高效液相色谱法同时测定植物油中BaP、BHT、BHA、TBHQ的含量

晏晓清，曹 丹，张艳芳，何新安，李玉强

黄冈大别山检测认证有限公司

高效液相色谱法同时测定植物油中BaP、BHT、BHA、TBHQ的含量

晏晓清，曹 丹，张艳芳，何新安，李玉强

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建立同时测定植物油中BaP、BHA、BHT、TBHQ的固相萃取-高效液相色谱分析方法。样品溶解后固相萃取净化，C18色谱柱分离，甲醇和水为等度洗脱，DAD检测。最佳条件下，方法的回收率为80.0%～110.0%。该方法所用设备耗材常见，操作简单、成本低，可用于植物油中BaP、BHA、BHT、TBHQ的测定。

固相萃取；反相高效液相色谱；植物油

BHA（叔丁基羟基茴香醚）、BHT（二叔丁基羟基甲苯）、TB⁃HQ（特丁基对苯二酚）是我国允许在食品中使用的3种常见抗氧化剂,可中断油脂氧化过程,达到抗氧化、防酸败、防变色的目的。过量摄入会对人体的肝、脾、肺等器官产生不利影响。苯并（a）芘（BaP）是油脂生产工艺的副产物，其在人体内的代谢物二羟环氧苯并芘是直接的强致癌物。

HPLC测定植物油中BHA、BHT、TBHQ、BaP的方法很多，但大部分都是将抗氧化剂、BaP分开检测。四种物质一起分析的，近年来也有报道。前处理用到昂贵的凝胶渗透色谱，成本较高。

本实验拟采用固相萃取法对样品进行净化，HPLC法对植物油中的BaP、BHA、BHT、TBHQ同时测定，以建立一种操作简单、快速、成本低廉的植物油中BaP、BHA、BHT、TBHQ同时测定的分析方法。

1、材料与方法

1.1 主要仪器和试剂：

Agilent 1200液相色谱仪（DAD），固相萃取小柱ProElut ALN22g/60mL，超声波震荡器；旋转蒸发仪；固相萃取仪。

BaP（国家标准物质中心，100mg/L）、BHA（纯度97.0%）、BHT（纯度99.5%）、TBHQ（纯度99.0%），乙腈、正己烷、甲醇、乙酸乙酯均为色谱纯。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱SpursilTM C18，5μm，250×4.6mm；流动相甲醇：水=95：5，柱温30℃；进样量10μL；波长230nm。

1.2.2 标准溶液的配置

分别准确称取500.0mgBHA、BHT、TBHQ于100mL容量瓶中,甲醇溶解、定容为5.0mg/mL的储备液，4℃保存。各取四种单一储备液混合，甲醇稀释至50mL配置成混合标准使用液，浓度为：BHA、BHT、TBHQ5.00mg/L,BaP 2.00 mg/L。

1.2.3 样品处理

提取：用玻璃烧杯称取0.4g试样（精确到1mg），用5mL正己烷溶解稀释，待净化。

净化：30mL正己烷活化小柱后，上样，50mL（乙腈：正己烷1: 1）混合溶剂洗脱（分层不影响结果），收集淋洗液，浓缩后定容至1mL,过滤膜后待测。

2、结果与分析

2.1 淋洗液的选择

先后尝试用正己烷和乙酸乙酯、正己烷和甲醇、正己烷和乙腈分别按照1:1、1:2、1:3、1:4的比例混合作为淋洗液，经方法分析后回收率见表1（未在表中列出者回收率过低）。最终选取乙腈：正己烷1:1为淋洗液。

表1 BHA、BHT、TBHQ、BaP的回收率

2.2 色谱条件的选择

当采用流动相甲醇-水（97:3）洗脱时，TBHQ与BHA部分重叠；甲醇-水90:10时，TBHQ与BHA完全层叠。甲醇-水95:5，两者可完全分开，如图1。

图1 4种目标化合物混合标准溶液的HPLC色谱图

3、结论

建立了固相萃取净化，HPLC-DAD同时检测植物油中BaP和3种抗氧化剂（BHA、BHT、TBHQ）的方法。样品经溶解、固相萃取净化，HPLC等度洗脱，HPLC-DAD同时分析出植物油中四种化学物质含量。所用设备耗材常见，且操作简单、成本低，利于应用推广。