夏至草的化学成分及抗炎活性研究

朱兆宇，曹璐

信阳职业技术学院

夏至草的化学成分及抗炎活性研究

朱兆宇，曹璐

信阳职业技术学院

夏至草又名白花夏枯草、小益母草，分布广泛，资源丰富。夏至草味苦、性平，广泛应用于中医临床医学。本文对夏至草的化学成分进行了分析，研究表明：夏至草化学成分复杂，具有20多种化合物，主要包括苯乙醇苷、半日花烷二萜、黄酮等。在了解夏至草化学成分的基础之上，对夏至草所含的15种半日花烷二萜化合物进行炎症体外筛选以分析夏至草抗炎活性。通过实验得到夏至草中四种具有抗炎活性的化合物，以期对夏至草的临床应用提供一定的参考。

夏至草；半日花烷二萜；抗炎；脂多糖

夏至草又名白花夏枯草、小益母草，广泛分布于各个地区，其味苦、性平。可以作为妇科用药治疗痛经、月经不调等，同时可以作为消炎用药治疗慢性肾炎等疾病。李俊杰等人通过急性微循环障碍大鼠模型，发现夏至草醇提物能够有效抑制大鼠各脏器组织NO的生成以及一氧化氮合酶（NOS）的活性表达，侯利亚等人也通过实验得出了类似的结论。无论从实践角度还是理论角度都能看出夏至草具有抗炎活性。但是对于夏至草的化学成分研究不够充分细致，仅知道包括半日花烷二萜类化合物、苯乙醇苷类、植物缁醇类等几类，对于具体化合物种类不甚明了。因此为了阐明夏至草的抗炎活性机理，需要对夏至草的化学成分进行细致研究与分析。本文通过组织实验对夏至草中的半日花烷二萜类化合物进行了分离与分析，得到了半日花烷二萜类化合物的具体成分，以此为基础进一步分析了具有抗炎活性的半日花烷二萜类化合物种类，阐明了夏至草抗炎活性机理。

一、材料和方法

1 实验材料

1.1 试剂与溶液

细菌脂多糖（LPS,Escherichia coli,serotype 055∶B5）；丙酮；石油醚；二氯甲烷；茴香醛试液；牛血清蛋白；DMEM培养基。

1.2 仪器

Acculab电子天平；酶标仪(TECAN,Mannedorf,Switzerland)；Waters2695高效液相色谱仪；MPA100显微熔点仪。

2 实验方法

2.1 夏至草化学成分的提取

将夏至草（3g）洗干净，待干燥后粉碎，然后用丙酮溶液（20L）浸泡48小时，得到90g丙酮提取物，用浓度为90%的甲醇溶解丙酮提取物，然后先后用正己烷、二氯甲烷萃取，最终得到二氯甲烷提取物27g，提取物经减压桂胶柱色谱（200-300目）,用正已烷-乙酸乙醋系统(4∶1一0∶1)进行梯度洗脱,得到10个流份(A-J)。对各流份分别经Sephadex LH-20柱色谱，以不同比例的二氯甲院-甲醇作为洗脱剂洗脱，得到的流份经半制备液相,以乙腈-水（53：47）为流动相，得到各种化合物。

2.2 建立炎症模型

为了分析夏至草的抗炎活性，需要建立炎症模型来检验夏至草的抗炎活性。本文通过脂多糖（LPS）诱导BV-2小胶质细胞来构建炎症模型。BV-2小胶质细胞培养时使用DMEM培养基，加入链霉素（100μg/ml）、牛血清蛋白、青霉素（100μg/ml），培养箱环境为温度37度、二氧化碳5%、空气95%，培养时间为24h。将脂多糖以1mg/ml的浓度溶解于蒸馏水中，储存在-20°C的环境中以作备用。实验时，将脂多糖溶液稀释到0.1μg/ml诱导BV-2小胶质细胞，从而建立炎症模型。

2.3 一氧化氮分析

本文通过Griess试剂来测量细胞上清液中亚硝酸盐的含量，因为亚硝酸盐是一氧化氮稳定的氧化终产物，因此可以通过亚硝酸盐的含量来评估一氧化氮的含量。阳性对照组为槲皮素(IC50为10.02/μM)。将上述夏至草所提取出的化合物通过DMSO制作成储备溶液，实验时取DMSO储备溶液处理经LPS诱导的小胶质细胞，处理完毕后取制其中的细胞上清液100μl与等量的Griess re⁃agent（1%对氨基苯磺酰胺）混合。并置于96孔板中。在微孔板读数器上检测550ran下的吸收值,使用亚硝酸纳制作标准曲线。

二、结果

通过对夏至草的理化分析，对二氯甲烷萃取的丙酮溶液进行现代色谱分离，鉴定出15种半日花烷型二萜化合物，结果如表1所示：

表1 夏至草化合物成分

将分离出来的夏至草化合物用培养的炎症模型进行筛选，通过检测化合物对一氧化氮的抑制情况来判断化合物的抗炎症特性。实验结果表明：夏至草素E C23H36O7、leoleorin A（C22H34O5）、leo⁃leorin B（C20H26O2）、夏至草素G（C22H32O6）都能在一定程度上抑制小胶质细胞生成一氧化氮。这也充分证明了夏至草具有抗炎症活性。

三、讨论

夏至草广泛分布于各个地区，资源丰富，具有改善淋巴循环与血液循环、心肌保护、抗氧化、抗炎等药理活性，因此在中医药学临床应用十分广泛。但是对于夏至草的化学成分，以及起到相应药理活性的化合物并不是十分明了。本文就夏至草的化合成分，分离的得到15种半日花烷型二萜化合物，半日花烷型二萜化合物本身具有松弛血管、解痉镇痛的生物活性，这与上述夏至草的药理活性相一致。为了研究夏至草的抗炎活性，对15种半日花烷型二萜化合物进行体外筛选，得到了具有抗炎作用的化合物，这对阐明夏至草药性的物质基础具有重要的意义。综上所述：夏至草资源十分丰富，具有多种药理活性，广泛应用于药学临床，因此对于夏至草的化学成分以及药理作用的物质基础的研究十分必要，这也为夏至草就进一步的应用与推广提供了可靠的科学依据。

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朱兆宇（1989-），女，汉族，河南信阳人，单位：信阳职业技术学院，研究方向：生物化学与分子生物学。