31例乙型肝炎病毒核酸检测阳性献血者跟踪调查

孙海英 范恩勇 许守广 黄文杰

31例乙型肝炎病毒核酸检测阳性献血者跟踪调查

孙海英 范恩勇 许守广 黄文杰

目的 了解扬州地区无偿献血者乙型肝炎病毒核酸检测阳性献血者的跟踪调查情况。方法对22518例献血者先经ELISA法两次检测及NAT一次检测；对本血站HBsAg ELISA法双试剂阴性或单试剂阳性而NAT检测为阳性的标本，再送江苏省血液中心进行罗氏核酸检测和乙肝“两对半”跟踪检测。对ELISA法HBsAg双试剂阴性核酸检测阳性献血者6个月后再进行跟踪检测。结果ELISA法双试剂阴性标本中上海科华NAT检测为阳性26例，占0.12%；OBI感染22例，HBV窗口感染期4例。OBI献血者的血液学特征以HBcAb为主，占100.0%，其次为HBeAb，占63.6%。31例送检标本乙肝“两对半”均出现HBsAg、HBsAb、HBeAb、HbcAb单项或合并阳性。结论核酸检测能够在一定程度上弥补ELISA方法学的局限性，有效缩短窗口期，减少漏检的发生，降低经输血途径传播疾病的风险，从而确保血液质量和输血安全。

乙型肝炎病毒表面抗原 核酸检测技术 酶联免疫法 隐匿性乙型肝炎病毒感染

当前，随着国家卫计委加强血站血液安全保障能力建设、全面推进血站核酸检测技术（Mucleic acids technology，NAT）实施方案的落实，NAT已在采供血机构全面开展及覆盖。作为ELISA法血液检测的有益补充，NAT有效缩短了病毒检测窗口期，降低输血传播病原体的残余风险，特别是对于隐匿性乙型肝炎病毒感染（Occult hepatits B virus infection，OBI）的检出发挥重要作用。HBsAg作为当前我国采供血机构血液筛查的常规项目之一，可有效切断HBV经输血感染，但由于存在病毒窗口期感染和无应答持续感染等造成病毒污染血液的残余风险，特别是隐匿性HBV感染，常规ELISA法无法检出HBsAg[1]。OBI不同于HBV“窗口期”感染，“窗口期”过后血清学HBsAg结果会转为阳性，而OBI则始终呈阴性（以目前的血清学检测手段），对于临床安全输血方面有可能产生潜在的HBV感染风险[2]。扬州地区于2015年1月全面开展血液NAT检测技术以来，取得了较好效果，现报告如下。

材料与方法

1 标本来源 所有标本均来自2015年1月23～8月31日扬州市中心血站无偿献血者血液标本，共计22 518例，年龄18～55岁，均符合《献血法》、《献血者健康检查要求》中献血者体检、献血前血液检测要求。

2 试剂与方法 所有标本均先经ELISA法两次检测及NAT一次检测；对HBsAg ELISA法双试剂阴性或单试剂阳性而NAT检测为阳性的标本，再送江苏省血液中心进行罗氏核酸检测和乙肝“两对半”跟踪检测。对ELISA法HBsAg双试剂阴性、核酸检测阳性献血者，6个月后再进行跟踪检测。ELISA法HBsAg“一检”采用珠海丽珠试剂，“二检”采用上海科华试剂；核酸检测试剂采用上海科华核酸试剂采用PCR-荧光法。江苏省血液中心进行跟踪标本检测，试剂采用罗氏核酸检测试剂、乙肝“两对半”试剂采用进口试剂。均严格按照试剂说明书操作，并在有效期内使用。

3 主要仪器与设备 FAME 2420全自动酶免分析仪（Hamilton公司，瑞士）、Microlab STAR CH-8全自动加样系统（Hamilton公司，瑞士）、Zenyth 340酶标仪（Biochrom Anthos公司，英国），ABI 7500荧光定量PCR仪（ABI公司，美国）等。

4 统计学处理 应用SPSS18.0软件进行统计分析，定性资料采用卡方检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

结 果

1 共检测22 518例标本，其中ELISA法阴性22 438例，阴性率99.65%，ELISA法阳性79例（一检单试剂阳性11例，二检单试剂阳性24例，双试剂阳性44例），阳性率0.35%。

2 22 518例献血者HBV核酸检测结果见表1。

表1 22 518例献血者HBV NAT检测结果

3 26例ELISA法HBsAg双试剂阴性核酸检测阳性献血者，6个月后再进行跟踪检测，ELISA法检测仍为双试剂阴性22例，考虑为OBI感染，OBI流行率为1∶1 020（22/22 439）；4例跟踪检测HBsAg转为阳性，考虑为HBV窗口期感染。

4 31例HBsAg ELISA法双试剂阴性（26例）或单试剂阳性（5例）经上海科华NAT检测阳性标本，送江苏省血液中心进行罗氏核酸检测及“两对半”检测，结果见表2。

表2 31例上海科华NAT阳性标本送检结果情况

讨 论

我国人群有较高的HBsAg携带者，尽管当前采供血机构已通过对献血者血液HBsAg进行筛查，较大程度地降低了HBV感染风险，提高了血液质量。但由于HBV感染窗口期、OBI的存在等，导致ELISA法HBsAg的漏检[3-6]，故此全面推进血站核酸检测技术在献血者中的应用就显得尤为重要了。

表1结果显示，ELISA法双试剂阴性标本中仍有0.12% NAT检测为阳性，说明相对于NAT检测技术，ELISA法仍存在窗口期漏检或OBI感染现象，跟踪检测结果显示，窗口期感染4例，OBI感染22例，扬州市无偿献血者OBI的流行率为1∶1 020（22/22 439），高于深圳地区，低于厦门和莱芜地区，可能与各地人群的HBV感染率相关[7]。本地区OBI献血者的血液学特征以HBcAb为主（占100%，22/22），其次为HBeAb（占63.6%，14/22），未发现有全阴性的OBI标本，与文献[2]报道基本相符。由于OBI的发生机制仍不明确，更多学者认为可能与pre-S/S区基因变异有关[1，2]。由于实验条件的限制，本研究未能针对本地区OBI标本进行pre-S/S区基因的序列分析。另外，ELISA法单试剂阳性标本，也有0.02%的NAT检测阳性率，说明ELISA法单试剂存在漏检情况；对于ELISA法双试剂阳性标本，NAT检测100.0%为阳性，说明双试剂ELISA法阳性标本与核酸检测结果一致，今后可考虑对ELISA法双试剂阳性标本不建议再进行NAT检测，可降低实验室感染机会及减少核酸试剂的浪费。

表2结果显示，本血站31例HBsAg ELISA法双试剂阴性或单试剂阳性而上海科华NAT检测阳性标本中，经江苏省血液中心罗氏NAT检测为阳性29例，NAT检测一致率93.5%（29/31）。送检标本乙肝“两对半”跟踪结果显示，29例罗氏NAT阳性标本均出现HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBcAb单项或合并阳性，2例罗氏NAT阴性标本也均伴有HBsAb、HBcAb阳性，且有1例伴HBeAb阳性，可能为乙肝感染恢复期[3]。HBcAb检测阳性率为100.0%（31/31），说明这些献血者捐献的血液都存在输血风险，均不适合发往临床。

综上所述，核酸检测作为当前最灵敏和准确的检测方法，能够在一定程度上弥补ELISA方法学的局限性，有效缩短窗口期，减少漏检的发生，降低经输血途径传播疾病的风险。同时核酸检测并不能完全取代ELISA法，只能作为有益补充，从而确保血液质量和输血安全。

1 容莹，郑欣，叶贤林，等.无偿献血者隐匿性乙型肝炎病毒Pre-S/S区变异的研究[J].中国输血杂志，2011，24（7）：565-571.

2 王东;邓雪莲;周璐，等.大连地区无偿献血者隐匿性乙型肝炎病毒感染pre-S/S区基因分析[J].中国输血杂志，2015，28（1）：26-31.

3 胡贵宾，释艳华，李霜云，等.襄阳地区无偿献血者乙型肝炎病毒核酸检测效果分析[J].临床血液学杂志（输血与检验），2014，27（5）：875-878.

4 旷洁平.应用核酸检测献血者乙型肝炎病毒的效果分析[J].现代诊断与治疗，2015，26（10）：2344-2345.

5 刘丽，王明民，赵林.隐匿性乙型肝炎病毒感染的研究进展[J].疑难病杂志，2013，12（7）：568-571

6 王铁兵，陈海霞，杨飞鹏，等.深圳市隐匿性乙型肝炎病毒感染现状和感染因素分析[J].中国公共卫生管理，2013，29（1）：58-60.

7 秦伟斐，田耘博，李小红，等.献血者乙型肝炎病毒筛查结果分析[J].中国输血杂志，2015，28（6）：679-683.

A Follow-up Survey of 31 Cases HBV DNA Positive Cases of Blood Donors

SUN Hai-ying，FAN En-yong，XU Shou-guang，et al. Yangzhou Blood Center of Jiangsu Province Yangzhou，225007

Objective To track the voluntary blood donors who showed positive hepatitis B virus DNAs to ensure blood transfusion safety.Methods22 518 cases of blood donors were subjected to repeated ELISA testing and NAT detection. The NAT-positive samples that showed negative HBsAg by repeated ELISA but positive HBsAg by single ELISA were checked by both DNA detections and routine profile tests for HBV infection. The individuals with negative repeated ELISA but positive DNA detection were followed-up after 6 months of primary examinations.Results0.12 % cases presented positive NAT although they were negative when tested by repeated ELISA. Among them，22 cases were OBI infections and 4 fell in window phase of HBV infection. All of the OBI donors were characterized by positive HBcAb（100%），followed by HBeAg （63.6%）.All of the 31 samples exhibited single or combined positivity of routine profile tests for HBsAg，HBsAb，HBeAb，or HbcAb.ConclusionDNA detection may cover the shortage of ELISA，shorten the window phase，and avoid misdiagnosis so as to reduce the risk at transmission of infectious diseases.

Hepatitis B virus surface antigen Nucleic acid detection technology ELISA Latent hepatitis B virus infection

R446.61 R392.11

A

1671-2587（2017）01-0053-03

2016-10-12 ）

（本文编辑：王敏）

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.01.015

225007 江苏省扬州市中心血站

孙海英（1977–）女，内蒙古赤峰市人，主管技师，学士，主要从事血液免疫学检验及输血技术研究，（Tel）18936220186。

范恩勇，（Tel）18936220169（E-mail）fanenyong@163.com。