血清miR-126-5p和白细胞介素6水平对急性胰腺炎患者早期目标体液疗效评估价值

薛小春， 田 尧， 郑志存

海安市人民医院 消化内科，江苏 海安 226600

急性胰腺炎早期发生毛细血管渗漏和急性肾功能衰竭会严重影响代谢功能，约25%急性胰腺炎患者会出现多个脏器功能衰竭和局部并发症[1]。目前，临床治疗急性胰腺炎主要采用早期目标体液治疗，该方法具有促进血容量恢复，维持血液循环稳定等特点[2]。但对于早期目标体液疗效评估尚无统一标准规范。目前，多采用白细胞介素6(interleukin-6，IL-6)、C反应蛋白(C-reactive protein，CRP)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α，TNF-α)评估治疗后的炎症反应[3]。但上述指标特异度较低，在慢性肾病、充血性心力衰竭等疾病中亦呈高水平状态。有研究显示，微小核糖核酸(micro ribonucleic acid，miRNA)在急性胰腺炎中表达异常，有望成为评估急性胰腺炎的新型标志物[4]。血清miR-126-5p可利用内皮细胞活化及白细胞转运机制调节急性胰腺炎的炎症反应[5]。但目前临床上对血清miR-126-5p及IL-6评估急性胰腺炎早期目标体液疗效的分析较少。因此，本研究旨在探讨血清miR-126-5p和IL-6水平对急性胰腺炎患者早期目标体液疗效评估价值。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取自2017年4月至2020年3月海安市人民医院收治的171例急性胰腺炎患者为研究对象。根据治疗效果[6]将患者分为显效组(n=45)、有效组(n=65)和无效组(n=61)。显效组：男性33例，女性12例；年龄33～73岁，平均年龄(54.67±7.52)岁；有效组：男性47例，女性18例；年龄33～73岁，平均年龄(54.73±7.35)岁；无效组：男性44例，女性17例；年龄35～73岁，平均年龄(54.23±7.15)岁。3组患者在性别、年龄等一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。纳入标准：(1)符合《急性胰腺炎诊治指南(2014)》[6]诊断标准，血清淀粉酶升高>正常值3倍，出现恶心、呕吐等，经腹部影像学检查确诊；(2)年龄33～73岁；(3)接受早期目标体液治疗。排除标准：(1)存在心、肝、肾等重要脏器严重损伤；(2)急性胆囊炎、胃或十二指肠穿孔；(3)合并肿瘤；(4)近1个月有降脂药物使用史。本研究经医院伦理委员会审批通过，所有患者或家属均签署知情同意书。

1.2 研究方法 血清miR-126-5p水平测定：(1)提取miRNA，将750μl总RNA提取试剂加入250 μl血浆中，再加入5 μl 50 pmol/L线虫 cel-mir-39(日本Takara 公司)作参照，振荡混匀使蛋白复合物解离，将200 μl氯仿加入混合物，振荡后室温静置10 min，离心10 min(4℃、12 000 r/min)，取上清液转移至含有3 μl糖原和600 μl异丙醇的试管中，并置于-20℃过夜。混合物内加入氯仿 200 μl震荡后静置10 min，在4℃、12 000 r/min条件下离心10 min，取下层沉淀物，使用95%乙醇反复清洗，加入10 μl焦碳酸二乙酯(赛默飞世尔科技)混匀保存。(2)检测血浆miRNA，取1 μl上述样品，采用核酸蛋白分析仪(美国Backman公司)检测，记录A260、A260/A280、RNA浓度，如出现浓度异常，需再次检测核对，除去异常值，其他样本在-80℃保存(行逆转录)。(3)多聚腺苷酸化与逆转录。(4)定量miRNA，准备反应体系20 μl[7.2 μl双蒸水，10 μl SYBR染料(Mir-XTM-miRNA第一链合成试剂盒)(2X)，0.4 μl miRNA特异性引物，0.4 μl辅酶Q引物与2.0 μl cDNA]。采用实时荧光定量聚合酶链反应仪(美国Bio-rad公司，FTC-2000 P型)检测相对表达量。聚合酶链反应条件，95℃、10 s,循环1次；聚合酶链反应，95℃、10 s,60℃、10 s，循环39次；溶解，95℃、15 s,60℃、60 s,95℃、15 s，循环1次。

采用酶联免疫吸附法，使用免疫测定仪(青岛三凯医学科技有限公司，SK-Y300)检测IL-6、CRP及TNF-α水平，所有操作均严格按照试剂盒(上海基免实业有限公司)说明书进行。

2 结果

2.1 3组患者miR-126-5p相对表达量比较 显效组、有效组和无效组miR-126-5p相对表达量分别为(2.04±0.36)、(10.22±3.34)和(25.06±4.91)，3组间两两比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。

2.2 3组患者IL-6、CRP及TNF-α水平比较 有效组和无效组IL-6、CRP、TNF-α水平均高于显效组，差异有统计学意义(P<0.05)；无效组患者IL-6、CRP、TNF-α水平均高于有效组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 3组患者IL-6、CRP及TNF-α水平比较

2.3 血清miR-126-5p与各指标相关性分析 Pearson相关性分析结果显示，血清miR-126-5p与IL-6水平呈正相关(r=0.724，P<0.05)，与CRP和TNF-α水平无明显相关性(r=0.268，P=0.547；r=0.142；P=0.852)。见表2。

3 讨论

重症急性胰腺炎急性期经目标体液治疗后易

表2 血清miR-126-5p与各指标相关性分析

形成液体正平衡[7-10]。因此，选择合适指标评估早期目标体液疗效，对后续急性胰腺炎的治疗具有重要意义。miRNAs属于短单链非编码蛋白RNA分子，参与细胞增殖调控、存活及转移等，主要通过部分互补匹配至目的靶点3′非编码区调节基因表达水平[11-12]。有研究证实，血清miR-126-5p利用内皮细胞活化和白细胞转运机制调控发挥血管内皮功能调节作用，推测其可能参与急性胰腺炎发病过程[13]。本研究结果显示，无效组患者的血清miR-126-5p相对表达量高于有效组和显效组。这说明，血清miR-126-5p表达升高与急性胰腺炎早期目标体液疗效相关，可作为评估急性胰腺炎早期目标体液疗效的新型标志物。本研究结果与Chen等[14]的研究结果相似。目前，急性胰腺炎的发病机制尚未阐明，推测其可能与胰腺胰酶自身消化、胰腺循环障碍及白细胞过渡激活等有关。有研究显示，炎性反应与其级联瀑布效应促使胰腺局限性炎症进展为急性胰腺炎[15]。中性粒细胞可能参与重症急性胰腺炎的发病过程，其可刺激多种炎性因子，如IL-6、CRP及TNF-α等释放入血[16-17]。TNF-α诱导生成IL-6，而IL-6可引起一系列炎症反应。有研究显示，IL-6可用于评估急性胰腺炎病情的严重程度[18-19]。这是由于IL-6是单核细胞，受TNF-α等物质诱导分泌而成，亦可由激活的巨噬细胞、成纤维细胞等产生，参与急性蛋白反应。同时，IL-6亦是急性期反应的炎症介质，其一方面可致胰腺持续性坏死；另一方面可反馈使TNF-α水平增加，从而释放IL-6，形成恶性循环[20]。有研究显示，高水平CRP可准确反应胰腺细胞炎症程度及敏感性[21]。本研究结果显示，无效组患者IL-6、CRP、TNF-α水平高于有效组和显效组，有效组上述指标均患者高于显效组，差异有统计学意义(P<0.05)。这说明，IL-6、CRP、TNF-α等诱导自身基因表达，致使促炎因子大量释放，进行早期目标体液治疗后，其水平显著下降。经Pearson相关性分析结果显示，血清miR-126-5p水平与IL-6呈正相关，与CRP和TNF-α水平无明显相关性。这说明，血清miR-126-5p通过某种途径参与炎症反应，推测其受靶基因激活，表达某种能与IL-6靶向结合的配体，进而激发胰腺相关蛋白酶活性，发挥自身消化作用，因此，控制血清miR-126-5p和IL-6水平是急性胰腺炎早期目标体液治疗良好预后的关键。然而，血清miR-126-5p在受靶基因激活过程中并未表达能与CRP和TNF-α靶向结合的配体，因此，无明显相关性。

综上所述，血清miR-126-5p、IL-6水平可评估急性胰腺炎早期目标体液疗效，且血清miR-126-5p及IL-6水平降低表示早期目标体液疗效较好，可作为评估急性胰腺炎预后指标。本研究不足之处在样本量较小，可能存在偏倚，影响结果，后续会扩大样本量进一步证实。