紫杉醇对乳腺癌肿瘤免疫逃逸干预作用的临床研究

赤庆华 薛江楠

摘要 目的：探讨紫杉醇对乳腺癌肿瘤免疫逃逸的干预作用。方法：收治行吡柔比星+环磷酰胺+紫杉醇化疗方案治疗的乳腺癌患者60例作为观察组，门诊体检者40例作为对照组。检测观察组治疗前、中、后及对照组外周血CD4+CD25+Tr细胞水平、血清Thl细胞因子（IL-12、IFN-γ）、Th2细胞因子（IL-4、IL-10）水平及IFN-γ/IL-4。结果：观察组治疗前、治疗中外周血CD4+CD25+Tr细胞水平明显高于对照组（P<0.05），观察组治疗后外周血CD4+CD25+Tr细胞水平较治疗前、治疗中明显降低（P<0.05）；观察组治疗前、治疗中Thl细胞因子（IL-12、IFN-¨表达水平及IFN-γ/IL-4明显低于对照组（P<0.05），而Th2细胞因子（IL-4、IL-10）表达水平明显高于对照组（P<0.05），观察组治疗后Thl细胞因子表达水平及IFN-γ/IL-4较治疗前、治疗中明显升高（P<0.05），而Th2细胞因子表达水平明显降低（P<0.05）。结论：紫杉醇可能具有抑制乳腺癌肿瘤免疫逃逸的作用机制。

关键词 紫杉醇；乳腺癌；肿瘤免疫逃逸；抑制调节性T细胞

乳腺癌是常见于女性的恶性肿瘤，目前多采用乳腺癌根治术予以治疗，术后多需实施化疗方案进行治疗，但化疗药物可对患者免疫系统造成一定损伤和抑制作用，因此认为化疗可明显抑制患者免疫系统功能。但近些年有研究发现，某些化疗药物可明显增强肿瘤细胞的免疫原性，显著促进肿瘤细胞大量释放内源性危险信号，同时还通过抑制调节性T细胞（Treg）等作用机制介导抗肿瘤免疫反应[1.2]。紫杉醇是抗癌药理效应作用较强的药物，可促进白细胞介素（IL）-12的分泌，从而纠正肿瘤组织诱导产生的免疫系统功能失常现象[3]。

本研究拟探讨紫杉醇对乳腺癌肿瘤免疫逃逸的干预作用，为临床应用提供依据。

资料与方法

2016年2月-2017年10月收治术后行化疗方案治疗的乳腺癌患者60例，手术治療前行病理组织实验室检查均已确诊。年龄37～62岁，平均（48.7±9.5）岁。选择同期门诊体检者40例作为对照组，年龄35～60岁，平均（46.6±9.2）岁。均除外合并有自身免疫系统疾病、感染反应等。两组年龄比较，差异无统计学意义（P>0.05）。所有患者和体检者均签署知情同意书。

治疗方法：所有乳腺癌患者入院后均实施吡柔比星（ADM）+环磷酰胺（CTX）+紫杉醇化疗方案进行治疗，ADMf治疗剂量40 mg/m2），静脉滴注，第1天；CTX（治疗剂量600 mg/m2），静脉滴注，第1天，21d为1个周期，连续治疗4个周期。然后序贯紫杉醇（治疗剂量175mg/m2），静脉滴注3h，第1天，21d为1个周期，连续治疗4个周期。

两组CD4+CD25+Tr细胞水平检测：采用流式细胞仪检测观察组治疗前、治疗中、治疗后及对照组外周血CD4+CD25+Tr细胞水平，外周血采用FACS缓冲液洗涤干净后加入固定液，室温条件下避光孵育作用20min，洗涤后将悬浮细胞置于FoxP3缓冲液中，室温条件下避光作用15min，洗涤干净后，分成5管，分别加入同型对照，FITC-CDllb、PE-CDllb、APC-B220、APC-B220+FITC-CD4+PE-FoxP3各20uL，室温条件下避光作用30min，使用染色缓冲液洗涤2次，上机进行分析，确认FoxP3的细胞，即认定为CD4+CD25+Tr细胞比例。

两组血清Thl、Th2细胞因子表达水平检测：所有乳腺癌患者治疗前、治疗中和治疗后及对照组均抽取外周静脉血液5mL，离心处理和分离血清，采用ELISA法检测血清Thl细胞因子（IL-12、IFN-γ）和Th2细胞因子（IL-4、IL-10）表达水平。

统计学分析：采用SPSS 18.0统计学软件分析本研究数据，计数资料采用t检验，计量资料比较采用X2检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。

结果

观察组不同时间点及对照组外周血CD4+CD25+Tr细胞水平比较：观察组治疗前、治疗中外周血CD4+CD25+Tr细胞水平明显高于对照组（P<0.05），观察组治疗后外周血CD4+CD25+Tr细胞水平较治疗前、治疗中明显降低（P<0.05），而与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表l。

两组血清Thl、Th2细胞因子水平及Thl/Th2比较：观察组治疗前、治疗中Thl细胞因子（IL-12、IFN-γ）表达水平及IFN-γ/IL-4明显低于对照组（P<0.05），而Th2细胞因子（IL-4、IL-10）表达水平明显高于对照组（P<0.05）；观察组治疗后Thl细胞因子表达水平及IFN-γ/IL-4较治疗前、治疗中明显升高（P<0.05），而Th2细胞因子表达水平明显降低（P<0.05），与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表2。

讨论

近些年临床对肿瘤发病机制的深入研究发现肿瘤疾病的发生、发展过程是肿瘤细胞和宿主细胞之间相互对抗的过程，两者相互作用对于肿瘤组织发展、远处脏器组织转移和转归均发挥着十分重要的作用，而宿主免疫系统及其微环境也在疾病发生、发展过程中占有重要地位[4]。

CD4+CD25+Tr细胞的发现是近些年免疫学领域的重大突破，相关研究证实，CD4+ CD25 +Tr细胞可通过分泌TGF-B l、IL-10等免疫系统功能抑制细胞因子，从而在免疫系统抑制中发挥重要的作用。机体免疫系统功能状态与肿瘤疾病发生、发展之间存在密切联系，根据CD4+Th细胞分泌的细胞因子的差异性，分为Th0、Thl、Th2等T细胞亚型。正常状态下，Thl与Th2淋巴细胞亚群水平处于平衡状态，维持正常免疫系统功能[5.6]；恶性肿瘤患者Thl细胞受到明显抑制，而Th2细胞占有优势地位，Thl/Th2向Th2方向发生漂移现象，使得机体抗肿瘤免疫监视的生理功能明显降低。IL-12细胞因子可促进Th0分化为Thl，而Thl可大量分泌IFN-γ[7]。IL-12、IFN-γ均为Thl型细胞因子，可通过各种途径起到抗肿瘤的生理学作用，最终加强免疫系统识别机体内肿瘤细胞的作用，杀灭肿瘤细胞等。IL-4是介导Th2细胞发育的重要因子，Th2细胞可分泌IL-4、IL-10等细胞因子，进而抑制机体抗肿瘤免疫系统功能。

紫杉醇是从紫杉类或红豆杉植物中分离产生的化疗药物，其主要通过促进微管的形成过程，起到抑制肿瘤细胞有丝分裂和阻碍纺锤体的形成，最终使得肿瘤细胞大量死亡。此外，紫杉醇还具有免疫修饰的生理学作用，可明显促进白细胞介素及干扰素的大量释放，起到杀伤或抑制肿瘤细胞生长的药理作用，目前紫杉醇已广泛用于肿瘤疾病的治疗[8]。既往研究中关于紫杉醇参与乳腺癌免疫逃逸的临床文献报道较为少见，有相关研究认为，紫杉醇可有效抑制肿瘤细胞诱导产生的巨噬细胞免疫抑制作用，从而使得巨噬细胞恢复免疫细胞因子能力。

本研究结果显示，观察组治疗前、治疗中外周血CD4+CD25+Tr细胞水平、Th2细胞因子（IL-4、IL-10）表达水平明显高于对照组fP<0.05），观察组治疗后外周血CD4+CD25+Tr细胞水平较治疗前、治疗中明显降低（P<0.05），而与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）；观察组治疗前、治疗中Thl细胞因子（IL-12、IFN-¨表达水平及IFN-γ/IL-4明显低于对照组（P<0.05），观察组治疗后Thl细胞因子表达水平及IFN-γ/IL-4较治疗前、治疗后明显升高（P<0.05），与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。由此可知，紫杉醇可能具有抑制乳腺癌肿瘤免疫逃逸的作用机制。

参考文献

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