高效液相色谱法测定金果榄中盐酸药根碱与盐酸巴马汀含量

齐政涛

摘 要：本文采用高校液相测定了金果榄中盐酸巴马汀和盐酸药根碱的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um），以乙腈-25mmoL·L-1庚烷磺酸钠和50mmoL·L-1磷酸二氢钾溶液（含0.14%三乙胺，磷酸调pH至3.0）（28：72）为流动相，检测波长为348nm；盐酸药根碱在10～40μg·mL-1范围内呈良好的线性关系；盐酸巴马汀在50～300μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。盐酸药根碱和盐酸巴马汀的平均回收率分别为99.8%、99.6%，RSD为0.79%（n=6）、0.85%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于金果榄中盐酸药根碱和盐酸巴马汀的含量测定。

关键词：金果榄；盐酸药根碱；盐酸巴马汀

金果榄别名为金楛榄（《药性考》）、金苦榄（《柑园小识》）、地苦胆（《四川中药志》）、金牛胆（广州部队《常用中草药手册》）、天鹅蛋（《分类草药性》）、黄金古（《广西中草药》）、九龙胆（《南方主要有毒植物》）、金榄（《陆川本草》）、雪里开（《江西草药》）等。金果榄，性味苦寒，有清热解毒，利咽，止痛之功效。《药性考》记载：“解毒。咽喉痹急，口烂宜服。疽痈发背，焮赤疔瘯，蛇蝎虫伤，磨涂。治目痛，耳胀，热嗽，岚瘴，吐衄，一切外症。”金果榄常用于咽喉肿痛、痢疾、痈疽疔毒、泄泻、脘腹疼痛。金果榄含青牛胆苦素（tinosporine，columbin）、巴马亭（palmatine）、盐酸药根碱、盐酸巴马汀等成分。本文采用高校液相测定了金果榄中盐酸巴马汀和盐酸药根碱的含量。

1 仪器与试药

HH-601超级恒温水浴（江苏金坛市亿通电子有限公司）；320 XT 电子分析天平（上海精科天美贸易有限公司）；U-1901 双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；EX1600四元低压梯度液相色谱仪（南京科捷分析仪器有限公司）；TBL10-250C双频加热型超声波清洗器（天津市恒奥科技发展有限公司）；Histoon Lab I-05实验室超纯水器（科尔顿（中国）有限公司）。盐酸药根碱和盐酸巴马汀对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（连云港轩源化工有限公司）、醋酸（上海方野化工有限公司）、甲醇（连云港轩源化工有限公司）、磷酸二氢钾（上海方野化工有限公司）、十二烷基硫酸钠（连云港轩源化工有限公司）、庚烷磺酸钠（连云港轩源化工有限公司）。

2 含量测定

2.1 色谱条件

依据查阅文献及考查的结果[1-5]，确定色谱条件如下。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈-25mmoL·L-1庚烷磺酸钠和50mmoL·L-1磷酸二氢钾溶液（含0.14%三乙胺，磷酸调pH至3.0）（28：72）；检测波长为348nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按盐酸巴马汀峰计算应不得低于2000。

2.2 供试品溶液的制备

取金果榄适量，精密称量，置圆底烧瓶中，加甲醇适量，回流提取1小时，放置至室温，过滤，滤液转移至25毫升容量瓶内，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

2.3 对照品溶液的制备

分别精密称取盐酸巴马汀和盐酸药根碱对照品2mg、15mg，置100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4 标准曲线的制备

制备浓度为10μg·mL-1、15μg·mL-1、20μg·mL-1、25μg·mL-1、30μg·mL-1、35μg·mL-1、40μg·mL-1的盐酸药根碱对照品溶液，制备浓度为50μg·mL-1、100μg·mL-1、150μg·mL-1、200μg·mL-1、250μg·mL-1、300μg·mL-1的盐酸巴马汀对照品溶液。分别按盐酸药根碱、盐酸巴马汀的测定参数继续测定。以吸光度为横坐标，浓度为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，盐酸药根碱在10～40μg·mL-1范围内呈良好的线性关系；盐酸巴马汀在50～300μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

依照2.3项下制备对照品溶液，分别精密吸取盐酸药根碱和盐酸巴马汀对照品溶液重复测定6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD分别为0.76%和0.73%。结果表明，本实验精密度良好。

2.6 重现性试验

分别称取同批金果榄样品6份，分别依照2.3项下供试品制备方法制备供试品，按质量标准含量测定项下方法测定含量，并计算样品的RSD值，RSD值为0.85%，0.81%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。

2.7 稳定性试验

依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4h进样测定，供试品盐酸药根碱和盐酸巴马汀峰面积的RSD分别为0.73%和0.82%。结果表明盐酸药根碱和盐酸巴马汀至少在4h内稳定。

2.8 回收率试验

采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，分精密添加一定量的盐酸药根碱和盐酸巴马汀对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率。6次测定的平均回收率分别为99.8%和99.6%，RSD分别为0.79%和0.85%。

2.9 样品含量测定

依照上述含量测定方法，测定金果榄三批样品中盐酸药根碱和盐酸巴马汀的含量，结果三批样品的盐酸药根碱和盐酸巴马汀含量分别为4.3mg·g-1、4.5mg·g-1、4.2mg·g-1和8.1mg·g-1、8.2mg·g-1、8.3mg·g-1。

3 讨论

分别考察乙腈-1.0%醋酸溶液（32∶68），甲醇-乙腈-水（40：30：30），水-乙腈（50∶50，每100mL中含磷酸二氢钾0.34g，十二烷基硫酸钠0.17g），乙腈-0.05mol/L KH2PO4缓冲液（30：70），乙腈-0.5%磷酸（20∶80），50mmol.L-1磷酸二氢钠（pH4.6）-乙腈（70∶30），乙腈-25mmoL·L-1庚烷磺酸钠和50mmoL·L-1磷酸二氢钾溶液（含0.14%三乙胺，磷酸调pH至3.0）（28：72）洗脱，结果以乙腈-25mmoL·L-1庚烷磺酸钠和50mmoL·L-1磷酸二氢钾溶液（含0.14%三乙胺，磷酸调pH至3.0）（28：72）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-25mmoL·L-1庚烷磺酸钠和50mmoL·L-1磷酸二氢钾溶液（含0.14%三乙胺，磷酸调pH至3.0）（28：72）为流动相。

参考文献

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