多能性相关转录因子及微管不稳定蛋白在皮肤鳞状细胞癌的表达及临床意义

张静依 哈雪梅(通信作者) 赵博雅 张自洁

101500首都医科大学燕京医学院2016级五年制临床医学1，北京

101500首都医科大学燕京医学院密云教学医院综合教研室2，北京

101500首都医科大学燕京医学院2018级五年制临床医学3，北京

皮肤鳞状细胞癌(cSCC)是一种以角质细胞异常增殖为特征的恶性肿瘤，其发病率随人口老龄化发展逐年上升。本病临床表现单一、病程长，反复摩擦感染常影响临床判断，不典型的病变，更易过诊或漏诊。研究cSCC 早期高危特征和发生的分子机制，可为临床提供重要信息。多能性相关转录因子(SOX2)在哺乳动物胚胎发生和后来的生活中必不可少，异常表达却非常有害，通过调节干细胞功能、细胞黏附、外基质降解及血管生成等参与肿瘤发生、转移与复发[1-2]。微管不稳定蛋白(Stathmin)又称癌蛋白，具有微管解聚活性，在有丝分裂调控中起关键作用，是肿瘤相关因子之一[3]。本研究检测SOX2和Stathmin在cSCC和皮肤良性增生性病变中的表达情况，以期发现相关诊断标记和线索，为临床提供预后信息及新的治疗靶点。

资料与方法

选取2017-2020年北京市密云区医院病理科存档的皮肤鳞状细胞癌切除标本41 例为观察组，良性增生性病变25 例为对照组。观察组男28 例，女13 例；年龄44～94岁，平均(70.54±13.19)岁；有糖尿病者21例，无糖尿病者17 例(失访3 例)；发生于口腔相关上皮者7 例，其他部位者34 例。对照组男13 例，女12例；年龄33～83岁，平均(56.20±14.18)岁；有糖尿病者10 例，无糖尿病者15 例；发生于口腔相关上皮者1例，其他部位者24例。两组患者基本资料比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准。

纳入标准：①术前未接受过放化疗。②手术切除为初次治疗。③原发性肿物。④经患者及家属同意。

排除标准：①合并其他恶性肿瘤者。②诊断不明确者。③复发病例。④不配合随访者。

方法：两组均采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(SP)。10%中性福尔马林固定的石蜡标本常规切片(厚度2～3 μm)，脱蜡水化，磷酸缓冲盐溶液(PBS)浸泡。乙二胺四乙酸(EDTA)修复液(PH8.0)高压修复，冷却至室温，PBS缓冲液清洗。一抗(SOX2：中山金桥， 20817571， Stathmin： 中山金桥，21095421)，37℃孵育1 h。PBS 清洗后加酶标羊抗鼠二抗(中山金桥：17G87D11)。DAB 显色。苏木素复染。乙醇脱水。二甲苯透明后封片。将已知阳性组织设为阳性对照，PBS 液代一抗作为阴性对照。由2 名经验丰富的主治医师行独立双盲复阅判读。

观察指标：依据着色强度、阳性细胞百分比进行评分。着色强度：棕褐色计3 分，棕黄色计4 分，浅黄色计1 分，不着色计0 分；阳性细胞百分比：＞75%计4 分，50%～75%计3 分，25%～50%计2 分，≤25%计1 分，无阳性计0 分。以上两项得分相加计总分，0～1 分为阴性，2～7 分为阳性。高分化鳞状细胞癌巢近基底层阳性表达时，评为1分(阴性)。

统计学方法：采用SPSS 22.0 统计学分析系统进行数据处理，计量资料用(±s)表示，组间采用t检验；计数资料用[n(%)]表示，组间采用χ2检验；以P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

SOX2 和Stathmin 蛋白在两组患者中的表达。SOX2蛋白在正常皮肤未见表达，在cSCC中表达于肿瘤细胞核，个别胞质阳性。Stathmin 定位于胞质，在正常鳞状上皮基底及基底旁层表达，高分化鳞状细胞癌巢近基底阳性表达，分化越差，信号越强。见图1、图2。

图1 SOX2在癌组织中表达(10x)

图2 Stathmin在癌组织中表达(10x)

两组患者病变中SOX2 和Stathmin 蛋白表达率比较：观察组SOX2 和Stathmin 在cSCC 阳性表达率明显高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 两组患者病变中SOX2和Stathmin蛋白表达率比较

观察组SOX2 和Stathmin 蛋白表达与临床因素的关系：观察组SOX2 阳性表达与发病部位和糖尿病史相关，发生于口腔黏膜的鳞状细胞癌SOX2 蛋白阳性表达率明显高于其他部位，有糖尿病史的cSCC 患者SOX2 蛋白阳性表达率高于无糖尿病史者，差异有统计学意义(P＜0.05)。Stathmin 蛋白阳性表达与肿瘤分化呈负相关，中-低分化鳞癌Stathmin 蛋白阳性表达率明显高于高分化者，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表2 观察组SOX2和Stathmin蛋白表达与临床因素的关系

讨 论

鳞状上皮是表皮增殖单元发生一系列高度调控事件而逐渐分化成熟的，细胞分裂率、凋亡或传输时间等微小改变即可导致病理状况，其调控异常是最可能诱发恶性肿瘤的原因。

SOX2 对维持胚胎和干细胞群至关重要，可影响细胞增殖、迁移、侵袭和转移。SOX2 在食管鳞癌、膀胱癌前病变及小鼠侵袭性膀胱癌中持续表达，对肿瘤的启动和生长十分重要，推荐SOX2 作为尿路上皮癌标记及潜在靶点[4-5]。这与本研究结果所示SOX2 蛋白在cSCC 细胞核阳性表达，且阳性率明显高于对照组结果相似。SOX2 蛋白高表达于口腔相关的鳞状细胞癌，可能与其上皮干细胞性及异质性相关[6]。SOX2还可协同P63 形成复合体，激活编码GLUT1 的内含子增强子簇，提高GLUT1 表达，介导糖酵解内流过度激活，鳞状细胞癌存在其表型，糖代谢异常时高度易感[7]。本研究结果显示，有糖尿病史的cSCC 患者SOX2 蛋白阳性表达率高于无糖尿病史者，由此推断，患者糖尿病史及血糖水平可作为cSCC 诊断参考依据。

几乎所有宫颈鳞癌和高级别上皮内瘤变中Stathmin 过表达，其蛋白及mRNA 表达水平在食管鳞癌患者血清中高于健康者[8]。但很多研究发现，Stathmin 高表达与肿瘤分化差、淋巴结转移、TNM 分期晚和生存期短有关[9-10]。口腔鳞癌过表达Stathmin可通过激活PI3K-AKT-mTOR 信号通路来降低癌细胞对治疗的敏感性。本研究结果显示，Stathmin在cSCC的阳性表达率明显高于对照组，且其阳性表达与肿瘤分化呈负相关，提示其表达与预后不良相关。

综上所述，Stathmin 和SOX2 可作为cSCC 诊断标记，阳性表达提示恶性，可协助鉴别病理形态相似的cSCC 和良性增生性病变，并为临床提供预后信息。患者糖尿病病史及血糖水平有可能作为cSCC的参考依据。