孔雀石绿光度法测定阿魏酸钠

时间：2024-09-03

孙芳芳，谭建红, 庞向东, 江虹

(长江师范学院化学化工学院，重庆 408100)

阿魏酸属酚酸类化合物，普遍存在于当归、川芎、蜂胶、酸枣仁等中药材中，它具有活血化瘀、抗血小板聚集、抗血栓形成，保护心肌，抗脂质过氧化和提高机体免疫功能等作用。临床上常用其钠盐，主要用于心、脑血管疾病和白细胞、血小板减少等的治疗。目前，测定阿魏酸钠含量的方法主要是高效液相色谱法[1 - 3]，另外也有瑞利散射法[4]、流动注射化学发光法[5]、荧光法[6]、紫外分光光度法[7]等的报道。这些方法中，有的存在仪器昂贵不易普及，或是操作繁琐、费时，不能满足急检的需要，或是灵敏度较低等缺点。而可见分光光度法操作简便、快速、有较高灵敏度，迄今未见用可见分光光度法测定阿魏酸钠的报道，因此用可见吸收光谱法研究阿魏酸钠含量的测定有一定意义。

实验发现，在pH=4.5 的酸性条件下，阿魏酸能与碱性染料孔雀石绿发生显色反应，生成具有明显正吸收峰和负吸收峰的绿色离子缔合物，最大正吸收和负吸收波长分别位于612 nm 和650 nm，其表观摩尔吸光系数分别为3.95×104L/(mol·cm)和1.20×104L/(mol·cm)，阿魏酸在一定浓度范围内与体系的吸光度呈良好的线性关系。方法用于实际样品的测定，结果满意。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

U-4100型紫外-可见-近红外分光光度计(日本，日立公司)；S20型酸度计(梅特勒托利多仪器(上海)有限公司)。

阿魏酸(FA，中国药品生物制品检定所)标准溶液：19.42 mg/L，冰箱4 ℃保存。孔雀石绿(MAG，上海标本模型厂)溶液：1.0×10-3mol/L、 1.0×10-4mol/L。B -R缓冲溶液：0.01 mol/L H3PO4、H3BO3和HAc与0.2 mol/L NaOH溶液适当混合，配成一系列不同pH 的溶液,pH用酸度计校正。所用试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。

1.2 实验方法

于10 mL具塞比色管中，准确加入2.0 mL 1.0×10-3mol/L的孔雀石绿溶液，再依次加入1.0 mL pH=4.5 B -R缓冲溶液和一定量的19.42 mg/L 阿魏酸标准溶液，用水稀释至刻度，摇匀，室温下，10 min后以试剂空白作参比，于分光光度计上，在最大正吸收或负吸收波长处用1 cm比色皿测其吸光度A。

2 结果与讨论

2.1 吸收光谱

图1 阿魏酸与孔雀石绿的吸收光谱 Fig.1 The absorption spectra of ferulic acid with malachite green1.FA (1.94 mg/L),against water; 2.MAG (2.0×10-5 mol/L),against water; 3-6.FA (0.97,1.94,2.91,3.88 mg/L)-MAG (2.0×10-4 mol/L),against reagent blank；pH=4.5.

从图1可知：阿魏酸(FA)在可见光区几乎无吸收(曲线1)，孔雀石绿(MAG)溶液在可见光区产生强烈吸收，其最大吸收波长位于616 nm(曲线2)。当在孔雀石绿溶液中加入阿魏酸溶液后，由于孔雀石绿在溶液中以阳离子形式存在，能与阿魏酸以静电引力形成疏水性的绿色离子缔合物，且在570～700 nm 范围内，产生两个大小不等的正吸收峰和一个明显的负吸收峰。最大正吸收波长位于612 nm，紫移4 nm，最大负吸收波长位于650 nm，红移34 nm。实验表明该离子缔合物在可见光区的吸光度与一定浓度范围的阿魏酸呈良好的线性关系(曲线3～6)。故正、负吸收均可用于阿魏酸钠的定量分析。

2.2 反应介质及用量的选择

室温下，考察了HAc-NaAc、B -R、Tris-HCl缓冲介质对体系吸光度的影响。结果表明：用B -R 缓冲溶液效果较好，适宜的pH范围为3.6～5.5。实验用pH=4.5 的B -R 缓冲溶液，用量以1.0 mL 为宜。

2.3 显色剂溶液浓度的选择

室温下，考察了不同浓度的孔雀石绿溶液对体系吸光度的影响。结果表明：孔雀石绿溶液在1.8×10-4～2.5×10-4mol/L浓度范围内，体系的吸光度较大，实验选用1.0×10-3mol/L 孔雀石绿溶液2.0 mL。

2.4 试剂加入顺序的影响

室温下，考察了B -R、FA和MAG在不同加入顺序时对体系吸光度的影响。结果表明：按实验方法中的试剂加入顺序最佳。

2.5 反应时间的选择

在最大正吸收或负吸收波长处，每间隔一定时间测量体系的吸光度。结果表明：室温下，阿魏酸与孔雀石绿生成的缔合物在 10 min内即可形成，且至少稳定1 h。实验选择在反应10 min后测定。

2.6 标准曲线及灵敏度

按实验方法配制标准系列溶液，在最大正吸收波长或最大负吸收波长处测定吸光度(A)，并对阿魏酸浓度(c)制作标准曲线，其线性回归方程、相关系数、线性范围及表观摩尔吸光系数ε列于表1。

表1 标准曲线相关参数

2.7 方法的选择性

在选定条件下，考察了612 nm波长处某些常见物质对测定1.94 mg/L阿魏酸的影响。结果表明以下物质不干扰测定：100倍的葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、甘氨酸、谷氨酸、L-组氨酸、L-色氨酸、L-亮氨酸、NaCl、KCl；20倍的KNO3、Na2SO3、Na2S2O3、Mg(NO3)2、Pb(NO3)2、CaCl2、BaCl2；5倍的KBr、尿素、抗坏血酸。可见，方法具有良好的选择性。