洗发乳中羟苯甲酯和羟苯丙酯的含量测定

曾立华，李其华，刘利民，雷春华，谷雪梅

（湖南师范大学，湖南 长沙 410081）

对羟基苯甲酸酯即尼泊金酯是国际上公认的广谱性高效安全的食品防腐剂，广泛用于食品、化妆品及医药等行业[1-3]。

最近以来，对羟基苯甲酸酯受到了科研工作者的特别关注，因为 Routledge等首次发现对羟基苯甲酸酯具有雌激素活性[4]，英国研究：苯甲酸酯类（parabens）可能增加致癌危险，这一发现以全新的方式对原有的对羟基苯甲酸酯具有低毒性的旧观点提出了挑战[5]。目前对于食品和药品中尼泊金酯的含量测定方法介绍的文献并不多[6]。本文采用高效液相色谱法来测定复方硝酸益康唑乳膏尼泊金甲酯、丙酯的含量，准确性高，操作简便，结果令人满意。

1 实验部分

1.1 实验试剂与仪器

对羟基苯甲酸甲酯、丙酯对照品，色谱纯甲醇、二次蒸馏水，洗发乳（广州市迪彩化妆品有限公司）

高效液相色谱仪 大连江申分离科学技术公司 LC-10UV；10μL微量进样器；PL303电子分析天平，玛瑙研钵

1.2 色谱条件

色谱柱 Hypersil C18-ODS 5 um 编号：JS-0706-0094 型号：250x4.6mm 流动相：甲醇：水=70：30（体积比），流速为1 um /min，柱温25℃，进样量10uL，检测波长为254 nm。

1.3 标准溶液与样品溶液的配制

标准溶液：精密称量分析纯的尼泊金甲酯0.0763g、尼泊金丙酯 0.0922g，配成浓度均为0.0100mol/l的混合溶液。用移液管或微量注射器从储备液A中分别移取5mL、2ml、0.5ml、0.2ml、0.05ml至 50ml容量瓶中并用色谱纯甲醇稀释至刻度，得到尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的系列标准溶液。

样品溶液的制备：称取1.0080g发乳于100mL烧杯中，加50mL色谱纯甲醇搅拌使之溶解，离心然后静置半小时后，用移液管25mL上清液于50mL容量瓶中，再用色谱纯甲醇稀释至刻度。

1.4 线性关系考察

用微量进样器分别吸取已配制好的标准溶液10uL进样，按色谱条件进行HPLC分析，制作标准曲线。

2 结果与讨论

2.1 重复性、分离度、线性关系

色谱适用性试验通常包括理论塔板数、分离度、重复性和拖尾因子等指标。其中重复性和分离度是系统适用性中更具实用意义的参数。

实验表明，尼泊金甲酯、丙酯进样的浓度分别为 1.0×10-3 mol/L 、4.0×10- 4 mol/、1.0×10-4 mol/L 、4.0×10-5 mol/L 、1.0×10-5 mol/L,进样的体积为10uL时，其峰面积（A）与质量（m）呈线性关系，回归方程分别为Y=3E+10x+ 230030，r=0.99997；Y=3E+10x+ 91174， r=0.9995。结果表明对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯在1.0mmol/L—1.0×10-2mmol/L浓度范围内，线性关系良好。

表1 尼泊金甲酯的测定分析数据

表2 尼泊金丙酯的测定分析数据

2.2 精密度实验结果

同一浓度标准溶液连续进样5次，每次进样10μL，RSD分别是0.71和1.14( n = 5)

2.3 加样回收率试验结果

在选定色谱条件下，以5份未加防腐剂的样品为空白，分别加入一定量的尼泊金甲酯、丙酯标准品溶液，每次进样10μL，测定峰面积，分别记录保留时间与峰面积，计算平均回收率分别97.40%、102.50%。结果见表3和表4。

表3 尼泊金甲酯的加样回收率试验数据分析

表4 尼泊金丙酯的加样回收率试验数据分析

2.4 样品测定结果

取已配制好的样品溶液，在上述色谱条件下，待测样品液连续进样5次，每次进样10μL。分别记录保留时间与峰面积，用外标法计算平均质量分数分别为0.25mg/g、1.74mg/g，得到RSD分别为 0.64%、0.59%。

表5 样品溶液中尼泊金甲酯（MP）的含量测定数据

表6 样品溶液中尼泊金丙酯(PP)的含量测定数据

3 结论

由样品的测定实验所得数据进行分析，以及利用回归方程进行数据处理，得到洗发乳中尼泊金甲酯、丙酯的平均质量分数分别为 0.135%（g/g）、0.087%（g/g）。本文利用高效液相色谱法来测定液体样品中尼泊金酯含量，实验表明：采用甲醇与水（体积比为7：3）做流动相，能更好的分离尼泊金酯，也能避免操作过程中因乙腈的毒性对实验者造成的健康危害。该方法操作方便、结果准确、灵敏度高，为控制食品、药品、化妆品等中尼泊金酯的用量提供了一种可靠的方法。

[1]Alan Talevi Carolina L.Bellera.A successful virtual screening application：prediction of anticonvulsant activity in MES test of widely used pharmaceutical and food preservatives methylparaben and propylparaben[J].Comput Aided Mol Des ,2007(21)：527–538.

[2]周建科, 宋歌, 刘瑞英, 张明翠．高效液相色谱法同时测定化妆品中尼泊金酯类防腐剂和特丁基对二苯酚[J].河北大学学报, 2010 (04)：365.

[3]曹保印．一种高效广谱食品防腐剂-尼泊金酯[N]．科技资讯,2004(07)．

[4]葛均辉, 常兵.对羟基苯甲酸酯类物质的雌激素活性[J].卫生研究, 2006 ( 5)：650- 652.

[5]B.rousset.Antithyroid effect of a food or drug preservative：4-hydroxybenzoic acid methyl ester[N]experientia,2008(8).

[6]M.A.Moreno,D.Castro , R Frutos /,M.R Ballesteros,J.L.Lastres.Liquid Chromatographic Determinationof Methylparaben and Propylparaben in Nortriptyline Hydrochloride Oil-Water Microemulsions J.Chromatographia Vol.52.No.9/10, Nov,2006：589-591.

[7]国家药典编委会.中华人民共和国药典[M].化学工业出版社,2005.

[8]邢金京, 欧阳广娜.使用气相色谱法和液相色谱法对六种尼泊金酯类进行分离测定[J].现代测量与实验管理, 2010(4)：3-5.