抗-HCV筛查反应性献血者的确证结果分析*

李莉华 韩雪峰 马印图

抗-HCV筛查反应性献血者的确证结果分析*

李莉华 韩雪峰 马印图

目的 分析无偿献血者抗-HCV筛查反应性标本的确证试验结果。方法随机收集无偿献血者抗-HCV筛查反应性标本284例，采用免疫印迹法（WB）进行确证试验。将检测结果结合献血者基本资料进行数据分析。结果对284例抗-HCV筛查反应性血液标本进行确证试验，其中：ELISA方法检测抗-HCV确证阳性率为49.82%；双试剂ELISA反应性与单试剂反应性标本确证阳性率的差异有统计学意义；初次献血者与重复献血者确证阳性率的差异、不同性别和不同年龄组确证阳性率的差异均有统计学意义。结论采供血机构应开展筛查反应性献血者的确证试验，和/或补充试验，尤其是单试剂反应性的献血者和重复献血者，减少献血队伍的流失。

抗-HCV 免疫印迹法 酶联免疫法

丙型肝炎病毒（ hepatitis C virus，HCV）为丙型肝炎的病原体，输血传播是其重要传播途径之一［1］。为降低临床输血后感染HCV的残余风险，采供血机构多采用敏感度较高的两种不同厂家的ELISA筛查试剂，对献血者进行抗-HCV常规筛查。其筛查结果存在一定程度的假阳性，会造成无偿献血者队伍的流失。本文分析了不同特征人群的抗-HCV筛查反应性献血者的免疫印迹（WB）确证情况，为采供血机构制定适宜的献血者招募、血液筛查策略和献血者归队机制提供依据。现报告如下。

材料与方法

1 标本来源 随机抽取河北省血液中心献血者抗-HCV筛查反应性标本284例，其中使用2个不同ELISA试剂厂家检测的双试剂反应性标本135例、单试剂重复反应性标本149例，包括灰区（0.7≤S / CO＜1）标本5例。217例为初次献血者、67例为重复献血者，其中男性168例、女性116例。

2 试剂与仪器 抗-HCV检测试剂：HCV抗体诊断试剂盒（北京万泰，批号C20130711、C20140101等；北京金豪，批号2013071017、2013121027等）；确证试剂：HCV抗体诊断试剂盒（免疫印迹法）HCV Blot 3. 0（新加坡MP Biomedicals Asia Pacific Pte，Ltd 公司，简称MP，批号AD5002）。所有试剂均为批批检合格且在有效期内使用。STAR全自动加样仪（瑞士HAMILTON），FAME酶免全自动分析系统（瑞士HAMILTON），洗板机（TECAN Columbus）；离心机（SORVALL ST 40R ）等，现代SHINENOW实验室管理软件。

3 ELISA检测及判定规则 均严格按照试剂盒说明书操作，采用2种ELISA试剂检测血液标本抗-HCV，2种试剂均反应性，判为该检测项目不合格；1种试剂有反应性或处于灰区的标本（即ELISA单试剂反应性标本），则进行该试剂的双孔复试，1孔有反应性即为该检测项目不合格。

4 WB确证试验 实验操作均严格按照试剂盒说明书，根据说明书判断试验结果，无任何条带阳性，该标本视为阴性；只有1 条带阳性，定义为不确定结果；2 条带以上阳性或单独核心抗原条带≥2+，标本视为阳性。

5 统计学处理 采用χ²检验进行率的比较。

结 果

1 抗-HCV筛查双试剂反应性和单试剂反应性标本的确证结果 对284例抗-HCV筛查反应性标本进行WB确证试验，阳性符合率为49.82%（142/284）；双试剂反应性标本确证阳性率与单试剂确证阳性率比较，差异有统计学意义。结果见表1。

2 不同厂家试剂筛查抗-HCV反应性的确证结果试剂1和试剂2确证阳性率比较，差异无统计学意义。结果见表2。

3 抗-HCV筛查双试剂反应性标本的确证结果 双试剂反应性S/CO均大于5.0与至少一种试剂S/ CO≤5.0且大于2.0，及S/CO≤2.0且≥0.7标本的确证阳性率比较，差异有统计学意义。见表3。

4 不同类型献血者的确证结果 初次和重复献血者、不同性别以及不同年龄献血者的确证阳性率比较，差异均有统计学意义。结果见表4。

表1 284例HCV筛查反应性标本的确证结果

表2 不同厂家ELISA试剂的确证结果

表3 135例HCV筛查双试剂反应性标本的确证结果

表4 抗-HCV筛查反应性献血者的确证结果

讨 论

《血站技术操作规程》中要求：可以选用2种不同厂家的试剂对献血者进行抗-HCV酶联免疫筛查。为降低输血后感染HCV残余风险、提高检测质量，采供血机构多选择灵敏度高、特异性强的试剂进行检测。目前，国内外丙肝抗体试剂的特异性和灵敏度均有很大提高，绝大多数可达到我国国家标准，在血源筛查、阻断HCV传播中起到很大作用，但也存在个别漏检及非特异反应现象［2］。尤其是用于低危HCV 感染人群（ 流行率＜10%） 的检测，其结果仍然存在相对高的假阳性［3，4］。本研究结果提示采用ELISA 法进行抗-HCV血液筛查，存在一定程度的生物学假阳性。单试剂反应性献血者的确证阳性率明显低于双试剂确证阳性率。ELISA法检测抗-HCV具有较高的灵敏度，国外报道假阳性率大于 26%，有的甚至高达50%以上［3，5］，本文数据与之较接近。造成抗-HCV ELISA 假阳性有多种原因，如：高IgG 血症、类风湿因子干扰、超氧化物歧化酶（SOD）干扰、试剂制备环节中HCV 抗原不纯等。不同厂家试剂均存在假阳性结果，同时也有结果确证阳性，说明单一试剂检测存在抗-HCV漏检的可能。因此，血站应建立反应性献血者的相应确认程序，尤其是建立对单试剂反应性献血者的评估、确认体系。

WB确证结果与ELISA 法筛查抗-HCV结果的S/CO值具有相关性，国内外有多个针对不同人群抗-HCV ELISA S/CO 值与确证试验的研究，均认为两者存在相关性［6-9］。抗-HCV确证阳性情况可通过抗-HCV的S/CO值预测，其确证阳性预期值与S/CO值成正比。

不同特征人群的献血者，其WB确证情况存在差异，初次献血者的确证阳性率显著高于重复献血者。所谓重复献血者指曾在本中心献过血液，检测结果合格，其再次献血时定义为重复献血者；献血者首次在本血液中心捐献血液（全血或成分血），则定义为初次献血者。重复献血者经过多次体格检查和血液检测[6]，属于低危献血人群，通常低危人群中的假阳性率较高[10]。采供血机构更应对重复献血者开展确证工作。女性献血者WB确证阳性率高于男性的原因有待进一步研究。不同年龄组抗-HCV反应性献血者确证阳性率存在差异，阳性率随年龄增长而增高，≥46岁龄组最高，与各年龄段HCV感染率不同有关。据谢守凤[11]等报道：不同年龄组HCV阳性检出率的差异有统计学意义，≥50岁年龄组感染率最高。HCV感染率越高，其确证阳性率也就相应增高。因此，对于抗-HCV反应性的低龄组献血者及重复献血者实施屏蔽，其假阳性和误判的可能性更高。对于采供血机构而言，为保证血液安全，应采取多种方式以降低输血感染HCV残余风险，如增加HCV的核酸检测等，与此同时还应为献血者提供献血后续服务，对抗-HCV筛查反应性的献血者开展确证和/或补充试验，消除假阳性结果给献血者带来心理压力和诸多不便，以利于采供血事业的可持续性发展。

1 Verbeeck J，Maes P，Lemey P，et al． Investigating the origin and spread of hepatitis C virus genotype 5a［J].J Virol，2006，80（ 9） ： 4220-4226．

2 谷金莲，祁自柏，刘艳，等. 丙型肝炎抗体确证试剂检测结果的分析［J］．中国生物制品学杂志，2010，23（5）：514-516.

3 Centers for Disease Control and Prevention．Guidelines for laboratory testing and result reporting of antibody to hepatitis C virus[J]．MMWR，2003，52（3）：5-6.

4 Contreras AM．False and true positive HCV antibody．Diagnostic Strategies［J］．Rev Invest Clin，2006，58（ 2）：153-160．

5 Kesli R，Ozdemir M，Kurtoglu MG，et al. Evaluation andcomparison of three different anti-hepatitis C virus antibody testsbased on chemiluminescence and enzyme-linked immunosorbent assay methods used in the diagnosis of hepatitis C infections inTurkey［J］. J Int Med Res，2009，37（5）：1420-1429.

6 Ren FR，Lv QS，Zhuang H，et al．Significance of the signal-to-cutoff ratios of anti-hepatitis C virus enzyme immunoassays in screening ofChinese blood donors［J］．Transfusion，2005，45（ 11）：1816-1822．

7 林洪铿，江伟梅，周晓真，等．献血者ELISA 抗-HCV筛查反应性强度与RIBA确证阳性的相关性研究［J］．中国输血杂志，2010，23（ 8）：617-619．

8 许晓绚，王宋兴，陈云龙，等．抗-HCV ELISA S /CO比值与确证试验阳性的相关性探讨［J］．热带医学杂志，2011，11（ 7）：746-767．

9 Acar A，Kemahli S，Altunay H，et al．Thesignificance of repeat testingin Turkish blood donors screened with HBV，HCV and HIV immunoassaysand the importance of S /CO ratios in the interpretationof HCV/HIV screening test results and as a determinant for furtherconfirmatory testing［J］． Transfus Med，2010，20（ 3）：152-159．

10 刘宇宁，蔡菊英，刘晓音.血液筛查HBsAg、抗-HCV假阳性献血者归队的调查分析［J］．中国输血杂志，2012，25（3）：260-262.

11 谢守凤，刘顺江，谢强，等． 湖北枣阳市2010-2014年丙型病毒性肝炎流行病学调查［J］．公共卫生与预防医学，2015，26（4）：64-66.

Confirmation of Anti-HCV Screening-Positive Donor Samples in Blood Center

LI Li-hua，HAN Xue-feng，MA Yintu. Department of Laboratory in Hebei Province Blood Center 050071

Objective To analyze the confirmation test results of anti-HCV screening-positive samples of the blood donors.MethodThe 284 anti-HCV screening-positive donor samples were collected randomly. Western blotting（WB）test was used to confirm the results. The results were evaluated based on the data of WB test and personal information of the blood donors.Result49.82 percent of 284 cases of anti-HCV screening-positive donor samples were confirmed to be positvie. Compared with the confirmation results of positive samples screened by two round ELISA and positive samples screened by single round ELISA ，significant statistical differences were noted in positive rates. The confirmed positive rates between initial and repeated blood donations，genders and ages revealed significant statistical differences.ConclusionConfirmation or additional tests should be carried out for screening-positive donors，particularly in those screened by single round ELISA and repeated blood donors.

Anti-HCV Western Blot（WB） ELISA

R512.6+3 R446.61

A

1671-2587（2017）01-0046-04

2016-09-06）

（本文编辑：王敏）

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.01.013

*本课题受河北省卫生和计划生育委员会指令性课题（No. ZL-20140122）资助

050071 河北省血液中心检验科（李莉华，韩雪峰）；解放军白求恩国际和平医院输血科（马印图）

李莉华（1971-），女，河北石家庄人，副主任检验师，学士，主要从事输血相关传染病及血液安全方面的研究，（Tel）0311-87044310（E-mail）15931096399@163. com。