蒸发光检测器测定黄芪药材中黄芪甲苷的含量

时间：2024-04-25

卯升宇陈宇赵瑜

摘要：目的：建立一个用蒸发光检测器测定黄芪药材中黄芪甲苷含量的方法。方法：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ;以乙腈-水（36：64）为流动相，流速1.0ml/min;柱温30℃;用蒸发光散射检测器检测（ET：100℃、NT：40℃、氮气流速：1.60SLM、增益：1）。结果：精密度试验、重复性试验、准确度试验测试结果均能满足要求，质控结果满意。结论：该方法简便、准确，可用于黄芪药材中黄芪甲苷的质量控制。

关键词：黄芪;黄芪甲苷;蒸发光检测器;方法确认

黄芪甲苷是黄芪中的标志有效成分，收载于《中国药典》2015版一部中，本实验在药典的基础上，优化黄芪甲苷含量测定中蒸发光检测器的具体实验条件，建立一个适用于本实验室的黄芪甲苷HPLC-ELSD 含量测定方法。

1.仪器与试药

1.1高效液相色谱仪：

美国安捷伦1260高效液相色谱仪。

1.2试药甲醇，色谱级;乙腈，色谱级;氨水，分析纯;乙醇，分析纯;正丁醇，分析纯;超纯水，自制。

黄芪甲苷标准品，来源中国食品药品检定研究院。

1.3天平：电子天平（0.1mg /0.01mg/0.001mg）

2.方法与结果

2.1供试品制备参照《中国药典》2015年一部“黄芪”【含量测定】项下操作。

2.2色谱条件的优化：

鉴于实验室条件的考虑，选取流动相比例、飘移管温度（ET）和雾化器温度（NT）作为主要因素通过正交设计进行考察。正交试验设计表L9（34）如下：

采用直观分析法-极差分析法对上述正交试验的结果进行分析，确定因素主次，遴选出优水平，最终确定色谱条件为飘移管温度：100℃、雾化温度：40℃、流动相比例（乙腈：水-36：64）。

2.3精密度试验：

分别精密吸取黄芪甲苷对照品溶液（浓度为：0.281976mg/ml）各10μl，按测定方法重复进样6次，测定峰面积值。各次测得的峰面积值分别是593.8、593.5、591.3、588.9、588.7、581.6，平均值为589.6，相对标准偏差RSD为0.4%。相对标准偏差小于2.0%，说明仪器精密度良好。

2.4 线性关系与线性范围考察

精密量取按上述对照品溶液制备方法制备的浓度为1.893008mg/ml的对照品储备液，分别按照0.5ml→10ml、0.5ml→5ml、1ml→5ml、2ml→5ml、3ml→5ml、原液将溶液稀释成浓度分别为0.0946504mg/ml、0.1893008mg/ml、0.3786016mg/ml、0.7572032mg/ml、1.1358048mg/ml、1.893008mg/ml的对照品系列溶液，分别取10μl注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积;以峰面积的log10的值为纵坐标，以黄芪甲苷进样量的log10的值为横坐标作线性回归，绘制标准曲线。得到回归方程：y=1.464x+2.1413（R2=0.999）。试验表明，黄芪甲苷在0.9465μg～18.9301μg之间呈良好线性关系。

2.5 检测限的确定

取一定浓度的对照品溶液，精密量取10μl注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，信噪比为2.8：1，满足信噪比3：1为最低检测限的要求。

2.6定量限的确定

取一定浓度的对照品溶液，精密量取10μl注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，信噪比为10.3：1，满足信噪比10：1为定量限的要求。

2.7重复性试验：

取批号为170202的黄芪药材，取供试品6份，依法测定。同时，取黄芪甲苷对照品溶液同法测定，分别计算出黄芪甲苷含量，测定结果相对标准偏差RSD为1.5%（小于2.0%），说明本方法在本实验室内重复性好。

2.8加样回收率试验（准确度试验）

采取全程加标法。取已备黄芪药材4g，精密称定，同时再取6份同一批药材2g，精密称定，分别精密添加黄芪甲苷对照品（批号为110781-201515，标示量为93.0%）适量，按含量测定方法测定，以外标两点对数法算出药材和加标样品中黄芪甲苷的含量。以下式计算回收率，

回收率= ×100%

试验结果，平均回收率为106.7%（RSD=1.2%）。结果符合药典规定，表明本法適用于本实验室。

3.结论

通过对《中国药典》2015版一部“黄芪”【含量测定】方法进行系统适用性试验、精密度试验、线性关系及范围考察、检测限、定量限、重复性试验、准确度试验（加样回收试验），各项试验测试结果均能满足要求，仪器性能稳定，质控结果满意，可以作为黄芪甲苷含量的一种测定方法。