2009年我国部分猪群输血传播病毒感染情况调查

訾占超，夏应菊，韩 雪，汪葆玥，遇秀玲，翟新验，田克恭，倪建强

(中国动物疫病预防控制中心，北京100193)

输血传播病毒(Torque teno virus，TTV)是于1997年从日本肝炎患者血清中首次分离鉴定的一种新病毒[1]。TTV为无囊膜的单股环状负链DNA病毒，目前归类于圆环病毒科指环病毒属[2]。TTV具有种属专一性，不同物种间其核酸同源性较低[3]。TTV可通过输血、血液制品、性行为、粪口途径等方式传播，血液、唾液、粪便、乳汁、胆汁均可带毒。对不同人群TTV的流行病学调查结果显示，一般人群的阳性率多在10%以上，呈无症状携带[4]。除感染人外，TTV还广泛存在于各种动物体内[5]。猪TTV呈全球性分布流行。猪感染TTV后，一般不表现临床症状，但有研究表明，TTV在断奶后仔猪多系统综合征(PMWS)和猪皮炎肾病综合征(PDNS)中可能会协同其他病毒致病[6]。近几年，TTV因其普遍存在和广泛的宿主范围等特点而备受关注。

本研究通过分析分布于中国大陆29个省的猪血清样品，比较全面地反映了当前我国猪群中TTV的流行状况及其与地区性分布和样品来源的关系。

1 材料和方法

1.1 临床样品来源 2009年11月采自中国大陆的1990份生猪血清样品。采样范围为除内蒙古自治区和青海省外的29个省市自治区29个县内的32个规模场、48个行政村、23个屠宰场。

1.2 主要试剂 TaqDNA聚合酶等购自TaKaRa公司，Trans2K Plus DNA Marker购自全式金公司，核酸提取试剂盒购自TanBead公司。

1.3 DNA模板制备 采用KingFisher公司96孔核酸提取仪进行核酸提取，具体方法参见仪器说明书。

1.4 引物设计 分别针对TTV的两个型设计两对引物。TTV1上游引物5'-CTCGCTTCGCTCGCACCA CG-3'， 下 游 引 物 5'-GCATAAACTCAGCCATTCG G-3'，扩增TTV1片段长度约293 bp。TTV2上游引物 5'-AGGGTTCACCGGAAGGGCTGC-3'，下游引物5'-GCCCGATAGGCCCCTTGACTC-3'，扩增 TTV2片段长度约352 bp。引物由上海英潍捷基公司合成。

1.5 PCR反应体系 总体系20 μL，PCR扩增条件为：95℃ 5 min：94℃ 30 s、58℃ 40 s、72℃1 min，35个循环；72℃10 min。PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测。

2 结果

2.1 样品的PCR检测结果 利用TTV1和TTV2双重引物对采集样品进行PCR扩增，结果显示，部分样品能扩增出约为300 bp的TTV1片段，部分能扩增出约350 bp的TTV2片段，部分样品能同时扩增出约300 bp和350 bp的片段(图 1)。 1990份检测样品中，TTV1阳性样品1112份，TTV2阳性样品655份，TTV1和TTV2同时为阳性的样品506份；总TTV阳性的样品数为1261份。

2.2 猪TTV地区性分布 对各省的样品进行双重PCR检测结果进行统计，分别计算出各省和各地区的 TTV1、TTV2、TTV1和 TTV2、TTV1或 TTV2感染率(表1)。各省TTV感染率示意图图2。各地区TTV感染率示意图见图3。

表1 我国各省各地区猪TTV感染率Table 1 The prevalence of swine TTV in each province and region

2.3 样品来源与TTV流行率 采自32个规模场的568份样品中发现TTV1阳性样品327份，TTV2阳性样品162份，TTV1和TTV2阳性样品128份，TTV1或TTV2阳性样品361份。采自48个行政村散养户的734份样品中发现TTV1阳性样品394份，TTV2阳性样品248份，TTV1和TTV2阳性样品185份，TTV1或TTV2阳性样品457份。采自23个行政村散养户的688份样品中发现TTV1阳性样品391份，TTV2阳性样品245份，TTV1和TTV2阳性样品193份，TTV1或TTV2阳性样品443份。规模场、散养户、屠宰场猪TTV感染率，见表2及图3。

3 讨 论

猪群的TTV感染在世界上许多国家均有报道[7]。养殖场(户)的猪 TTV具有较高的感染率[8]。对PMWS发病仔猪TTV的调查分析发现，患PMWS仔猪比未患PMWS的仔猪其TTV2感染率明显较高[9]，TTV1和猪圆环病毒2型(PCV2)协同作用可能会引起猪的PMWS[10]；单独感染TTV或猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)均不出现皮肤和肾脏的损伤，而两种病毒混合感染猪常表现为皮炎肾病综合征(PDNS)[11]。PMWS和PDNS的主要病因是PCV-2及PRRSV混合感染，而我国PCV-2感染率约为91.1%[12]，2009年的PRRSV高致病株感染率为86%[13]，均处于较高的感染水平。本研究发现我国猪TTV的也处于高感染率水平，TTV是否是协同PCV-2和PRRSV造成我国PMWS和PDNS高发的主要因素需要进一步研究。

表2 样品来源与猪TTV感染率Table 2 The prevalence of TTV and sample source

本研究通过双重PCR检测发现，我国猪群TTV的总体感染率为63.37%(1261/1990)，其中TTV1感染率为55.88%(1112/1990)，TTV2为 32.91%(655/1990)，TTV1和TTV2双重感染率为25.43%(506/1990)。本研究中我国猪群的TTV感染率和其他报道的85.66%(221/258)和44.93%(62/138)有所不同[12,14]。考虑到采样时间、地点、样品类型、实验技术、样品量、样品覆盖面等影响因素，本研究的数据具有较强的代表性，总体上来说我国猪群的TTV感染率处于高水平。就地区性分布而言，TTV1的感染率华北、华东、华中、东北的数值比较接近，以华北地区为最高；TTV2感染率以东北地区最高；TTV1和TTV2双重感染而言，东北地区最高；TTV1或TTV2的感染率也以东北地区最高；而西北地区的TTV感染率最低。我国屠宰场猪（出栏猪）的TTV感染率与规模场、散养户猪的感染率的差异并不显著，推测管理模式和猪龄并不是TTV感染率高低的关键因素。TTV感染率高低可能与猪在TTV环境中暴露时间有关。

本研究发现我国猪群TTV的感染率已经处于较高的水平，应该将高感染地区TTV分子流行病学调查持续进行，分析TTV与该地区猪疫病之间的关系，监测其是否有基因突变，毒力增强的可能性。同时也应对猪TTV的功能基因及结构蛋白进行研究，以期揭示TTV的感染机制及其协同致病机理。

[1]Nishizawa T,Okamoto H,Konishi K,et al.A novel DNA virus(TTV)associated with elevated transaminase levels in posttransfusion hepatitis of unknown etiology[J].Biochem Biophys Res Commun,1997,241:92-97.

[2]Mushawar J K,Erker J C,Muerhof A S,et al.Molecular and biophysical characterization of TT virus:evidence of a new virus family infecting humans[J].PNAS.USA.1999,96(6):3177-3182.

[3]Muljono D H，Nishizawa T.Molecular epidemiology of TT virus(TTV)and characterization of two novel TTV genotypes in Indonesia[J].Arch Virol,2001,146(7):1249-1266.

[4]姜海艳，关伟君，蒋宏伟.TTV病毒的研究现状[J].中国社区医师.2007.9(10)：4-7.

[5]Leary T P,Erker J C.Improved detection systems for TT virus reveal high prevalence in humans,non-human primates and farm animals[J].J Gen Virol,1999,80:2115-2120.

[6]刘红，孙泉云，王根龙.养猪业的潜在新威胁-TT病毒感染[J].上海畜牧兽医通讯，2009，3：53.

[7]McKeown N E,Fenaux M,Halbur P G.,et al.Molecular characterization of porcine TT virus,an orphan virus,in pigs from six different countries[J].Vet Microbiol,2004,104:113-117.

[8]Segale,J,Allan G.M,Domingo M.Porcine circovirus diseases[J].Anim Health Res Rev,2005,6:119-142.

[9]Kekarainen T,Sibila M,Segale,J.Prevalence of swine Torque teno virus in post-weaning multisystemic wasting syndrome(PMWS)-affected and non-PMWS-affected pigs in Spain[J].J Gen Virol,2006,87:833-837.

[10]Ellis J A,Allan G,Krakowka S.Effect of coinfection with genogroup 1 porcine torque teno virus on porcine circovirus type 2-associated postweaning multisystemic wasting syndrome in gnotobiotic pigs[J].Am J Vet Res 2008,69:1608-1614.

[11]Krakowka S,Hartunian C,Hamberg A.Evaluation of induction of porcine dermatitis and nephropathy syndrome in gnotobiotic pigs with negative results for porcine circovirus type 2[J].Am J Vet Res,2008,69:1615-1622

[12]王礞礞，周艳君.我国猪群中TTV的鉴定及其分子流行病学分析[J].中国预防兽医学报，2009，31(10)：751-755.

[13]杨汉春.猪主要病毒性疫病的现状与防控对策[J].今日畜牧兽医，2008，8：1-2.

[14]温立斌，何孔旺，杨汉春，等.中国猪群存在Torque Teno Virus(TTV)感染[J].江苏农业学报，2010，26(1)：85-90.