3种分子检测技术在结核病实验室诊断中的应用评价

230000安徽省胸科医院检验科

结核病是由结核分枝杆菌感染引起的可累及全身多系统多器官的疾病。我国2014年估算发病人数93万，排名世界第3位，是结核病高负担国家之一[1]。目前常规结核病实验室诊断方法是涂片显微镜观察法和固体培养法。本文通过与改良罗氏培养基法的比较，分析TBDNA PCR、TB-RNA PCR和Xpert MTB/RIF 3种分子诊断技术对痰标本的检测情况，探讨此3种结合检测方法对结核病诊断的临床应用价值。

资料与方法

2015年1月-2016年10月收治初诊疑似肺结核患者180例，男102例，女78例；年龄15～78岁，平均50.2岁。(1)纳入结核病组严格遵守世界卫生组织(WTO)《肺结核诊断指南》诊断标准：①3次痰涂片阴性，X线胸片肺部影像学检查显示有活动性肺结核征象且伴有咳嗽、咳痰、咯血等肺结核可疑症状；②3次痰涂片结果中有≥1次抗酸涂片阳性；③未开展过抗结核药治疗。(2)排除标准：①严重心脏、肝脏、肾脏疾病、恶性肿瘤等严重系统性疾病患者；②妊娠或哺乳期患者；③HIV患者。另选择性别、年龄匹配的同期入院非肺结核患者150例作对照组，男82例，女68例；年龄17～75岁，平均47.8岁。

方法：对所有的痰液标本同时进行痰分枝杆菌培养法、TB-DNA PCR、TBRNA PCR和Xpert MTB/RIF进行检测。

统计学分析；采用SPSS 19.0软件进行χ2检验，对不同检测方法的检测结果进行比较，P＜0.05表示差异有统计学意义。

结 果

3种检测方法对疑似肺结核患者180例和非肺结核患者150例痰液标本检测结果比较：改良罗氏培养基培养法、TB-DNA PCR、TB-RNA PCR和Xpert MTB/RIF检测疑似肺结核患者180例痰液标本的阳性率分别为30.6%、45.6%、40.5%、47.4%。其中 TB-DNA PCR、TB-RNA PCR和Xpert MTB/RIF 3种分子学检测方法检测阳性率差异无统计学意义(P＞0.05)，3者均高于改良罗氏培养法，差异有统计学意义(P＜0.05)。分别对非肺结核患者150例的痰液标本检测，TBDNA PCR和Xpert MTB/RIF各检出2例和1例，见表1。

讨 论

近年来，分子生物学的快速发展和推广能够较好地弥补传统鉴定结核分枝杆菌方法耗时长、阳性率低等缺陷[2]。TB-DNA方法检测灵敏度高、速度快，但只能判断是否有结核杆菌，不能鉴别死菌和活菌。TB-RNA以病原菌内的特异16SrRNA为靶点，仅存在活菌中且半衰期短，能检测出活动性感染[3-4]，可以作为活动性肺结核及治疗效果的监测手段。Xpert MTB/RIF检测法是美国Cepheid公司研发的全自动一体化实时定量核酸扩增技术，能够在2 h内同时检测结核病和利福平耐药的检测方法，但价格昂贵。

表1 3种检测方法对180例疑似肺结核患者和150例非肺结核患者痰液标本检测结果比较

本实验数据表明，对疑似肺结核患者痰标本进行TB-DNA PCR、TB-RNA PCR和Xpert MTB/RIF 3种以PCR技术为基础的分子生物学检测方法检测阳性率明显高于传统改良罗氏培养法[5]，这与之前文献资料报告相一致。

总之，与传统的抗酸染色涂片和改良罗氏培养基培养法相比，TB-DNA PCR、TB-RNA PCR和Xpert MTB/RIF 3种以PCR技术为基础的分子生物学检测方法更安全、高效、准确[6]，为结核病的早诊断、早治疗提供了新依据，在结核病的诊断中具有广阔的前景和应用价值。