超声引导下穿刺细胞检测Galectin-3和CK 19在良、恶性甲状腺滤泡性肿瘤的表达差异

贾丽琼，潘炯，李小强

（上海市第一人民医院宝山分院，上海200940）

超声引导下穿刺细胞检测Galectin-3和CK 19在良、恶性甲状腺滤泡性肿瘤的表达差异

贾丽琼，潘炯，李小强

（上海市第一人民医院宝山分院，上海200940）

目的：探讨超声引导下穿刺细胞检测Galectin-3和CK19在良、恶性甲状腺滤泡性肿瘤的表达差异。方法：选取甲状腺滤泡状癌（FTC）患者34例分为FTC组，甲状腺滤泡性腺瘤（FA）40例分为FA组。检测患者的超声引导下细针穿刺细胞学检查（FNAC）标本和病理组织的Galectin-3、CK19表达，分析两组FNAC标本的Galectin-3、CK19表达情况；以病理组织的Galectin-3和CK19表达情况为标准，分析FNAC标本表达Galectin-3和CK19的敏感性、特异性和准确性。比较Galectin-3、CK19与FTC患者的临床参数资料的关系。结果：Galectin-3、CK19在FTC组和FA组的表达有显著差异（Galectin-3：Z=－4.478，P=0.000；CK19：Z=－2.307，P=0.021）；FNAC标本检测CK19、Galectin-3表达的敏感性、特异性、准确性分别为85.7%、76.3%、81.3%，和84.7%、91.2%、87.5%。Galectin-3的表达在FTC患者的不同性别、年龄、肿瘤直径之间无明显差异（P＞0.05）；而Galectin-3阳性率在有淋巴结转移（93.3%）和TNMⅢ+Ⅳ分期（100%）的患者比无淋巴结转移（63.2%）和TNMⅠ+Ⅱ分期（66.7%）患者的高，差异有统计学意义（分期：T=4.359，P=0.037；淋巴结转移：T=4.242，P=0.039）；CK19的表达在这些临床参数之间均无明显差异（P＞0.05）。结论：FTC患者的FNAC标本检测Galectin-3和CK19的表达明显高于FA患者，可为临床工作用鉴别诊断FTC和FA提供一定的协助作用。

甲状腺肿瘤；半乳糖凝集素3；活组织检查，细针；超声检查，介入性

甲状腺滤泡状癌（FTC）是甲状腺癌中除乳头状癌外最常见的恶性肿瘤[1]。传统的诊断FTC方法主要依据为肿瘤包膜的穿透和血管侵犯，但术前的穿刺活检即使多点取材也无法观察到整个肿瘤的包膜和血管情况[2]。而且分化良好的FTC与甲状腺滤泡性腺瘤（FA）在组织学上更相近，难以鉴别[2]。因此，为提高术前对FTC的诊断，较多学者着眼于寻找合适的分子标记物协助鉴别诊断FTC。Galectin-3的表达与细胞凋亡受阻以及恶性肿瘤的发展密切相关，其表达是鉴别FTC和FA的一个良好指标[3]。CK19是一种细胞角化蛋白，是诊断甲状腺良恶性肿瘤的重要指标，对滤泡性病变的良恶性也有一定的区别作用[4]。但这些研究较多的是在组织基础上检测Galectin-3和CK19的表达，不如超声引导下细针穿刺细胞学检查（FNAC）方便快捷[5]。但是关于在FTC和FA患者的FNAC标本中检测Galectin-3和CK19的表达是否有明显差异，具有组织检测般能辅助鉴别诊断FTC和FA的研究较少，使得临床上进行FNAC而非穿刺活检的患者是否进行Galectin-3和CK19表达的检测缺少依据。因此，本研究对比分析FTC和FA患者的FNAC标本的Galectin-3和CK19表达情况，评估两者是否对FTC的术前诊断有一定的价值，为应用FNAC标本进行分子标记物协助术前诊断提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2011年6月—2015年6月在我院进行甲状腺手术切除的患者350例，纳入符合本研究要求的甲状腺滤泡性癌34例（共38个结节）分为FTC组，甲状腺滤泡性腺瘤40例（共42个结节）分为FA组。FTC组有男11例，女23例，年龄23～74岁，平均（48.43±8.83）岁；FA组有男8例，女32例，年龄22～71岁，平均（47.22±9.52）岁。纳入病例均符合以下要求：①患者在术前均进行了FNAC检测，穿刺标本保存完整，可进行Galectin-3和CK19表达的检测；②患者切除结节术后均进行了病理检查，确诊为FTC或FA，并且进行了Galectin-3和CK19表达的检测；③患者均是在本院初诊并接受手术治疗，无其他内分泌治疗或放化疗；④无合并其他恶性肿瘤。本研究经医院伦理会同意，所有入选患者了解研究意义及签署知情同意书。

1.2 方法

患者进行超声检查，确定穿刺结节。患者取仰卧头低位，侧向非穿刺侧以暴露穿刺部位。消毒局麻后，在超声引导下，细胞针接10mL的注射器约呈45°的角度刺入皮肤，来回针栓，以2～3mL的负压提插不同的方向5次，将抽吸物进行涂片，固定。穿刺时应注意取到超声可疑征象处，如微钙化。送病理科进行CK19和Galectin-3检测、读片。结节组织检测Galectin-3和CK19的表达采用了SP法。组织标本均经福尔马林固定后进行石蜡包埋、切片、脱蜡、水化步骤后由病理组织的副主任医师进行读片，判断染色结果。Galectin-3主要在细胞质中表达，细胞核以及细胞膜也可见有着色；CK19主要在细胞质中表达。表达强度由两名副主任医师独立观察评分，评分依据见表1，兼顾染色强度和阳性表达范围，由两者得分相乘做最终判断：0分为阴性（-），1～2为（+），3～6为（++），6分以上为（+++）。

表1 Galectin-3和CK19染色评分方法

1.3 评价指标

根据以上介绍的方法对所有患者的病理组织和FNAC标本进行染色结果的评价，统计FTC和FA患者的Galectin-3、CK19的表达情况，分析FNAC标本的表达在两组患者之间是否有差异；以病理组织的Galectin-3和CK19表达情况为标准，分析FNAC标本表达Galectin-3和CK19的敏感性、特异性和准确性。对Galectin-3和CK19与FTC患者的临床参数进行比较，包括性别、年龄、肿瘤直径、淋巴结转移、TNM分期。

1.4 统计学方法

实验数据应用SPSS 19.0软件进行统计分析处理，采用Mann-Whitney秩和检验对FTC组和FA组的FNAC标本的Galectin-3和CK19表达情况进行比较；采用χ2检验分析FNAC标本的Galectin-3和CK19表达在FTC患者的不同性别、年龄、肿瘤直径、TNM分期和有无淋巴结转移之间是否有差异。

2 结果

2.1 Galectin-3、CK19的表达情况

Galectin-3、CK19在FTC组和FA组的表达情况详见表2。采用Mann-Whitney秩和检验对两组的FNAC标本的Galectin-3和CK19表达情况进行比较，可得Galectin-3的表达在两组之间的差异有统计学意义（Z=－4.478，P=0.000）；CK19的表达在两组之间的差异也有统计学意义（Z=－2.307，P=0.021）。

表2 Galectin-3、CK19在FTC组和FA组的表达情况（例）

2.2 诊断情况

Galectin-3、CK19在FTC和FA中病理组织的免疫组化检测见图1，2。以病理组织中表达的Galectin-3、CK19为标准，分析FNAC标本检测CK19表达的的敏感性、特异性、准确性分别为85.7%、76.3%和81.3%，见表3。FNAC检测Galectin-3的敏感性、特异性、准确性分别为84.7%、91.2%和87.5%，见表4。

图1 甲状腺滤泡状癌。图1a：CK19（+）；图1b：Galectin-3（+）。Figure 1.Follicular thyroid carcinoma.Figure 1a:CK19(+);Figure 1b:Galectin-3(+).

图2 甲状腺滤泡性腺瘤。图2a：CK19（+）；图2b：Galectin-3（+）。Figure 2.Follicular adenoma.Figure 2a:CK19(+);Figure 2b:Galectin-3(+).

2.3 临床参数

Galectin-3的表达在FTC患者的不同性别、年龄和肿瘤直径之间无明显差异（P＞0.05）；而有淋巴结转移和TNMⅢ+Ⅳ分期的患者比无淋巴结转移和TNMⅠ+Ⅱ分期患者的Galectin-3阳性率高（P＜0.05）；CK19的表达在不同性别、年龄、肿瘤直径、TNM分期和是否有淋巴结转移的FTC患者之间均无明显差异（P＞0.05）。见表5。

表3 病理组织和FNAC的CK19的表达情况（结节）

表4 病理组织和FNAC的Galectin-3的表达情况（结节）

表5 CK19、Galectin-3与FTC患者的临床参数的关系

3 讨论

甲状腺恶性肿瘤是内分泌系统中最常见的恶性肿瘤，多见于中年女性患者[6-8]。其中甲状腺乳头状癌发病率最高，但其预后良好，FTC的发病率仅次于甲状腺乳头状癌但预后较差，而且其缺乏特殊的组织结构和细胞形态，镜下可见不同程度分化的滤泡，而FA是一种包膜完整的良性肿瘤，镜下呈滤泡分化，因此部分FTC由于滤泡分化良好，与腺瘤之间难以区分。依据肿瘤包膜的穿透、血管侵犯或远处转移来诊断FTC具有一定局限性，也可因取材、切片等因素导致误诊、漏诊[9-11]。致使部分良性肿瘤患者接受了恶性肿瘤患者才需要的手术或是部分分化良好的FTC误诊为FA，导致FTC患者未能得到及时合适的治疗[12]。因此研究甲状腺滤泡上皮来源的肿瘤发病机制为国内外研究人员所重视，希望能寻找到合适的辅助手段来协助鉴别诊断FTC。Galectin-3是植物血凝素家族的一员，是一种半乳糖衔接蛋白，主要存在于胞浆，具有调节细胞的增殖、凋亡等功能，与肿瘤的进展密切相关[13-14]。CK19是中间丝蛋白家族的一员，是一种角质蛋白，在细胞的完整性维持、细胞凋亡以及信号传递等方面具有重要作用[4]。以往采用组织进行Galectin-3和CK19表达的检测，已证明在FTC和FA之间有显著差异。但由于活检可能引起大出血等风险，现术前逐渐采用FNAC取代穿刺活检进行术前的检查。

在本研究中，发现FNAC标本中Galectin-3和CK19在FTC与FA中均可见有表达，且两组之间的表达情况有显著差异，这与以往研究显示在甲状腺恶性肿瘤中，Galectin-3和CK19的表达较强和范围较大相一致[15-16]。在本研究中Galectin-3在FTC有强阳性（+++）表达，而FA中无一例出现强阳性（+++）表达，表明Galectin-3的强阳性（+++）表达可能对于FTC的诊断具有较好的参考价值[17]。为明确FNAC标本检测Galectin-3和CK19表达是否能良好反映结节中Galectin-3和CK19表达的情况，以病理组织检测Galectin-3和CK19表达为标准，分析FNAC标本检测的敏感性、特异性和准确性，结果显示检测CK19和Galectin-3的敏感性、特异性、准确性分别为85.7%、76.3%、81.3%和84.7%、91.2%、87.5%。可见FNAC标本能良好的反映Galectin-3和CK19的表达情况。因此我们认为应用甲状腺滤泡状肿瘤的FNAC标本进行Galectin-3和CK19的表达检测，表达阳性强度较大，尤其强阳性的应更多考虑是否为FTC。

为进一步分析检测Galectin-3的表达是否较CK19更能反映患者的病情相关信息，我们比较了两者与患者临床参数的关系，发现有淋巴结转移和TNMⅢ+Ⅳ分期的患者的Galectin-3阳性率较高，提示Galectin-3的表达与患者的病情进展有一定的联系。因此，我们推测在FTC和FA的鉴别诊断中，Galectin-3较CK19有更好的辅助诊断价值。考虑是因为Galectin-3与细胞的多种调控活动密切相关，对恶性肿瘤细胞的凋亡、转化或是生长有一定的促进作用，且有助于肿瘤新血管的形成，对肿瘤的转移和浸润有促进作用，因此其与FTC的淋巴结转移和TNM分期之间具有一定的相关性[17]。而CK19的表达可能由于其在FTC和FA的诊断价值较弱，以及其可能对于细胞的主要作用在于细胞骨架构建，而与FTC的临床参数之间无明显的相关性[18-19]。

本研究纳入的相关病例数量不多，可能对于Galectin-3和CK19在FTC的诊断价值未能较全面进行比较；有待进一步分析更多的临床参数与Galectin-3和CK19表达的相关性。而且Galectin-3与FTC的淋巴结转移以及肿瘤分期之间的作用及其具体的作用机制有待进一步研究探讨。

综上所述，Galectin-3和CK19在FTC患者的FNAC标本中的表达显著高于FA患者，可为临床工作用鉴别诊断FTC和FA提供一定的协助作用。

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Different expression of Galectin-3 and CK 19 in benign and malignant follicular thyroid tumors by ultrasound-guided fine needle aspiration

JIA Li-qiong,PAN Jiong,LI Xiao-qiang
(Shanghai First People’s Hospital of Baoshan Branch,Shanghai 200940,China)

Objective:To explore the different expression of Galectin-3 and CK19 in benign and malignant thyroid follicular tumors by ultrasound-guided biopsy.M ethods:Thirty-four patients with follicular thyroid carcinoma(FTC)and 40 patients with follicular adenoma(FA)were divided into FTC group and FA group respectively.The expression of Galectin-3 and CK19 in the specimens of ultrasound-guided fine needle aspiration cytopathology and in the pathological tissue were detected,analyzed and compared.The expression in the pathological tissue was considered as the gold standard,and then the sensitivity,specificity and accuracy of FNAC specimens to determine Galectin-3 and CK19 were analyzed.The relationship between Galectin-3,CK19 and clinical parameters of patients with FTC were also compared.Results:The expression of Galectin-3 and CK19 between FTC group and FA group were significantly different(Galectin-3：Z=－4.478,P=0.000,CK19：Z=－2.307,P=0.021).The sensitivity,specificity,and accuracy of Galectin-3 and CK19 in FNAC specimens were 85.7%,76.3%and 81.3%plus 84.7%,91.2%and 87.5%.The Galectin-3 expression showed no significant difference between the gender,age and tumor size in FTC patients(P＞0.05).The positive rate of Galectin-3 in patients with lymph node metastasis(93.3%)and TNMⅢ+Ⅳ(100%)stage were significantly higher than that in patients without lymph node metastasis(63.2%)and TNMⅠ+Ⅱstage(66.7%).The difference was statistically significant(Stages:T=4.359,P=0.037;lymph node metastasis:T=4.242,P=0.039).The expression of CK19 had no significant difference between these clinical parameters(P＞0.05).Conclusion:The expression of Galectin-3 and CK19 in FNAC specimens from FTC patients was significantly higher than that in patients with FA,which could help to differentiate FTC and FA in clinics.

Thyroid neoplasms;Galectin 3;Biopsy,fine-needle;Ultrasonography,interventional

R736.1；R445.1

A

1008－1062（2017）01－0019－04

2016-05-03；

2016-06-08

贾丽琼（1969-），女，上海人，副主任医师。E-mail：jlq39222@126.com

贾丽琼，上海市第一人民医院宝山分院超声科，200940。E-mail：jlq39222@126.com

上海市宝山区区科委基金（14-E-13）。