上海长宁地区58 217例女性宫颈HPV感染情况及基因亚型分布研究

侯雅萍 骆莺(通信作者)吴磊 汤柯夫 樊程

200050上海市长宁区妇幼保健院检验科，上海

宫颈癌被列为两大常见女性癌症，每年约有新增570 000例确诊病例，死亡病例超过310 000例。在全球范围内，超过3/4 的病例来自发展中国家，中国和印度是最大的贡献国[1]。持久性高危人乳头瘤病毒的感染是宫颈癌和宫颈上皮内瘤变的主要原因[2]。本研究通过回顾性分析上海市长宁区妇女58 217 例宫颈HPV 检测结果，积累本地区妇女HPV 感染的流行病学资料，探讨HPV 感染及其亚型的分布情况，为宫颈癌患者提供参考依据。

资料与方法

收集长宁区妇幼保健院2018年1月-2020年12月就诊妇女生物宫颈脱落细胞样作为研究对象,患者年龄15～81 岁。患者及家属均同意加入本研究，签署知情同意书，本研究经医院伦理委员会审批。

纳入标准：①患者自愿参加检查；②非月经、妊娠期间；③有既往性生活史。

排除标准：①有子宫切除史；②中途退出者；③存在沟通障碍者。

方法：(1)样本采集：受检者膀胱截石位，利用窥阴器、阴道扩张器充分暴露宫颈，清理宫颈口分泌物，将宫颈专用细胞刷伸入受检者宫颈口内，顺时针旋转3～5 圈收集脱落细胞，收集完成后将刷头置于细胞保存液中，2℃～8℃保存，采样1 周内完成检测。(2)仪器与试剂：①HPV 分型检测试剂盒、核酸提取液试剂盒，均购自宁波海尔施基因科技有限公司；②PCR 抽提器(厂家：台湾圆点奈米技术股份有限公司；型号：SLA-32)；③PCR 扩增仪(厂家：杭州朗基科学仪器有限公司；型号：A300)；④HPV 分型系统：贝克曼库尔特GenomeLab GeXP 遗传分析系统。(3)检测方法：应用多重PCR、毛细管电泳技术，对E6、E7、E1(HPV 早期表达基因)设计引物，对不同HPV 亚型基因进行特异性扩增，并应用毛细电泳分离，在1次检测中同步对25种基因型分型操作；内置内参pcDNA 监控PCR 反应过程，内置人基因内参β-globin 监控样本处理过程。以体外定性测定细胞样本中的25种HPV核酸基因型。

观察指标： ①统计检测标本中HPV 单一、双重和多重感染情况；②比较不同年龄段患者HPV 感染率；③统计检测样本中HPV亚型感染分布情况。

统计学方法：数据采用SPSS 18.0 统计学软件分析，计数资料以[n(%)]表示，采用χ2检验；计量资料以(±s)表示，采用t检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

结果

感染情况：在检测的58 217例样本中，检测出阳性标本14 330 份，阳性率(24.61%)。高危型HPV感染率21.59(12 569/5 8217)，低危型HPV 感染率6.27%(6 648/58 217)。HPV多重感染情况见表1。

表1 HPV单一、双重和多重感染情况

不同年龄段患者HPV 感染率比较：分析感染HPV妇女的年龄特征，＜20岁女性HPV感染率最高，达37.8%(31/82)；＞60 岁女性感染率排第2，为36.57%(1 259/3 443)；不同年龄段患者HPV 感染率比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表2 不同年龄段患者HPV感染率比较

HPV 亚型感染分布情况：在58 217 例检测样本中，HPV 阳性14 330 例，高危型HPV 感染率为21.59%(12 569/58 217)；低危型HPV 感染率为6.27%(3 648/58 217)。25 种亚型(高危型：16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82和低危型：6、11、42、43、44、81、83)均被检出。其中高危型常见亚型为：HPV52 型(4.54%)、HPV53 型(3.09%)、 HPV16 型(3.07%)、 HPV58 型(2.94%)、HPV56型(2.91%)；低危型常见亚型：HPV81型(1.51%)、HPV43型(1.4%)、HPV42型(1.39%)。

讨论

宫颈癌是唯一病因明确、可以早期发现和治疗、可望消灭的癌症[3]。持续高危型HPV 感染是宫颈癌前病变和子宫颈癌发生的主要病因[4]。预防宫颈癌的重要手段包括早期发现、早期诊断和预防性注射疫苗，而定期进行HPV 基因检测亦是监测和预防宫颈癌的有效手段之一。

本研究对上海市长宁区58 217例妇女宫颈脱落细胞样本进行HPV 检测，发现感染率达24.61%，与刘华等[5]报告的上海浦东地区HPV 感染率23.46%相近，但明显低于崔燕红等[6]报告的江苏常熟地区HPV 感染率44.9%，而高于于海聪等[7]研究的哈尔滨地区HPV感染率20.1%，这表明HPV的感染存在地区差异。

本研究结果显示，＜20 岁女性的HPV 感染率最高(37.8%)，分析原因可能是由于宫颈上皮发育未完全成熟，加之性生活过早或者多个性伴侣等不良生活习惯导致。但是因为受检例数不多结论有局限性，应扩大检测例数加以论证结论。但不容忽视的是对青少年女性加强健康宣教，了解筛查及预防相关知识。感染率排在第2 位的是＞60 岁年龄组(36.57%)，虽然高年龄女性性生活相对减少，但是由于其激素水平变化等引起免疫功能衰退，导致HPV 易感性增加及清除能力下降。众所周知，我国正面临人口老龄化的问题，对于＞60岁老年妇女应重视宫颈癌HPV筛查。

在感染形式上，长宁地区女性HPV 感染情况中，单一基因、双重基因、多重基因感染率分别为65.99%、20.96%和13.05%；单纯高危型感染率为21.59%，单纯低危型感染率为6.27%。说明本地区女性HPV 感染以单一基因和高危亚型为主。本研究采用多重PCR 和毛细管电泳技术检测18 种高危型HPV亚型和7 种低危型HPV 亚型，25 种HPV 亚型均检出。高危型亚型检出率最高的5 位是：HPV52 型(4.54%)、HPV53 型(3.09%)、 HPV16 型(3.07%)、 HPV58 型(2.94%)、HPV56 型(2.91%)。虽然HPV16 和18 是全世界宫颈病变相关的最普遍的HPV 感染类型，但本研究发现HPV52、53、16、58、56 是本地区感染的主要亚型，表明不同地区女性的HPV 基因型别有很大差异[8-10]。

目前全球正在使用的3 种疫苗：HPV2 价疫苗、HPV4价疫苗及HPV9价疫苗，这3种疫苗的设计和验证是建立在西方人群的流行病学基础上，对亚洲人群的保护率相对低于西方人群[11]。本地区感染最多的5种HPV 高危亚型并没有完全被涵盖。由此可见，HPV 疫苗的保护作用具有地域差别，在引进运用时应予以调整，才能真正起到抵御所有可致癌的高危型人乳头瘤病毒的作用。

本研究表明，上海长宁地区HPV 感染具有年龄分布差异及亚型差异的特点，为本地区女性宫颈癌筛查和防治提供了有用资料。同时应加强对高危人群的健康宣教。结合宫颈细胞学筛查和阴道镜检查，尽量做到对宫颈癌及癌前病变的早预防、早发现、早治疗。