本病发生的机理之一。本研究中感染儿童的血小板减少发生率也明显高于未感染儿童，这与相关研究结果[7-8]相似。恶性肿瘤及化疗均可造成免疫抑制,这可能是儿童易感染细小病毒B19的一个原因，化疗导致的免疫抑制或反复地输血亦可能造成了细小病毒B19的持续性感染[9-10]。本研究还发现,有6例化疗前是阴性,而化疗期间检出了细小病毒B19 DNA。有研究表明，亚临床的免疫缺陷患者伴随细小病毒B19感染可能导致白血病的发生，或是细小病毒B19感染可能促进克隆样增生[11]。但细小病毒B19是否是儿童急性白血病的致病因素，还有待进一步的科学考证。

某些免疫缺陷或抑制者，有时缺乏可检测到的特异性抗体反应，因此一般情况下，若仅依据细小病毒B19 IgM和IgG检测结果，判断细小病毒B19感染尚有一定的局限性，因此对于细小病毒B19病毒感染诊断最好结合病毒DNA检测。根据之前的报道，有检测到单独的细小病毒B19 IgM阳性和单独的B19 DNA阳性[12]。本研究检测出23例单独的细小病毒B19 IgM阳性，15例单独的细小病毒B19 DNA阳性，提示采用两种方法检测细小病毒B19感染的必要性。

综上所述，不管有无进行过化疗，细小病毒B19在急性白血病儿童中具有较高的感染率，细小病毒B19感染与急性白血病发病可能具有相关性，并可能加重急性白血病的某些临床症状，值得进一步探讨，以明确细小病毒B19感染与急性白血病的发病关系、临床特征及其预后。

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(本文编辑：张仲书；英文编辑：王建东)

Relationship between human parvovirus B19 and acute leukemia in child patients

CHANG Lin,CHEN Hong-bing, ZHU Chun-liang,ZHUJun,ZHANGWen-wen.

ClinicalLaboratory,NanjingChildren′sHospitalAffiliatedtoNanjingMedicalUniversity,Nanjing,Jiangsu210009,China

[Key words]parvovirus B19; acute leukemia; children

[Abstract]ObjectiveTo study the condition of B19DNA infection in child patients with acute leukemia and the correlation between B19 infection and acute leukemia. Methods110 cases of acute leukemia from January 2011 to January 2015 were analyzed by the method of retrospective study. Two groups were included: Group Ⅰ comprised 60 children with acute leukemia receiving chemotherapy and Group Ⅱ comprised 50 children with recently diagnosed acute leukemia. Serum parvovirus B19 IgM were investigated by enzyme-linked immunosorbant assay and the virus DNA was sought by polymerase chain reaction assay in 110 cases of acute leukemia and 100 cases of healthy children. Results①The positive rate of B19 DNA and/or B19 IgM in acute leukemia group was 55.5% (61/110) and the control group was negative. ②Viral DNA was found in 28.3% and B19 IgM was found in 33.3% of Group I patients; Viral DNA was found in 42.0% and B19 IgM was found in 52.0% of Group Ⅱ. ③There was significant difference in incidence of anemia between B19 positive and negative children with acute leukemia. The former was 73.8%, the latter was 42.9%. There was significant difference in incidence of thrombocytopenia between B19 positive and negative children with acute leukemia. The former was 68.9%, the latter was 36.7%. ConclusionAbout half of the children with acute leukemia have been infected by B19. Children with recently diagnosed acute leukemia are more easily infected by parvovirus B19. Parvovirus B19 infection is an important cause of cytopenia in children with acute leukemia.

基金项目：南京医科大学科技发展基金资助课题(2013NJMV103)

[中图分类号]R733.71

[文献标志码]A

doi：10.3969/j.issn.1672-271X.2016.02.019

(收稿日期：2016-01-12；修回日期：2016-02-17)

引用格式：常林，陈红兵，朱纯亮,等.细小病毒B19和儿童急性白血病关系的探讨[J].东南国防医药，2016,18(2):171-173.