HPLC法测定炎热清片中黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量

康珊芬

(舟山市市场监督管理局定海分局，浙江 定海 316000)

HPLC法测定炎热清片中黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量

康珊芬

(舟山市市场监督管理局定海分局，浙江 定海 316000)

目的：建立高效液相色谱法测定炎热清片中黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量。方法以WATERS X-Bridge C18(250mm×4.6mm，5μm)为色谱柱，甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相，梯度洗脱，流速1.0ml/min，柱温30℃，检测波长277nm。结果色谱峰分离度良好，黄芩苷在0.1118～1.118μg、黄芩素在8.225×10-3～8.225×10-2μg、汉黄芩素在3.975×10-3～3.975×10-2μg内呈良好线性关系。平均加样回收率分别为98.8%、97.9%和97.4%。结论该方法简单、快速、重复性好，可用于炎热清片中黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的质量控制。

HPLC；炎热清片；黄芩苷；黄芩素；汉黄芩素

炎热清片由玄参、黄芩、柴胡、栀子等8味药材组成，常用于呼吸道炎、支气管炎、肺炎、急性扁桃体炎的治疗。本品现行标准为国家药品标准YBZ13632005-2011Z-5，原标准只有黄芩苷的含量测定项。鉴于黄芩中黄芩素、汉黄芩素在抗菌、抗病毒、抑制炎症反应方面具有重要的药理活性[1-2]，为确保产品的质量，本文采用HPLC建立了炎热清片中黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量测定方法，经验证，重现性好，空白无干扰，可作为控制本制剂质量的分析方法。

1 材料

1.1 仪器

Agilent1200型高效液相色谱仪；赛多利斯BS124S型电子分析天平。

1.2 试剂

黄芩苷(批号：110715-201318，纯度：93.3%)、黄芩素(批号：111595-201306，纯度：97.8%)、汉黄芩素(批号：111514-200403，纯度[3]：98%)。对照品均购自中国食品药品检定研究院。甲醇为色谱纯，水为高纯水，其他试剂均为分析纯。炎热清片 (吉林天药本草堂制药有限公司，批号：131001、140113、140416；湖北华龙生物制药有限公司，批号：20141124、20150319；四川凯京制药有限公司，批号：140810)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：WATERS X-Bridge C18分析柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇(A)- 0.1%磷酸溶液(B)，线性梯度洗脱0～30min为40%～70%A，30～35min为70%～40%A；检测波长277nm；柱温：30℃；流速：1.0 ml/min；进样量：10 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 供试品溶液[4-5]取本品，研细，取约1.0g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入70%乙醇50 ml，称重，水浴回流1h，放冷，用70%乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.2 对照品溶液 精密称取黄芩苷对照品23.96mg，置20ml量瓶中；黄芩素对照品16.82mg，置200ml量瓶中；汉黄芩素对照品10.14mg，置250ml量瓶中；分别用70%乙醇溶解，并定容至刻度，制成相应浓度的对照品贮备液。分别精密吸取上述对照品贮备液各1ml分别置同一20，25，50，100ml量瓶中，加70%甲醇至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液1#～4#，精密吸取上述对照品贮备液各5ml置同一50ml量瓶中，加70%甲醇至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液5#。

2.2.3 阴性对照溶液 根据处方工艺制备缺黄芩的阴性供试品，并按2.2.1项下制备方法制备。

2.3 系统适应性试验

精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照品溶液各10 μl，按2.1项下色谱条件进行测定，见图1。结果供试品色谱图中显示与对照品色谱相同保留时间的色谱峰，各色谱峰分离度大于1.5，阴性对照溶液在此保留时间无色谱峰出现，表明方法系统适应性良好。

2.4 线性关系考察

精密吸取混合对照品溶液1#～5#各10μl，注入高效液相色谱仪，以进样量(x，μg)为横坐标，峰面积(y)为纵坐标进行线性回归，得到黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的回归方程分别为y=3.114×103x-4.628(r=0.9992)，y=5.027×103x-2.603(r=0.9991)，y=3.925×103x+1.3541(r=0.9995)。表明黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素进样量分别在0.1118～1.118μg，8.225×10-3～8.225×10-2μg，3.975×10-3～3.975×10-2μg范围内与其峰面积呈良好线性关系。

2.5 精密度试验

取同一份供试品溶液，重复进样5次，测定目标化合物的峰面积。结果各成分峰面积的RSD分别为0.86%，1.27%和1.53%，表明仪器的精密度良好。

2.6 稳定性试验

取同一份供试品溶液，分别于0，2，4，8，12，22h进样，测定峰面积。结果3类黄酮化合物的色谱峰峰面积RSD分别为1.4%，1.9%，2.3%。表明供试品溶液在22h内稳定。

2.7 重复性试验

取同一批炎热清片内容物约1.0 g，共取6份，按要求制备，分别进样测定，测得黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的平均含量分别为0.591，0.042，0.019mg/g，RSD值分别为0.8 %，1.3%，1.7%，表明方法重复性良好。

2.8 回收率试验

取同一批已知含量的供试品(吉林天药本草堂制药有限公司，批号：131001，) 0.5g，精密称定，平行6份，分别加入混合对照品溶液5#适量，按2.2.1项下方法制备，依法测定，计算加样回收率。黄芩苷平均加样回收率为98.8%(RSD为0.61%)，黄芩素为97.9%(RSD为1.16%)，汉黄芩素为97.4%(RSD为1.07%)。结果见表1。

表1 回收率实验(N=9)

2.9 供试品测定

分别精密吸取供试品、混合对照品溶液4# 10μl注入高效液相色谱仪，依法测定。结果见表2。

表2 样品测定结果(N=3)

注：A. 吉林天药本草堂制药有限公司；B. 湖北华龙生物制药有限公司；C. 四川凯京制药有限公司。

3 小结

黄芩中黄酮类化合物含量丰富，并具有广泛的药理活性，是黄芩药材中的主要功效成分。目前黄芩中已发现41种黄酮类化合物，以黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素含量最高，且药理作用最为明显[6]。但现有药品标准中多以黄芩苷一种成分作为指标考察制剂质量，缺少对黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素为代表的总黄酮进行研究。试验发现炎热清片中黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素含量较丰富，且不同厂家生产的产品中黄芩总黄酮含量差异较大，建议在制剂标准中增加黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量考察项目，并以黄芩总黄酮含量作为制剂质量的评价指标。

[1]付王景，石继和.黄芩素体外抑菌与体内抗炎作用研究[J].中国药房，2014，25(23):2136-2138.

[2]任晓东，符伟，张晓芸，等.天然产物汉黄芩素的研究进展[J].中国新药杂质，2011，20(9):777-784.

[3]候学智，张振秋，尤春雪，等.HPLC测定黄芩中6个成分的含量[J].中国现代应用药学，2012，29(11):1010-1014.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010:282-283.

[5]阚红玉，宋殿荣，王跃飞，等.HPLC法同时测定黄芩中5中黄酮类成分的含量[J].中国药房，2010，21(11):1016-1018.

[6]梁英，韩鲁佳.黄芩中黄酮类化合物药理学作用研究进展[J].中国农业大学学报，2003，8(6): 9-14.

Simultaneousdeterminationofbaicalin,baicaleinandwogonininYanReqingTabletsbyHPLC

KANGShanfen

( Zhoushan Dinghai Market Supervisory Authority，Zhejiang 316000 ， China)

ObjectiveTo establish a method for determining the content of baicalin， baicalein and wogonin in Huatan Pingchuan tablets by HPLC.MethodWATERS X-Bridge C18(250mm×4.6mm, 5μm) was used. The mobile phase was consisited of methanol-0.1% phosphoric acid by gradient elution. The flow rate was 1.0 ml/min. The column temperature was set at 30℃. The detector wavelength was 277nm.ResultBaicalin, baicalein and wogonin showed a good linear relationship with range in 0.1118～1.118μg, 8.225×10-3～8.225×10-2μg, and 3.975×10-3～3.975×10-2μg, respectively. The recovery were 98.8%, 97.9%, and 97.4%.ConclusionThe method is simple, rapid, accurate and reliablewhich can be applied to control the quality of Yan Reqing tablets.

HPLC;Yan Reqing tablets; baicalin; baicalein; wogonin

康珊芬(1972-)，女，浙江舟山人，本科，主管药师。研究方向：药品质量管理

R917

B

1672-0024(2016)03-0045-03