肺泡灌洗液中白介素-27浓度对辅助诊断肺结核的临床价值

申沪 李春兰 鲁伟 龙燕华 张廷梅

550003 贵阳市公共卫生救治中心门急诊，贵州 贵阳

结核病是由结核分枝杆菌感染引起的慢性疾病，其死亡率居单一病原体感染的疾病之首，随着耐药病菌的出现，对人类生命安全造成重大威胁。目前结核病的诊断仍有局限[1]，除外病原学和病理学检查为金指标外，其他检查均为辅助诊断手段。近年来国内外很多结核病免疫方面研究，希望能从根本上找到结核病控制的办法，故发现新的有助于诊断肺结核的检查手段成为必然。研究证实，白介素-27(IL-27)在结核感染中发挥重要作用[2]，但参与结核的相关免疫机制尚未完全阐明。IL-27 是机体参与结核免疫过程，降低结核杆菌杀伤力的重要因子，若证实肺结核中IL-27浓度明显高于其他肺部感染患者，则IL-27将逐步成为结核感染研究的新方向。支气管镜为肺结核常用检查手段，探讨肺结核肺泡灌洗液(BALF)中IL-27 含量，有一定临床价值。

资料与方法

收集2017年1月-2019年9月110 例贵阳市公共卫生救治中心诊治的肺部疾病患者的BALF。年龄18～80 岁，肺结核80 例，其他肺部疾病30 例。根据《肺结核诊断标准》WS288-2008 选择活动性肺结核患者入组，按痰或纤刷物抗酸涂片结果分成肺结核痰阳组31 例(第1 组)，肺结核痰阴组49 例(第2 组)，同期收集其他肺部疾病但为非肺结核组共30 例(第3组)，未开始规范抗感染治疗。第1 组男19 例，女12例；年龄32～52 岁。第2 组男31 例，女18 例；年龄30～50 岁。第3 组男19 例，女11 例；年龄34～52岁。两组一般资料比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

纳入标准：①活动性肺结核、肺炎、肺癌患者；②能行纤支镜肺泡灌洗检查；③年龄18～80岁。

排除标准：①合并肺外结核、合并其他系统疾病(艾滋病、糖尿病、甲状腺疾病等免疫系统疾病或全身性疾病)；②不能行纤维支气管镜检查；③肺部有活动性出血；④气道使用过抗结核药物局部治疗；⑤间质性肺疾病、职业性肺疾病。

方法：试剂及仪器选取：人IL-27 酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂盒购自南京森贝伽生物科技有限公司，DNM-9602G 型酶标分析仪，孵育器MKF-6，KJ-201A型振荡器。标本采集及处理：支气管镜检查时先吸净气道分泌物，将支气管镜前端置于病灶开口部位，用生理盐水灌洗，30 mL/次，总量100 mL，分次负压吸出，回收量占总量的30%～40%，尽量避免大气道分泌物混入、红细胞小于20%的BALF 标本视为合适标本，取15 mL 的BALF，均用4 000 r/min 离心10 min 后取上清液1.5 mL 封盖冷冻保存(-200C)备用，第1 份灌洗液送检病原学检查，第2 份灌洗液送检IL-27 浓度检测。检测方法采用ELISA 试剂盒检测IL-27浓度水平，严格按照说明书操作，DNM-9602G型酶标分析仪检测标本的吸光度、OD值。

观察指标：对比分析3组样本IL-27浓度变化。

统计学处理：采用SPSS 20.0 软件数据分析，先对资料进行正态分布检验，资料均不符合正态分布，行秩和检验(Kruskal-Wallis)检验和秩和多重分析检验(LSD)，以P＜0.05 为差异有统计学意义，P＜0.01 为差异有高度统计学意义。绘制ROC曲线，计算得出曲线下面积、最佳截断值、灵敏度、特异度、约登指数。

结 果

三组IL-27 浓度比较：第1 组浓度最高，第2 组次之，第3 组最低，差异有高度统计学意义(P＜0.01)。见表1。

表1 第1组、第2组、第3组IL-27浓度(ng/mL)水平比较分析

各组间LSD 检验，第1 组与第2 组对比，差异无统计学意义(P＞0.05)；第1组与第3组、第2组与第3组对比，差异有高度统计学意义(P＜0.01)。提示通过检测BALF 中IL-27 浓度可区别肺结核与非肺结核，特别是痰阴肺结核。见表2。

表2 第1组、第2组、第3组IL-27浓度(ng/mL)水平多重比较

根据ROC曲线得出4组结果(见表3)：①将第1组和第2组合并为活动性肺结核组，与第3组比较(见图1)：提示BALF 中IL-27 浓度对于诊断肺结核有较高敏感性，但特异性不高。②第1组和第3组比较(见图2)：提升了特异性的同时，灵敏度降低。③第2 组和第3组比较(见图3)：进一步证实当肺结核痰抗酸杆菌检查为阴性时，可以得到和痰阳肺结核检测时类似的结果。④第1 组和第2 组比较(见图4)：提示用于区别痰检结果不同的肺结核的临床价值较小。

图1 活动性肺结核组和非肺结核组IL-27浓度特异性、敏感性分析

图2 第1 组和第3 组IL-27浓度特异性、敏感性分析

图3 第2组和第3组IL-27浓度特异性、敏感性分析

图4 第1 组和第2 组IL-27浓度特异性、敏感性分析

表3 第1组、第2组、第3组IL-27浓度(ng/ml)ROC曲线结果

讨 论

IL-27 来源于IL-12 细胞因子家族[1]，主要来源于激活的抗原递呈细胞，有促炎、抗炎的双重作用，机体受结核杆菌感染，以Th1 型免疫反应为主，IL-27能限制Th1型免疫反应强度，抑制结核杆菌生长，而巨噬细胞是杀伤结核杆菌的主要效应细胞，IL-27 使机体在结核杆菌感染过程中，防御性免疫及过度免疫反应引起的病理性损伤保持平衡，因此，IL-27 是机体参与结核免疫过程，降低结核杆菌杀伤力的又一重要因子。近年来，学者们已进行了IL-27 和结核性胸膜炎方面的相关性研究分析，且证实IL-27 水平明显高于非结核性胸腔积液[3]。一项Meta 分析研究显示，检测胸腔积液中IL-27 水平总体特异性为97%，灵敏性为93%[4]。BALF 中IL-27 的研究也不少[5]。本研究提示，肺结核BALF 中IL-27 浓度高于非肺结核肺部疾病，痰阳肺结核中浓度最高，痰阴肺结核次之，检测敏感度较高，辅助诊断肺结核有一定临床价值，但特异性指数不高，会有假阳性可能。

综上所述，通过该研究初步考虑通过检测BALF中IL-27 浓度对于辅助诊断肺结核有一定的临床意义，检查时间短，能及时快速地给出结果，对于早期辅助诊断肺结核有意义。