禽四型腺病毒CAR 受体的鉴定

禽腺病毒（fowl adenovirus）感染引起的疾病最早于1987 年在巴基斯坦的安卡拉地区被发现，因此也称作“安卡拉病”，之后在中国、韩国、日本、印度、美国及加拿大等不同国家及地区均有发现。FAdV-4 可通过呼吸道等途径水平传播，也可以通过鸡胚垂直传播，给养殖业带来严重的经济损失。同时，该病的感染谱较为广泛，除了可以感染肉鸡、肉种鸡及蛋鸡外，还可以感染鸭和鹅，对我国家禽乃至水禽的绿色健康养殖构成巨大威胁。病毒感染的第一步是吸附靶细胞，决定FAdV-4 进入细胞的重要受体分子仍未完全明确。

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽免疫抑制病创新团队近期发表在《Emerging Microbes & Infections》杂志的一项研究对于FAdV-4 受体进行了一系列筛选与鉴定。该团队发现CAR 分子（coxsackie and adenovirus receptor）可以促进病毒进入靶细胞肝细胞，并且可以使FAdV-4 获得吸附非易感细胞的能力。

该团队以FAdV-4 HLJFAd15 株及鸡肝癌细胞系（LMH 细胞）为主要研究对象，首先筛选了介导腺病毒入侵的病毒蛋白，将带Fc 标签的腺病毒的刺突蛋白fibre1 和fibre2 进行可溶性表达，将这两种蛋白分别结合LMH 细胞后加入FAdV-4，检测病毒进入情况，可见fibre1 蛋白预处理的LMH 细胞可以有效封闭病毒进入细胞，而fibre2 则无效。抗体封闭实验也得到了同样结果。说明fibre1 介导FAdV-4 进入细胞。

接下来利用质谱实验筛选与fibre1 蛋白互作的LMH 细胞膜蛋白，筛选CAR 分子作为候选受体分子。为了进一步确认CAR 蛋白在病毒复制过程中的作用，通过siRNA干扰实验及共聚焦实验进一步确定CAR 促进病毒复制。将CAR siRNA 转染至LMH 细胞后接毒，可见CAR干扰后显著抑制FAdV-4复制。

为了探索CAR 影响病毒复制的具体过程，将CAR 在LMH 细胞过表达后进行病毒吸附实验，共聚焦结果可见CAR 过表达组部分病毒进入细胞，并与CAR 共定位，而对照组病毒则全部定位在细胞膜上，说明CAR 影响病毒入侵过程。

为了进一步确认CAR 在病毒入侵过程的作用，进行抗体封闭及蛋白封闭实验，结果可见，不同浓度的CAR 可溶性蛋白及抗CAR 抗体均可以抑制FAdV-4 感染LMH 细胞，该现象在一定范围内具有浓度依赖性。接下来通过受体重建实验进一步验证，将CAR 过表达在FAdV-4 非允许细胞293T 或PK-15 细胞上，然后感染FAdV-4，共聚焦实验结果可见CAR 过表达组病毒与CAR 共定位在非易感细胞的细胞质中，而对照组则无病毒感染。qPCR 结果表明，CAR 过表达组较对照组病毒滴度显著提高。

2015 年，血清4 型禽腺病毒（Fowl adenovirus serotype 4，FAdV-4）在中国多个省份暴发并广泛流行，该病毒表现出突发性、高感染率（30%～100%）和高死亡率（最高可达100%）。FAdV-4 感染可导致家禽急性死亡，剖检可见典型的心包积液及包涵体肝炎症状，给养禽业造成新的威胁。该研究证实了CAR 是FAdV-4 的功能性受体，表明该分子在病毒复制中的重要作用，为阐明FAdV-4 的致病机制，以及疫苗、药物靶点的筛选提供了重要的理论依据。